河南省杰出人才创新基金(0321002000)
- 作品数：10 被引量：72H指数：4
- 相关作者：王丽娅孙声桃张英朗杨子建杨潇远更多>>
- 相关机构：河南省眼科研究所郑州大学郑州大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 固相杂交技术检测真菌性角膜病常见致病菌的初步研究
- 2006年
- 目的探讨快速、准确检测真菌性角膜病常见致病菌的方法。方法将临床上常见的角膜致病真菌6属12种经氨基化修饰的特异性寡核苷酸探针固定在醛基化的载玻片上。用一对荧光标记通用引物对上述真菌的DNA基因片断进行扩增，将带有荧光标记的扩增产物与载玻片上排列的探针进行杂交，置于荧光显微镜下观察其显色情况。结果12种真菌都产生了530～630bp的PCR扩增产物，在相同的条件下对其进行杂交检测,得到了具有各自特征的杂交后荧光显色图谱，通过荧光信号可直接对不同菌种进行区分判断。结论采用固相杂交技术能够在3～4h完成对临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种检测。
- 张英朗王丽娅李智涛孙声桃
- 关键词：角膜病真菌致病菌
- 多重聚合酶链反应对真菌性角膜炎快速诊断与菌属鉴定的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨多重聚合酶链反应（PCR）对真菌性角膜炎快速诊断并同时鉴定致病菌类型的临床应用。方法通过建立多重PCR体系，对腐皮镰孢菌、禾谷镰孢菌、木贼镰孢菌、串珠镰孢菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、新月弯孢菌及牵连青霉菌标准菌株的DNA进行检测，并将此方法应用于临床分离菌株和临床标本的检测。结果在本多重PCR体系中，镰孢菌属、曲霉菌属、牵连青霉菌及新月弯孢菌DNA的扩增条带长度分别为360、430、245及300bp。人基因组DNA及其他眼部常见致病微生物DNA未扩增出条带，表明多重PCR体系具有高度的特异性。多重PCR体系的敏感性为10fg。结论多重PCR体系可对临床常见角膜致病真菌快速诊断并鉴定到菌属，特异性强，敏感度高。
- 王丽娅杨子建杨潇远孙声桃
- 关键词：角膜炎聚合酶链反应
- 多重PCR对真菌性角膜炎主要致病菌的菌属鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的:建立多重PCR体系对真菌性角膜炎主要致病真菌进行快速诊断并同时进行菌属鉴定的方法。方法:建立两个多重PCR体系(体系1和体系2),对真菌性角膜炎九种主要致病真菌DNA进行检测,观察该体系对真菌临床菌株、人类基因组及其他眼部常见致病微生物DNA的检测结果。结果:体系1对镰孢菌属扩增均产生约360bp的特异产物,对曲霉菌属、牵连青霉菌和新月弯孢菌扩增均产生约470bp的特异产物。体系2对镰孢菌属、曲霉菌属均无特异产物,而对牵连青霉菌产生了360bp的特异产物,对新月弯孢霉产生了300bp的特异产物。根据DNA模板在两个多重PCR体系中扩增出的不同特异条带可将九种真菌分为四个菌属。57株真菌临床菌株中55株的鉴定结果与常规鉴定结果一致。两体系对人类基因组及其他眼部常见致病微生物DNA的扩增结果均为阴性。结论:通过两个多重PCR体系检测可将真菌性角膜炎在菌属水平进行诊断及鉴定。该方法具有快速、简便、特异、灵敏的特点,具有较好的临床应用前景。
- 屈超义闫元奎王丽娅孙声桃杨潇远李振勇唐罗生
- 关键词：眼感染角膜多重聚合酶链反应
