国家自然科学基金(C0302050102)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：何维崔莲仙赵爱志吴小兵曾庆岭更多>>
- 相关机构：基因技术股份有限公司华中科技大学中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TNFR1BP/IgGFc融合蛋白载体的构建、表达及其生物学活性研究
- 2008年
- 目的构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和Western blot法检测转染细胞的培养上清中TNFR1BP/IgGFc融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验、细胞毒抑制实验检测融合蛋白对TNFR1的封闭作用。结果经PCR和核苷酸序列测定证实TNFR1BP基因正确插入质粒pIG/3C。ELISA检测证实,在转染细胞培养上清中有融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验和细胞毒抑制实验证实融合蛋白能结合L929细胞表面的TNFR1,并能抑制分泌型肿瘤坏死因子α(sTNF-α)介导的细胞毒作用。结论成功构建并实现TNFR1BP/IgGFc融合蛋白真核表达;体外实验证实此融合蛋白可通过与细胞表面TNFR1结合,从而拮抗sTNF-α介导的生物学效应。
- 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α真核表达
- SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选被引量：2
- 2005年
- 目的利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体。方法利用RTPCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因,克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95%以上的N蛋白,然后以此蛋白包被25cm2组织培养瓶,对SARS单链抗体库进行先松弛,后严谨的筛选、富集,进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定。结果经过4轮的筛选、富集,得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18。结论在对SARS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用。
- 赵爱志杨宇袁振华董小岩连忠辉崔莲仙吴小兵何维
- 关键词：SARS冠状病毒N蛋白单链抗体库SARS病毒N蛋白基因PBV220
- TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和TNFR Ⅰ封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用被引量：3
- 2008年
- 目的:研究比较TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白(TNFR1BP/hIgGFc)和TNFR Ⅰ封闭肽(TNFR1BP)生物学特性及功能,为开发治疗TNF-α相关疾病的肽类药物奠定基础。方法:通过流式细胞术和细胞毒抑制实验检测TNFR1BP/hIgGFc和人工合成TNFR1BP对TNFRⅠ的封闭作用;通过RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术检测融合蛋白和封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用。结果:流式细胞术证实TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和人工合成TNFR Ⅰ封闭肽二者均能抑制TNF-α与细胞膜表面TNFR1的结合;RT-PCR结果显示二者均可明显抑制TNF-α诱导的IL-1β及IL-8等促炎细胞因子的mRNA表达;激光共聚焦显微镜显示二者均可明显拮抗TNF-α诱导的人单核细胞NF-κB核转位的发生。结论:TNFR1BP/hIgGFc和TNFR1BP均可与细胞表面TNFR Ⅰ结合,拮抗TNF-α介导的生物学效应。
- 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅
- 关键词：TNFRTNFRTNF-Α
- 抗人SARS病毒单链抗体库的构建被引量：7
- 2005年
- 目的:利用细胞内重组的方法,构建大库容量的人源性抗SARS病毒单链抗体(scFv)库,为筛选SARS病毒抗原的人源性抗体奠定基础。方法:取6例SARS康复患者的80mL外周血,分离淋巴细胞后提取总RNA。分离纯化mRNA并反转录成cDNA后,扩增抗体重链、轻链可变区基因片段。然后经重叠延伸PCR装配成scFv基因并克隆入噬粒载体pDAN5中,电转化大肠杆菌TG1构建初级抗体库。制备初级库噬菌体后,感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组制备次级抗体库。结果:初级库库容量为3×109,在大肠杆菌BS1365中重组后得到3×1011的次级抗体库。结论:细胞内重组方法的应用可使大库容量抗体库的构建变得简单易行。构建的抗SARS病毒单链抗体次库不仅接近人类天然抗体库的水平,而且多样性好,为筛选抗SARS病毒抗原的抗体提供了保证。
- 赵爱志彭建强曹晖康禹崔莲仙吴小兵何维
- 关键词：冠状病毒单链抗体库
