国家科技攻关计划引导项目(2003BA546C)
- 作品数：51 被引量：257H指数：12
- 相关作者：牛建新赵英马兵钢刘娜何子顺更多>>
- 相关机构：石河子大学新疆生产建设兵团绿洲生态农业重点实验室新疆生产建设兵团更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划引导项目国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒被引量：2
- 2006年
- 选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了GRSPaV与nad5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;nad5与序列号D37958的同源性达96·67%。
- 牛建新李西平赵英张强马兵钢
- 关键词：RT-PCR
- 利用原位RT-PCR技术检测库尔勒香梨中苹果茎沟病毒被引量：3
- 2008年
- 以已知带有苹果茎沟病毒的香梨的叶片为材料,研究了香梨病毒叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。应用了直接原位RT-PCR反应,简化了试验步骤,缩短了试验周期,确定了苹果茎沟病毒在叶片中的分布位置。试验中设置了多种阴性对照,结果表现为:阴性对照组织中均未显现蓝紫色,而阳性材料组织的一些细胞表现出明显的蓝紫色,说明苹果茎沟病毒在叶片中主要分布于细胞中的栅栏组织。
- 黄翯牛建新刘娜
- 关键词：库尔勒香梨苹果茎沟病毒
- 影响库尔勒香梨果实脱萼宿萼因素研究被引量：17
- 2007年
- 库尔勒香梨果实大小适中，萼片大部脱落，香味浓郁，皮薄肉脆，清甜爽口，细嫩多汁，维生素C含量丰富且耐贮藏，尤以芳香味最为独特。随着香梨大面积栽培，产量大幅度提高，果实品质有所下降，不脱萼果增多，出现外观不美（果皮粗）、果个小、果心大、萼部突出（突顶）等缺点，尤其是突萼果，严重影响了香梨的销售。
- 邵月霞牛建新何子顺
- 关键词：梨果实维生素C含量大面积栽培果实大小芳香味耐贮藏
- 适合原位RT-PCR的石蜡切片制作方法被引量：8
- 2006年
- 石蜡切片是原位RT-PCR中常用一种生物制片技术,简要阐述原位RT-PCR的原理以及适合于原位RT-PCR的石蜡切片的制作流程,对其易出现的问题和解决办法作了简要的概述。
- 刘宏牛建新韩晓燕
- 关键词：石蜡切片
- ‘库尔勒香梨’脱萼组与宿萼组样品差异表达基因的筛选被引量：15
- 2015年
- 【目的】系统研究‘库尔勒香梨’脱萼组和宿萼组花器官的转录组表达情况,筛选2者之间的差异表达基因,为进一步阐明‘库尔勒香梨’萼片脱落与宿存分子机理奠定基础。【方法】采用Illumina高通量测序技术对‘库尔勒香梨’脱萼组和宿萼组代表样品进行测序,利用生物信息学方法筛选2者的差异表达基因和进行功能基因预测。【结果】Trinity法拼接后得到48 894条unigenes序列,从中选取了2组样品中共表达和单独表达的SPL转录因子进行了功能探究,发现3条unigenes可能与萼片发育有关。筛选的差异表达基因获得了Gene Ontology和KEGG数据库的注释,涉及植物激素信号转导、光合代谢、苯丙氨酸代谢、芳香族化合物合成、细胞发育等与萼片发育相关过程。【结论】筛出了2组样品的差异表达基因,获得了与萼片发育相关的基因及其对应的功能注释,为今后进一步研究‘库尔勒香梨’萼片脱落与宿存分子机理奠定了良好基础。
- 孙晓霞牛建新王博慧裴茂松李陈静曹福军
- 关键词：萼片转录组测序差异表达分析
- 新疆苹果树上苹果锈果类病毒(ASSVd)的检测与全序列分析被引量：1
- 2015年
- 【目的】检测并分析新疆223团场多年生苹果树上的苹果锈果类病毒。【方法】对采自新疆库尔勒223团的多年生苹果树的枝条、叶片、果实((果皮、种子))样品进行RNA提取,利用RT-PCR技术检测鉴定。【结果】(1)多年生的‘金冠’苹果树上检测到苹果锈果类病毒,得到4条克隆序列(ASSVd Y1:KC110858;ASSVd Y6:KC110859;ASSVd Y8:KC110860;ASSVd Y10:KC110861),所得序列与Gen Bank中已报道的国内外ASSVd序列同源性达85%以上。(2)序列比对可知,4条‘金冠’分离物序列之间只有3个碱基变异,与首次登录生物X17696有26个碱基变异,其中有4个碱基缺失和5个碱基插入,且变异多集中在类病毒序列的TL与TR区。【结论】通过序列分析比对,各寄主上的ASSVd分离物核酸序列变异较小,建立了优化的RT-PCR检测方法,为苹果树ASSVd的快速检测奠定了良好的基础。
