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缺氧对视网膜色素上皮细胞基质细胞衍生因子-1和整合素连接激酶表达的影响被引量：1: 2012年; 背景缺氧是诱导新生血管形成的主要因素，近年来越来越多的研究证实基质细胞衍生因子-1（SDF-1）和整合素连接激酶（ILK）在新生血管性疾病中发挥着重要作用，而缺氧对视网膜色素上皮（RPE）细胞SDF-1和ILK表达的影响尚未阐明。目的探讨缺氧对体外培养RPE细胞中SDF-1和ILK表达的影响。方法从4周龄SPF级健康C57BL／6小鼠眼球中获取RPE组织并进行消化和培养，将达到80％融合的细胞进行传代。取第3代细胞制作细胞爬片后用细胞角蛋白18（CKl8）抗体进行免疫组织化学检测和鉴定，以5×104个／ml密度将RPE细胞接种于含胎牛血清的DMEM／F12培养液的培养瓶中，无血清饥饿培养24h后常氧组在常规培养基中进行培养，缺氧组在CoCl2浓度为200μmol／L的含胎牛血清的DMEM／F12培养液中进行培养，2个组根据培养时间的不同再亚分为1、3、6、12、24、48、72h组。采用逆转录PCR（RT-PCR）检测RPE细胞中SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达，采用Westernblot检测RPE细胞中SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达，均以目的基因A值／β-actinA值表示。结果培养的RPE细胞呈不规则多边形，细胞质内布满黑色素颗粒，90％以上的细胞对CK18呈阳性反应。随着CoCl2培养时间的延长，SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达量逐渐增加，总体比较差异均有统计学意义（SDF-1 mRNA：F=281．875，P=0．000；ILKmRNA：F=187．566，P=0．000），12h达高峰，之后略有降低，但仍高于常氧组，缺氧1h组SDF-1mRNA及蛋白表达无明显变化；缺氧培养3、6、12、24、48、72h组SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达量均明显高于常氧培养组，差异均有统计学意义（P〈0．01）。随着CoCl2培养时间的延长，SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达量逐渐增加，差异均有统计学意义（SDF-1：F=44．719，P=0．000；ILK：F=144．481，P=0．000）。缺氧1h组SDF-1及ILK蛋白表达无明显变化；缺氧3、6、12、24、48、72h组SDF-1蛋�; 王业青李霞吕勇王健张晓梅; 关键词：基质细胞衍生因子-1 整合素连接激酶视网膜色素上皮细胞缺氧

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哈尔滨医科大学附属第一医院科研基金(2009824)

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