湖北省科技攻关计划(2003AA301C29)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：蔡建良叶章群杨为民陈春莲陈志强更多>>
- 相关机构：华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人膀胱癌组织中成纤维细胞的培养和鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的:探索人膀胱癌组织中成纤维细胞的培养和鉴定方法,为其功能的研究奠定基础。方法:分别应用组织块法、消化法进行人膀胱癌组织中成纤维细胞的原代培养,细胞铺满培养瓶底后首次传代,通过胰酶消化法和反复贴壁法进行成纤维细胞的纯化;通过倒置显微镜观察细胞形态、透射电镜观察细胞内部结构和免疫组化方法检测细胞膜波形蛋白(vimentin)、角蛋白(keratin)表达情况对细胞进行鉴定。结果:组织块法原代培养约1周可见纤维样细胞从组织块周围游出,消化法4天后可见细胞贴壁,均于5周左右细胞基本长满培养瓶底。首次传代时应用胰酶消化法进行成纤维细胞的初次纯化,第二次转种时先后应用酶消化法和反复贴壁法再次进行细胞纯化,第3、4代基本可获纯的含单个核的长梭形纤维样细胞。取第5、6代状态良好的细胞常规准备后进行透射电镜检查和免疫组化染色:电镜提示细胞内可见明显的粗面内质网、高尔基体和(或)微丝结构,线粒体数量少,分布不均;免疫组化结果为vimentin染色阳性,keratin染色阴性。结论:只要给细胞创造良好的生长条件并正规操作,组织块法和消化法均可成功地进行人膀胱癌组织中成纤维细胞的原代培养;因与恶性肿瘤细胞相比,成纤维细胞的优势生长并不明显,故细胞的纯化工作极为重要。
- 杨为民蔡建良叶章群
- 关键词：膀胱癌成纤维细胞细胞培养细胞鉴定
- 透明质酸在膀胱移行细胞癌、乳头状瘤组织中的表达及其意义被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨人膀胱移行细胞癌 (BTCC)、乳头状瘤组织中透明质酸的表达情况及其意义。方法 应用免疫组织化学染色方法检测 60例BTCC、2 5例膀胱乳头状瘤和 15例正常膀胱黏膜上皮组织标本中透明质酸表达情况并进行统计学分析。结果 正常对照组HA染色 :(-) 11例 ,(+ ) 4例 ,染色位于上皮细胞间质。膀胱乳头状瘤组染色 :(-) 3例 ,(+ ) 10例 ,( ) 12例 ;G1级膀胱移行细胞癌组染色 :(-) 2例 ,(+ ) 7例 ,( ) 11例 ;G2 级 :(+ ) 2例 ,( ) 13例 ,( ) 5例 ;G3级 :(+ ) 1例 ,( ) 8例 ,( ) 11例 ;染色均位于癌细胞胞浆和间质中。正常对照组与BTCC、膀胱乳头状瘤组 ,膀胱乳头状瘤组与BTCC组比较 ,差异均有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;G1级组与G2 级组、G1级组与G3 级组之间差异有显著性 (P =0 .0 13 2 ,0 .0 0 3 5 ) ,G2 级组与G3 级组比较 ,差异无显著性 (P =0 .0 5 2 8) ;膀胱乳头状瘤组与G1级组之间的差异无显著性 (P =0 .64 0 7)。结论 透明质酸与BTCC的生物学特性有直接的关联 ,膀胱移行细胞癌细胞本身具有合成透明质酸的功能 ;
- 蔡建良叶章群杨为民陈志强陈春莲
- 关键词：透明质酸膀胱肿瘤生物学
- 人膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶优势亚型的确定及意义被引量：1
- 2007年
- 目的探讨膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶(HAS)的优势亚型,为膀胱移行细胞癌组织中透明质酸的功能研究奠定基础。方法于Gene Bank中检索得到三种透明质酸合成酶亚型(HAS1、HAS2、HAS3)的mRNA序列,应用Primer 5.0软件,根据这些mRNA序列分别设计、合成三对引物;常规分别提取膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞和正常膀胱黏膜组织中成纤维细胞的总RNA,逆转录半定量聚合酶链反应(PCR,25循环)后进行常规琼脂糖凝胶电泳、图像扫描和分析、凝胶DNA回收和序列测定。结果正常膀胱组织中成纤维细胞mRNA中扩增出较明显的HAS 1条带,HAS2、HAS3条带不明显,而膀胱癌组织中成纤维细胞mRNA中扩增出非常明显的HAS3条带和较明显的HAS1条带,无HAS2条带。扫描图像分析后比较两者HAS1条带凝胶灰度值,差异无统计学意义(P>0.05),膀胱癌组织中成纤维细胞的HAS3条带和HAS1条带的凝胶灰度值差异有统计学意义(P<0.01)。结论膀胱癌组织中成纤维细胞出现HAS3的大量合成,且为其透明质酸合成酶的优势亚型。
- 杨为民蔡建良叶章群
- 关键词：膀胱癌成纤维细胞透明质酸
- RNAi阻断人膀胱癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3的表达研究
- 2006年
- 目的探讨RNA干扰技术阻断人膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3(hyaluronicacidsynthase3,HAS3)的表达与膀胱移行细胞癌生物学行为之间的关系。方法设计、体外化学合成HAS3mRNA序列特异性、非特异性小干涉双链RNA(smallinterferencingRNA,siRNA),分别与脂质体LipofectamineTM2000结合后转染体外培养的人膀胱移行细胞癌组织中的成纤维细胞。实验分为A、B、C、D四组:孵育48h后,取各组细胞培养液进行放免法透明质酸浓度测定、免疫细胞化学染色了解透明质酸的合成、RT-PCR法检测HAS3mRNA的表达。结果与A组相比,D组细胞HAS3mRNA表达减少了78.2%,HA染色明显变淡,细胞培养液中HA浓度下降了60.3%(P<0.01);B、C组mRNA表达分别减少了4.7%、5.4%,HA染色几乎无变化,HA浓度分别下降了5.2%、5.8%(P>0.05)。结论RNA干扰技术可以显著地减少膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞的HAS3的表达,从而大幅度地降低该细胞内透明质酸的合成。
- 杨为民蔡建良叶章群杜广辉胡志全
- 关键词：RNA干扰技术膀胱移行细胞癌成纤维细胞