- 孙晓霞王钰婷牛建新
- 关键词：苹果树
- 化学药剂处理克服香梨自交不亲和性效果研究被引量：18
- 2008年
- 6种化学药剂处理香梨柱头的结果表明,化学药剂对克服香梨自交不亲和性有一定效果。不同的化学药剂其效果差异为,氯化钠+硼酸、鸭梨和砀山梨花粉浸提液处理效果较好,比对照(蒸馏水处理)差异极显著;而GA、IBA、NAA与对照(蒸馏水)处理相比差异不显著。不同化学药剂浓度的处理效果亦不同,以氯化钠5%+硼酸0.3%、鸭梨和砀山梨花粉1∶10(M∶M)处理效果最好。
- 李慧民牛建新党小燕
- 关键词：库尔勒香梨化学药剂自交不亲和性
- 梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测被引量：12
- 2007年
- 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响，退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明：RNasin的用量大于0．2U·μL^-1时，信号强度随着RNasin量的加大而增强；只有当dNTPs浓度达1．0mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA；AMV浓度在0．3-0．5U·μL^-1均可进行正常的逆转录，而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多；引物浓度达到0．9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录，并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20-30次可出现较强的蓝色信号，引物浓度在0．8-1．2μmol·L^-1时显色较好；Taq酶浓度为20U·μL^-1以上，均显示较深的蓝色；Mg^2＋浓度为1．5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系，利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证，取得了很好效果。
- 牛建新周民生马兵钢赵英刘宏
- 关键词：库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒原位PCR
- 3种梨树病毒cDNA探针检测被引量：3
- 2006年
- 利用Biotin-16-dUTP标记的cDNA探针分子杂交检测分析了新疆梨树上的3种主要病毒(梨环纹花叶病毒、梨脉黄病毒、苹果茎沟病毒)并优化了杂交反应体系。结果表明,这3种病毒探针的检测灵敏度分别为5、10和10 pg。用文中的方法提取的RNA均能在10-3稀释后显色。该方法与RT-PCR方法对样品带毒状况的检测结果一致。
- 马兵钢牛建新张虎平
- 关键词：苹果茎沟病毒CDNA探针
- 利用原位杂交及原位RT-PCR技术检测梨树组织中苹果茎痘病毒的分布被引量：7
- 2008年
- 【目的】搞清苹果茎痘病毒在梨树组织中的分布,为茎尖脱毒提供直接的理论依据和技术支撑。【方法】以库尔勒香梨茎尖、叶片为材料,利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过RT-PCR反应体系,合成了苹果茎痘病毒的cDNA探针,利用核酸探针斑点杂交检测方法对该探针特异性及灵敏度进行验证。研究制作了适合原位PCR及原位杂交的石蜡切片,利用原位反转录酶聚合酶链式反应(IS-RT-PCR)技术检测石蜡切片组织中苹果茎痘病毒RNA的定位及分布,并对影响实验结果的重要因素进行优化。【结果】梨树中的苹果茎痘病毒RNA阳性信号主要位于叶片的叶肉细胞、茎尖的外围皮层组织及相应的初生维管束。蛋白酶K消化时间以20 min为宜,要获得良好的扩增效果,RT反应体系中RNasin的量需大于0.2 U.μl-1,dNTPs大于0.4 mmol.L-1,SuperScriptⅡ在0.1～1.3 U.μl-1,引物在0.9μmol.L-1以上。PCR反应体系中适宜的退火温度为60℃,循环35次,引物浓度应在0.8～1.2μmol.L-1,LA Taq酶浓度大于0.5 U.100.μl-1。【结论】梨树茎尖顶端分生组织0.25 mm的区域为无病毒区域。
- 赵英牛建新
- 关键词：库尔勒香梨苹果茎痘病毒CDNA探针地高辛原位PCR