- 基因芯片诊断常见角膜致病真菌的临床应用被引量：4
- 2007年
- 目的采用基因芯片技术对真菌性角膜病常见致病菌种进行临床快速检测。方法针对我国临床常见的角膜致病真菌,制备寡核苷酸探针芯片,以通用引物对170例临床采集样本进行PCR扩增,将扩增产物与寡核苷酸芯片杂交,观测相应区域的荧光显色情况,与KOH涂片法和真菌培养法鉴定结果进行统计学比较。结果170例临床角膜刮片标本,KOH涂片法检测阳性113例,阳性率为66.5%;真菌培养法阳性153例,阳性率为90.0%;芯片检测阳性147例,阳性率为86.5%,经χ2检验,芯片检测法与KOH涂片法阳性率差异有统计学意义(χ2=18.896,P=0.000),芯片检测法与真菌培养法阳性率差异无统计学意义(χ2=1.020,P=0.4);芯片法与培养法检测结果的一致性比较高度符合(Kappa值=0.80)。结论寡核苷酸探针芯片检测系统与传统的实验室检测手段比较,具有较好的特异性和灵敏度,缩短了检测时间,可对真菌性角膜病的病原菌进行快速诊断。
- 张英朗王丽娅李智涛孙声桃
- 关键词：真菌性角膜病菌种基因芯片
- 多重PCR检测角膜致病真菌体系优化的探索被引量：3
- 2006年
- 目的探索多重PCR体系中各成分的最适组合,以便在真菌性角膜炎的诊断中获得准确、可靠的结果。方法对参与PCR基因扩增体系的成分在一定范围内设置不同的浓度或参数组,进行单因子或复因子检测,观测各因子在不同条件下对扩增结果的影响。结果多重PCR体系中各组分及退火温度等都会对反应产生一定的影响。优化后的反应体系体积为30μl:20×PCR Buffer 1.5μl,MgC l22 mmol/L,dNTP 200μmol/L,引物各10 pmol,Taq DNA聚合酶2.0μl,DNA模板2μl;PCR反应参数:预变性94℃300 s,变性94℃60 s,退火55℃60 s,延伸72℃45 s,35个循环,终延伸300 s。结论多重PCR扩增体系通过对各种成分、因子的优化,可以达到特异性高且稳定可靠的目的。
- 杨子建王丽娅
- 关键词：多重PCR真菌性角膜炎
- 角膜炎常见致病真菌DNA快速提取方法的探索被引量：12
- 2005年
- 杨潇远王丽娅李振勇李智涛屈超义孙声桃
- 关键词：真菌性角膜炎DNA提取致病真菌病原体检测真菌细胞壁
- 常见角膜致病真菌基因芯片检测方法的实验被引量：5
- 2007年
- 目的:建立一种根据基因芯片原理,对国内真菌性角膜病常见致病菌种进行快速检测和准确检测的实验方法。方法:实验于2004-11/2006-04在河南省生物工程中心分子生物学实验室和河南省角膜病重点实验室完成。将针对国内临床上常见的角膜致病真菌6属12种,包括腐皮镰孢菌、串珠镰孢菌、梨状镰孢菌、尖孢镰孢菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、土曲霉菌、黑曲霉菌、新月弯孢菌、牵连青霉菌、链格孢霉菌、白色念珠菌,并经修饰的特异性寡核苷酸探针固定在两种材料的片基上。用一对通用引物,对上述真菌的DNA基因片断进行扩增,将带有特殊标记的扩增产物与片基上排列的探针进行杂交,对12株标准菌株和82株临床分离株样本采用双盲法原则进行检测,从而对两种不同片基芯片的特异性和灵敏度进行判断和评估。结果:①在两种不同材料的片基上,均可以高效率结合经过修饰和加尾的寡核苷酸探针,玻片约为35mer,尼龙膜约为400mer,可靠性较好。②通过琼脂糖凝胶电泳观察,12种真菌均产生了530～630bp的聚合酶链反应扩增产物,在相同的条件下对其进行杂交检测,得到了具有各自特征的杂交后显色图谱,玻片为荧光显色,尼龙膜为生物素-亲和素显色,可直接从杂交显色图谱上对不同菌种区分判断。