河南省教育厅自然科学基金(2010B360009)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：河南中医学院第一附属医院河南中医药大学更多>>
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- 黄芩水提液对3T3-L1脂肪细胞增殖、诱导分化及脂联素启动子荧光素酶活性的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:本研究旨在观察黄芩水提液(Scutellaria Baicalensis Water Extract,SBWE)对3T3-L1前体细胞增殖、分化,对脂肪细胞因子脂联素表达以及脂联素(Adiponectin,ADP)启动子荧光素酶活性的影响,从分子生物学角度阐述SBWE降脂作用的可能机理。方法:通过体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测SBWE对3T3-L1细胞增殖能力的影响;通过诱导脂肪细胞分化成为成熟脂肪细胞,观察SBWE对脂肪形成的影响;化学发光法检测脂联素启动子双荧光素酶报告基因活性;荧光定量PCR法检测脂联素m RNA(Adipoq)表达。结果:与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.01、0.1、1 mg?m L^(-1)浓度的SBWE 24 h,可显著抑制细胞的增殖活性(P<0.05);0.1、1 mg?m L^(-1)浓度的SBWE能够降低3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的数量,并减少细胞内脂滴聚集,但无明显剂量依赖性;0.01、0.1 mg?m L^(-1)浓度SBWE能显著提高脂联素基因启动子荧光素酶活性,与空载体比较差异有统计学意义(P<0.05);与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.1 mg?m L^(-1) SBWE 24 h,诱导前后的脂肪细胞Adipoq表达均明显增加(P<0.05)。结论 :SBWE可有效抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖、分化,同时增加脂联素基因表达,这可能是通过增强脂联素基因启动子荧光素酶活性实现,这些为黄芩水提液减肥的作用机制提供一定的基础。
- 崔琳路玲玲李强宰军华刘卫红王小晓
- 关键词：水提液3T3-L1细胞脂联素荧光素酶
- PAI-1启动子序列与荧光素酶报告基因扩增及载体连接问题分析
- 2014年
- 目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)启动子荧光素酶表达质粒构建中扩增、转化、酶切及连接的问题。方法利用PCR技术扩增1100 bp长度PAI-1启动子片段,与PUC-19T载体连接,将PUC19T-PAI-1 1100质粒,及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌(DH5a)后扩增,提取并纯化;以BglⅡ,MluⅠ酶切,电泳并回收PAI-1 1100片段和pGL3-Basic酶切大片段,将PAI-1 1100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中,构建含PAI-1 1100片段荧光素酶质粒。结果扩增PAI-11100 bp片段成功,目的片段与载体PUC19T,pGL3-Basic载体连接条件较苛刻,需要增加连接时间及效率的摸索。结论控制扩增时DNA浓度,胶回收,感受态质量,LB平板质量,内切酶,连接时间及质量比等问题都可增加连接成功概率。
- 张莎莎崔琳宰军华李强路玲玲
- 关键词：PAI-1启动子荧光素酶报告基因
- 脂联素调控序列荧光素酶报告基因荧光素酶活性的分析被引量：3
- 2013年
- 目的:通过将1 100 bp长度的人脂联素(adiponectin,AD)启动子上游的调控基因(包括启动子,-1066 To+4 bp)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,构建成含启动子调控序列的荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-ADI1100),用于脂联素在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达调控研究。方法:利用PCR技术扩增1 100 bp长度AD启动子片段,与PUC19T载体连接,将PUC19T-ADI1100质粒,及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌(DH5a)后扩增,提取并纯化PUC19T-ADI1100和pGL3-Basic;分别以KpnI,XhoI酶切pGL3-Basic;电泳并回收ADI1100片段和pGL3-Basic酶切大片段,在T4 DNA连接酶的作用下,将ADI1100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中,并转染CHO细胞,检测荧光素酶报告基因活性。结果:通过酶切及基因测序的方法证实所构建质粒含有脂联素启动子上游调控序列;瞬时转染实验显示AD启动子在CHO细胞中的转录表达随时间的变化而升高,转染后48 h的双报告基因活性是pGL3-Basic的30倍。结论:该荧光素酶报告基因构建成功,为后续筛选有抑制肥胖作用的中药提供基础。
- 崔琳李强路玲玲宰军华张莎莎
- 关键词：脂联素启动子荧光素酶报告基因
