山东省自然科学基金(Q2002D02)
- 作品数：6 被引量：37H指数：3
- 相关作者：黄倢张莉史成银王维新戴继勋更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学青岛农业大学更多>>
- 发文基金：青岛市自然科学基金项目山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 鉴定病毒受体的研究方法被引量：3
- 2005年
- 研究病毒受体对了解病毒感染机制、病毒病的预防与治疗、病毒分类等都有重要意义。本文重点就酵母双杂交系统以及病毒蛋白铺覆技术、噬菌体展示、生物芯片、荧光共振能量转移等可用来进行病毒受体鉴定研究的几种方法做了介绍。
- 王维新史成银高天翔黄倢
- 关键词：病毒受体噬菌体展示病毒蛋白病毒分类病毒病酵母双杂交系统
- 酵母双杂交系统的改进与研究进展被引量：15
- 2006年
- 酵母双杂交系统是一种新兴的体内研究蛋白质之间相互作用以及筛选cDNA文库的技术手段,自建立以来得到了不断的改进与发展。在此基础上又相继出现了单杂交、三杂交、反向双杂交以及SOS富集系统等多种衍生系统,它们在功能基因组学、蛋白质组学以及药物开发研究中发挥了重要作用。本文拟就双杂交系统的原理、改进、发展及应用做一综述。
- 张莉黄倢
- 关键词：酵母双杂交系统
- 酵母双杂交系统用于WSSV粘附蛋白VP37相关蛋白基因的研究被引量：3
- 2005年
- 为研究WSSV的粘附蛋白VP37相关蛋白的基因,应用酵母双杂交系统Ⅲ筛选中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃细胞全长cDNA文库。构建VP37 基因的重组载体PGBKT7 VP37,把它转化酵母Y187后与含文库质粒的酵母AH109配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。经过PCR鉴定确定了1个阳性克隆。测定该段cDNA序列并进行生物信息学分析,结果显示,此cD NA片段编码的蛋白与蛋白酶的同源性较高,该蛋白在WSSV识别并结合宿主的过程中所起的作用还有待于进一步研究。成功筛选了VP37相关蛋白的cDNA片段,为研究WSSV入侵以及感染致病的机制等方面提供了新线索。
- 张莉黄倢戴继勋
- 关键词：酵母双杂交系统WSSV
- 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃细胞膜蛋白与WSSV的结合活性以及BP53的初步研究
- 2010年
- 实验提取了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的鳃细胞膜并采用2种非离子型表面活性剂TritonX-100和Tween-20增溶鳃细胞膜,通过ELISA方法证实增溶后的对虾鳃膜蛋白与WSSV有结合活性,对其中1种鳃膜蛋白BP53进行了MALDI-TOF-MS-MS质谱测序,并且经BLASTP对其保守域进行了分析,结果表明BP53鳃膜蛋白与ATP ase-β-subunit同源性最高。
- 张莉黄倢
- 关键词：对虾白斑综合症病毒
- 中国明对虾鳃细胞全长cDNA文库的构建被引量：17
- 2004年
- 利用SMART (SwitchingMechanismat 5’endofRNATranscript)技术 ,以同源重组的方式构建了中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库。首先用RNA提取试剂盒从中国明对虾鳃细胞中提取总RNA ,以总RNA为模板 ,CDSⅢOligo(dT)为引物 ,反应一段时间后 ,再加入转换模板 (Switchingtemplate) ,反转录合成cDNA第 1链。在DNA聚合酶的作用下 ,通过长距离PCR ,扩增双链DNA。双链cDNA经凝胶过滤柱纯化后 ,与线性化的 pGADT7 Rec质粒载体同源重组 ,转化感受态AH10 9酵母菌株后 ,得到中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库。经测定该文库的容量为 2 1× 10 6 ,扩增后文库的滴度为 7 3× 10 7cfu/ml。经菌落PCR测定 ,该文库的重组率为 90 %。
- 王维新史成银黄倢
- 关键词：全长CDNA文库
- 对虾白斑综合症病毒VP37基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测被引量：1
- 2010年
- 把对虾白斑综合症病毒(White syndrome spot virus,WSSV)黏附蛋白VP37的基因C末端截去102个碱基后设计了一对引物,通过PCR扩增出目的片段。用其构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用和自激活活性。结果获得截短的VP37基因片段,并成功克隆入酵母双杂交系统PGBKT7 DNA-BD载体中,测序结果表明序列完全正确。把重组载体转化酵母菌AH109并检测自激活作用。结果显示表达的融合蛋白没有激活ADE2,HIS3这2个报告基因,但激活了MEL1,该融合蛋白对酵母菌AH109无毒性。可利用其它2种报告基因将其应用于酵母双杂交系统,筛选cDNA文库中与之相互作用的基因。
- 张莉
- 关键词：WSSV黏附蛋白酵母双杂交系统
