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国家高技术研究发展计划(2006AA02A410): 作品数：30 被引量：197H指数：6; 相关作者：尤红贾继东陈新月吴晓宁陈煜更多>>; 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院首都医科大学附属北京友谊医院北京大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

慢病毒为载体的siRNA抑制肝星状细胞TIMP-1的表达: 2009年; 目的观察以慢病毒为载体,用含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后对TIMP-1表达的抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选2个不同短片段(nt161～181和nt445～463),在体外构建为短发夹siRNA1、siRNA2表达载体后,将其包装为重组Lenti/siRNA1-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA2-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照Lenti/GFP(空载体组),并以滴度MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后3d,用流式细胞仪及荧光显微镜检测病毒的感染效率。分别在感染后7、9d用Western blotting方法检测TIMP-1蛋白表达情况。结果感染HSC-T6后细胞形态和增生速度未发生明显变化。流式细胞仪及荧光显微镜检查证实感染效率分别为:空载体组68.23%,siRNA1感染组57.93%,siRNA2感染组51.2%,与正常细胞相比,感染后7d和9d,siRNA1、siRNA2感染组TIMP-1蛋白表达均有所下降,但只有siRNA1感染组在感染后9d能显著抑制TIMP-1表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的重组Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP可短期有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6TIMP-1蛋白表达。; 白艳锋丛敏王萍刘天会吴晓宁杨爱婷唐淑珍马红贾继东尤红; 关键词：小干扰RNA 金属蛋白酶组织抑制因子-1 慢病毒肝星状细胞

MMP-1过表达抑制人肝星状细胞I型胶原表达被引量：5: 2009年; 目的观察人肝星状细胞(LX-2)过表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)后,肝纤维化相关指标的变化。方法构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒,并转染人肝星状细胞,荧光定量PCR与Western blot法分别检测MMP-1、I型胶原(collagenI)、TIMP-1基因与蛋白水平的表达。结果成功构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒dl6-95-MMP-1;dl6-95-MMP-1转染LX-2细胞7d后,荧光定量PCR结果显示,MMP-1基因转录水平显著增加,而CollagenI、TIMP-1在基因转录水平无明显改变;Western blot结果显示转染7d后,MMP-1蛋白表达明显增加,CollagenI蛋白表达明显下降,而TIMP-1蛋白表达无明显变化。结论人肝星状细胞高表达MMP-1后显著抑制CollagenI蛋白的表达,其机制主要通过发挥其酶活性降解collagenI蛋白,而不影响collagenI基因水平的表达,同时也不影响TIMP-1在基因以及蛋白水平的表达。; 刘天会丛敏王萍尤红; 关键词：肝星状细胞基质金属蛋白酶-1 I型胶原

基质金属蛋白酶-13过表达抑制大鼠肝星状细胞中I型胶原表达被引量：2: 2009年; 目的肝纤维化的主要病理变化是细胞外基质的沉积与降解障碍,本研究旨在观察大鼠肝星状细胞过表达基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)后肝纤维化相关指标的变化。方法构建含MMP-13全长编码基因的表达质粒,并转染大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),荧光定量PCR与Western blotting方法分别检测MMP-13、CollagenI基因与蛋白水平的表达。结果成功构建含MMP-13全长编码基因的表达质粒dl6-95-MMP-13;dl6-95-MMP-13转染大鼠HSC细胞7d后,荧光定量PCR结果显示,MMP-13基因转录水平明显增加,而CollagenI在基因转录水平有轻度增加;Western blotting结果显示转染7d后,酶原及活化形式的MMP-13表达明显增加,尤其是活化形式的MMP-13;转染后的大鼠HSC中CollagenI蛋白表达明显下降。结论大鼠HSC高表达MMP-13后显著抑制CollagenI蛋白的表达,其机制主要通过发挥其酶活性降解CollagenI蛋白,而对CollagenI在基因水平的表达无显著影响。; 刘天会丛敏王萍尤红; 关键词：星状细胞肝纤维化基质金属蛋白酶-13