③两种芯片均可与低于琼脂糖凝胶电泳显色浓度一个数量级的聚合酶链反应扩增产物反应,敏感性高于聚合酶链反应检测;在对82株临床分离株样本检测中,79株经聚合酶链反应扩增琼脂糖凝胶电泳均显示扩增产物条带,无非特异性杂交反应发生;玻片灵敏度为92.4%,尼龙膜灵敏度87.3%,χ2检验差异无显着性(P>0.05)。结论:实验建立了以ITS区基因为靶标的寡核苷酸探针芯片检测系统,具有较好的特异性和灵敏度,能够在三四个小时内完成对临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种检测。
- 张英朗王丽娅李智涛孙声桃
- 关键词：真菌寡核苷酸序列分析
- 目视化常见角膜致病真菌基因芯片的构建被引量：1
- 2007年
- 目的制备目视化常见角膜致病真菌基因芯片。方法将6属12种角膜致病真菌设计合成特异性寡核苷酸探针加尾后，固定于带正电荷尼龙膜的相应区域，用生物素标记的通用引物对12株标准菌株和82株临床分离株进行PCR扩增，将扩增产物与固定有寡核苷酸探针的尼龙膜进行反向斑点杂交，观测相应区域的斑点显色情况。结果12种真菌均产生了530～630 bp的PCR扩增产物，得到了具有各自特征的杂交后生物素-亲和素斑点显色图谱，可直接从该图谱上判断不同菌种。对82株临床分离株的检测敏感率为84．1％，未出现非特异性交叉反应。结论利用PCR结合反向斑点杂交技术制备目视化基因芯片，能够在3～4h完成对我国临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种鉴定，特异性及敏感性较高。
- 张英朗王丽娅孙声桃李智涛
- 关键词：基因芯片聚合酶链反应技术反向斑点杂交技术角膜病真菌
- 透明质酸钠对马来酸噻吗洛尔滴眼液兔眼房水动力学影响的研究被引量：1
- 2006年
- 噻吗洛尔是一个有效的降眼压药物并且已经用于治疗慢性开角型青光眼的治疗近30年了。即使到目前噻吗洛尔仍然是最重要的抗青光眼药物之一，然而普通的滴眼液眼部的生物利用度非常低，大部分都被鼻泪管排泄掉了。为了提高眼部生物利用度，改善治疗效果，可以通过改变噻吗洛尔滴眼液的处方，增加噻吗洛尔在眼部的滞留时间，提高眼部的生物利用度，从而增加治疗效果。本研究的目的是研究透明质酸钠对0．5％马来酸噻吗洛尔滴眼液（timolol maleate sodium hyaluronate eye drops，T—HA）局部应用后房水的药动学行为的影响，并评价眼部相对生物利用度。
- 张俊杰庞广仁宋洁贞陈祖基王丽娅
- 关键词：马来酸噻吗洛尔滴眼液透明质酸钠开角型青光眼抗青光眼药物降眼压药物
- 河南地区真菌性角膜炎病因学及流行病学分析被引量：41
- 2006年
- 目的调查报告真菌性角膜炎病人的流行病学特征及易患因素。方法对确诊为真菌性角膜炎的1074例病人进行回顾性分析,评估流行病学特征及患病的危险因素。结果真菌性角膜炎的发病呈上升趋势,635例(59.1%)的患者为男性,21-60岁是发病集中年龄,911例(85%)患者的职业是农民,448例(41.7%)患者有明确的外伤史,就诊史明确的患者中731例(97%)在一周内就诊于各级医疗机构而被诊断为真菌性角膜炎的仅为22%。结论真菌性角膜炎是严重的致盲性眼病,其发病率呈上升趋势。应提高对该病的认识和诊断水平,对具有患病危险因素的患者应进行积极的抗真菌治疗。
- 王丽娅杨子建张月琴赵丽娜
- 关键词：真菌性角膜炎病因学流行病学
