博士科研启动基金(20050307023)
- 作品数：1 被引量：15H指数：1
- 相关作者：牛明福申艳敏魏建超尚书文陈溥言更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人源抗菌肽LL-37在毕赤酵母中的高效表达及其活性检测被引量：15
- 2008年
- 根据GenBank CAA86115中的LL-37氨基酸序列,选择毕赤酵母偏好密码子,采用SOE方法合成了人源抗菌肽LL-37基因。所合成的LL-37基因全长为141bp,并在其N端引入kex2裂解位点,以保证表达抗菌肽具有天然N端。基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-LL-37。pPICZα-A-LL-37经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌LL-37于发酵上清液,其表达量为206mg/L。表达产物LL-37耐热性强,在100℃条件下40min内抗菌活性不变,煮沸3h以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示LL-37对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌CowanⅠ(Staphylococcus aureus)、致病性大肠杆菌K99(Enteropathogenic E.coli)和鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和1.56μg/mL。
- 申艳敏魏建超尚书文牛明福周玉珍周斌曹瑞兵陈溥言侯继波
- 关键词：基因设计分泌表达活性检测