几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响被引量：5: 2010年; 目的比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白浓度及活性的影响。方法采用蔗糖密度梯度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同样数量的细胞采用普利莱法提取得到的线粒体蛋白浓度高于其他2种方法所提取的线粒体蛋白浓度(P<0.05);采用Westernblotting的方法测定提取的线粒体发现采用普利莱法提取得到的线粒体中胞质蛋白污染较其他2种方法提取得到的线粒体少,线粒体纯度高;测定线粒体中细胞色素C和ATP含量后发现同样采用普利莱法提取得到的线粒体活性最高。结论普利莱法提取线粒体的方法优于蔗糖密度梯度离心法和Pierce线粒体提取试剂盒方法。; 吴媛董凌月安威安云庆; 关键词：线粒体

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎、肝硬化代偿期和失代偿期患者2年疗效比较被引量：4: 2010年; 目的观察慢性乙型肝炎(乙肝)、乙肝肝硬化代偿期和失代偿期患者接受阿德福韦酯(ADV)抗病毒治疗2年的疗效。方法对初治的慢性乙肝32例(慢性乙肝组)、乙肝肝硬化代偿期10例(肝硬化代偿期组)和失代偿期14例(肝硬化失代偿期组)应用ADV治疗2年,治疗前和治疗后每3个月检测ALT等生化指标及HBVDNA等病毒学指标。结果 3组患者在治疗前各项指标基线水平无显著差异,具有可比性。ADV治疗1年和2年时,3组ALT的复常率和HBeAg血清学转换率之间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗2年时慢性乙肝组HBVDNA水平下降的中位数为5.9log10U/ml,肝硬化代偿期组为6.2log10U/ml,肝硬化失代偿期组为2.9log10U/ml。肝硬化失代偿期组在治疗6个月后的病毒学应答比慢性乙肝组和肝硬化代偿期组差。结论接受ADV治疗2年的慢性乙肝、肝硬化代偿期和失代偿期患者中,肝硬化失代偿期患者病毒学应答差。; 尤红吴晓宁王倩怡马佳丽王美娟王蕊陈景寿欧晓娟马红张福奎王宝恩贾继东; 关键词：肝炎乙型慢性肝硬化抗病毒药

不同疾病阶段乙型肝炎病毒感染者的树突状细胞功能及血清细胞因子表达水平: 2010年; 目的探讨HBV感染后不同疾病阶段（免疫耐受期、肝炎活动期、非活动携带状态）者断面的树突状细胞（DC）亚群功能和血浆细胞因子水平的差异及其可能的原因.方法 30例HBV感染后不同疾病阶段者,分为免疫耐受组、肝炎活动组和非复制携带组,每组10例;另选10名健康人作为对照组.收集研究对象外周血,检测白细胞介素（IL）-12、IL-10、干扰素（IFN）α、IFN γ、肿瘤坏死因子（TNF）α的表达水平,分析髓样树突状细胞（mDC）和浆细胞样树突状细胞（pDC）的功能（以IL-12含量代表mDC的功能,以IFN α含量代表pDC功能）及其他细胞因子在不同组别间表达水平的差异.细胞因子表达水平的比较,总的HBV感染组与健康对照组比较用t检验,4组间两两比较用秩和检验.结果 HBV感染组IL-12总含量及单个核mDC IL-12含量均低于对照组[分别为（153.12±159.30）pg/ml比（338.48±142.92）pg/m和（9.48±9.57）fg比（15.10±6.25）fg,F值分别为0.225和0.684,P值均＜0.01],两组IFN α总含量及单个核pDC IFN α含量差异无统计学意义[分别为（575.87±477.02）pg/ml比（662.37±356.06）pg/ml和（85.14±68.44）fg比（62.11±627）fg,F值分别为1.467和1.804,P直均＞0.05].组间两两比较结果显示,健康对照组IL-12总含量[（338.48±142.92）pg/ml ]高于其他3组（Z值分别为-3.039、-2.967和-2.949,P值均＜0.01）,单个核mDC IL-12含量[（15.10±6.25）fg]也高于其他3组（Z值分别为-3.027、-2.671和-2.863,P值均＜0.01）;健康对照组IFN α总含量为（662.37±365.06）pg/ml,单个核pDC IFN α含量为（62.11±27.04）fg,均高于肝炎活动组（Z值分别为-3.016和-3.176,P值均＜0.01）.HBV感染不同组别中,仅IFNα水平[分别为（86.17±12.02）pg/ml、（91.76±39.64）pg/ml和（139.32±207.35）pg/ml]高于健康对照组[（53.30±23.92）pg/ml],差异有统计学意义（Z值分别为-2.967、-2.896和-3.054,P值均＜0.01）.结论 HBV感染后,DC; 董金玲马丽娜马冰陈新月; 关键词：树突细胞白细胞介素12 干扰素A

