海外及港澳学者合作研究基金(31328014)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：刘志刚吴莹莹匡渤海杨小猛万倩更多>>
- 相关机构：深圳大学南昌大学蚌埠医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：海外及港澳学者合作研究基金深圳市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过敏性哮喘模型脱敏治疗前后小鼠肥大细胞的变化与其细胞因子的检测被引量：9
- 2014年
- 目的:制备粉尘螨粗抗原建立BALB/c小鼠哮喘模型,检测细胞因子并观察肥大细胞形态及脱颗粒的情况。方法:制备粉尘螨粗抗原,30只BALB/c小鼠随机均分为3组,阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和治疗组(C组)。A组始终使用PBS处理,B组和C组在第0、7和14天用50μg粉尘螨粗抗原+50μl明矾佐剂腹腔注射致敏。在第28天,A组和B组用PBS、C组用粉尘螨粗抗原(350μg/次)皮下注射免疫1周,隔天免疫1次,末次免疫1周后开始用50μg粉尘螨粗抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24 h后进行气道高反应检测。末次激发48 h后处死小鼠取血,对小鼠进行肺泡灌洗收集肺泡灌洗液(BALF),无菌摘取肺组织和脾脏,分别进行肺组织病理切片与脾细胞培养。检测BALF和脾细胞上清中IL-4、IL-10和IFN-γ细胞因子水平,血清中IgE、组胺抗体水平,进行HE染色和甲苯胺蓝染色观察肺部炎症细胞浸润程度和肥大细胞脱颗粒状况。结果:与B组相比,C组气道高反应性和肺部病理症状减轻(P<0.01)。C组BALF中细胞计数结果显示与B组相比细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少(P<0.01)。与B组相比,C组的肥大细胞脱颗粒情况明显减轻,细胞形态稳定。与B组(IgE:1.905)相比,C组血清中抗原特异性IgE抗体水平(IgE:1.278)明显降低(P<0.01)。BALF细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ水平检测结果显示,与B组相比,C组BALF中IL-4水平明显降低接近A组值(P<0.01),而IL-10与A、B两组相比有明显升高(P<0.01),C组的IFN-γ也高于A、B两组(P<0.01)。C组脾细胞上清中IL-4明显低于B组(P<0.01),而IL-10明显高于B组(P<0.01),IFN-γ也明显高于B组(P<0.01)。BALF和血清中组胺水平结果显示,在BALF中,C组与B组相比略低(P<0.05),而在血清中检测出的组胺有明显降低(P<0.05)。结论:过敏性哮喘模型脱敏治疗后小鼠肥大细胞脱颗粒情况被抑制。
- 姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚
- 关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞
- 粉尘螨Derf14基因克隆与分子特征的分析被引量：1
- 2015年
- 从纯培养的粉尘螨中,根据本课题组前期合成的尘螨基因序列,将扩增的Derf14分别克隆到pUC57载体中,经扩增后用SmaI双酶切将目的片段连接到pET-28a表达载体上得到重组质粒pET28aDerf14.在线软件ExPaSy,NCBI网站对测序结果进行分析.分析结果表明：获得的目的基因Derf14cDNA全长为5013bp.编码蛋白由1666个氨基酸组成.粉尘螨Derf14与屋尘螨序列比对同源性达95%,信号肽序列存在1-18个氨基酸,二级结构是由a螺旋（35.83%）﹑延伸链（17.17%）﹑无规则区（47%）组成.目的蛋白是一种卵黄蛋白原.
- 万倩钟政荣刘志刚
- 关键词：克隆生物信息学进化树
- 过敏性哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化被引量：2
- 2014年
- 目的观察粉尘螨粗抗原建立的Bal b/c哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化。方法将20只Bal b/c小鼠按随机数字表法分为2组:阴性对照组(A组,n=10),使用100μL PBS处理;哮喘模型组(B组,n=10),50μg粉尘螨粗抗原+50μL明矾佐剂分别在第0、7和14d腹腔注射致敏1次,第28天再用50μg粉尘螨抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24h测定气道高反应;48h处死小鼠进行眼球取血,进行肺泡灌洗并收集右肺的肺泡灌洗液(BALF),无菌取肺HE染色病理观察、甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒,制取脾细胞及粉尘螨粗抗原刺激培养。采用ELISA法测定BALF和脾细胞培养上清IL-4、IL-10和IFN-γ以及血清IgE、组胺抗体含量。结果与A组相比:B组气道高反应性和肺部病理显著加重(P<0.01);BALF细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增多(P<0.01);肥大细胞脱颗粒现象显著加重;血清抗原特异性IgE水平显著升高(P<0.01);BALF和脾细胞培养上清IL-4和IL-10水平显著升高(P<0.05或P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);BALF和血清组胺水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论过敏性哮喘模型中肥大细胞被活化。
- 姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚
- 关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞小鼠
- 粉尘螨Der f4基因的克隆和蛋白分子特征分析被引量：2
- 2014年
- 从深圳地区采集粉尘螨纯培养,提取总RNA,根据香港中文大学合成的尘螨基因序列并设计的引物,RT-PCR扩增出Der f4基因,克隆到pUC57载体后测序和进行生物信息学分析.将该目的基因克隆到pET-28a表达载体上得到重组质粒pET-28a-Der f4.用生物软件分析尘螨变应原Der f4序列.RT-PCR获得目的基因Der f4 cDNA全长为1 593 bp.推测编码蛋白由526个氨基酸组成,生物信息学分析表明,Der f4具有多种磷酸化位点,含有信号肽,为疏水性蛋白,包含淀粉酶抑制剂功能结构域.获得Der f4基因全长,其编码的细胞外疏水性蛋白可能具有淀粉酶抑制剂活性.
- 万倩陈献雄孙新钟政荣刘志刚
- 关键词：粉尘螨生物信息学克隆
