国家自然科学基金(31071307)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA被引量：7
- 2013年
- 背景:微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,miRNA参与调控基因表达,在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。目的:验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。方法:体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞,常氧培养传代至P2;37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h;免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达,免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组:miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组,采用miRNA芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异;real-time qPCR方法验证芯片检测结果。结果与结论:心脏肌成纤维细胞中过表达miR-1、miR-499后,心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化,与空白对照组相比,其余3组GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高,Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明,特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物,具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。
- 张成章少中张亚洲张国恒王韵茹董红燕张中明
- 关键词：干细胞心脏成纤维细胞转分化
- 小鼠心脏成纤维细胞直接转分化为心脏祖细胞的实验研究
- 2015年
- 目的采用非特异性转录因子介导的谱系重编程系统，将小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）直接转分化为心脏祖细胞（cardiac progenitor cells，CPCs）。方法取昆明小鼠乳鼠心肌组织，差速贴壁法分离CFs。免疫荧光染色、流式细胞术分别检测CFs性状及纯度，以携带含小鼠tet-on系统的4种重编程因子Oct4、Sox2、Klf4、c-myc（OSKC）慢病毒等比例感染第3代（P3）CFs。A组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中不加入白血病抑制因子（LIF），加入JAKinhabit1（J11），以抑制向iPSCs方向的转分化。B组：对照组感染空载体病毒。C组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中加入LIF，不加入JI1，不抑制向iPSCs方向的转分化。在特定时间点为感染的细胞更换不同培养条件，观察细胞形态及生物特性的变化：①实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）法检测重编程各个时间点CPCs特异性转录因子Mespl、Nkx2．5、Isll、GATA4及胚胎干细胞多能性因子Oct4、Sox2、c-myc、Klf4、Naong的表达；②CPCs特异性标记Nkx2．5、Is11免疫荧光染色鉴定；（3）CPCs自分化为搏动心肌细胞的检测；④心肌细胞特异性标记cTnI免疫荧光染色鉴定CPCs向心肌细胞方向的分化潜能。结果①形态学观察，病毒感染11—14天，可见部分CFs形态发生改变，形成CPCs样克隆；（2）CPCs克隆Nkx2．5、Isll免疫荧光染色阳性；③CPCs可自分化为搏动的细胞团，其中的细胞cTnI免疫荧光染色阳性；（4）Real—timeRCR检测结果显示，重编程第4天，CPCs早期特异性转录因子Mespl即开始表达，而iPSCs多能性因子Naong在重编程第9天才开始表达。结论心脏成纤维细胞可以直接转分化为CPCs。
- 王韵茹李勇厉传艺惠洪亮董红燕张中明
- 关键词：心脏成纤维细胞