骨髓干细胞在抗肝纤维化治疗中的应用研究: 2009年; 肝细胞再生是肝纤维化逆转的重要因素,而近年来多项研究表明骨髓干细胞可以向肝细胞转化,促进肝组织再生,同时可以表达基质金属蛋白酶,促进细胞外基质的降解,逆转肝纤维化。本文就骨髓干细胞在肝纤维化治疗中的研究作一综述。; 白艳锋尤红; 关键词：肝纤维化骨髓干细胞肝细胞生长因子

干扰素治疗慢性乙型肝炎的影响因素及疗效预测被引量：15: 2010年; 我国批准用于抗乙型肝炎病毒（HBV）治疗的药物共有两大类。包括普通干扰素（IFN）、聚乙二醇干扰素（PEG—IFN）以及数种核苷（酸）类似物（NAs）。两类抗病毒药物各有优势和局限性。干扰素类药物具有抗病毒和免疫调节双重作用，; 柳雅立陈新月; 关键词：干扰素影响因素

α-2-HS-glycoprotein is a potential marker predicting hepatitis B e antigen seroconversion in patients with chronic hepatitis B during treatment with pegylated interferon alfa-2b被引量：6: 2011年; The efficacy of interferon (IFN) is limited in about 1/3 of patients with chronic hepatitis B (CHB). We used two-dimensional electrophoresis (2-DE)-based proteomic strategies to identify potential serum markers predicting hepatitis B e antigen (HBeAg) seroconversion in these patients during IFN therapy. Two groups of patients were enrolled: training and validation. In the training group, 2-DE experiments and subsequent identification of altered levels of proteins showed that α-2-HS-glycoprotein, leucine-rich α-2-glycoprotein, and haptoglobin were significantly upregulated as compared with baseline levels in the HBeAg seroconversion group, whereas apolipoprotein C-III precursor, leucine-rich α-2-glycoprotein, and α-albumin were downregulated in the non-seroconversion group. For patients with HBeAg seroconversion in the training group, Western blot analyses showed that α-2-HS-glycoprotein levels in 75% of patients were significantly upregulated at the end of the treatment as compared with baseline levels. Subsequent experiments in the validation group showed that α-2-HS-glycoprotein levels were significantly increased at week 4 in 83.33% of patients in the HBeAg seroconversion group. Dynamic changes in the serum level of α-2-HS-glycoprotein may be a potential early marker for predicting HBeAg seroconversion during IFN treatment for CHB.; MA Hui WANG JiangHua GUO Fang WEI Lai; 关键词：干扰素Α 糖蛋白 E抗原

α-2-HS-糖蛋白对聚乙二醇干扰素alfa-2b治疗慢性乙型肝炎患者e抗原血清转换预测作用的研究被引量：3: 2010年; 利用干扰素治疗慢性乙型肝炎仅在约1/3的患者中取得了满意的治疗效果.采用基于双向电泳的血清蛋白质组学技术,寻找慢性乙型肝炎患者干扰素治疗时发生e抗原血清学转换的预测标志物.对发生/未发生血清学转换组的患者基线和治疗24周血清进行差异蛋白的筛选和鉴定,并对筛选得到的α-2-HS-糖蛋白在训练组和验证组患者个体中进行了基线和第4周的进一步验证实验.结果发现,α-2-HS-糖蛋白从治疗基线至治疗第4周的变化趋势对慢性乙型肝炎患者干扰素alfa-2b治疗过程中e抗原血清学转换具有预测意义.; 马慧王江华郭芳魏来

国家高技术研究发展计划(2006AA02A410)

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