湖北省科技攻关计划(2003AA301C11)
- 作品数：16 被引量：85H指数：8
- 相关作者：刘世清杜予民彭昊邱波陈凌云更多>>
- 相关机构：武汉大学山东大学第二医院山东省千佛山医院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔前交叉韧带切断骨关节炎模型软骨MMP-1 MMP-3及诱导型一氧化氮合酶表达的研究被引量：8
- 2007年
- 目的观察兔前交叉韧带切断(ACLT)骨关节炎(OA)模型软骨中不同造模时期基质金属蛋白酶(MMP)-1、3及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,为该模型用于OA防治提供理论依据。方法36只大白兔,随机选择27只,每只均行右侧膝关节腔切开前交叉韧带切断术(ACLT),另9只单纯行右侧膝关节腔切开术作为假手术对照组。术后4、8及12周随机处死实验组大白兔各9只及假手术对照组大白兔3只。对比各组大白兔股骨髁关节软骨的大体改变,用反转录-聚合酶链反应及免疫组织化学的方法检测MMP-1、3及iNOS在软骨中的mRNA和蛋白的表达结果。结果ACLT造模术后4周即开始出现软骨早期退变表现,造模8周软骨退变加重,造模12周出现OA晚期软骨退变表现,不同造模时期的大体评分差异有统汁学意义,造模4周MMP-1、3及iNOS表达量明显高于对照组,随着造模时间延长MMP-1、3及iNOS表达量进一步升高,MMP-1、3及iNOS在退变软骨的不同阶段表达分布有各门的特点。结论ACLT模型能够表现OA软骨降解退变的全过程,适宜用于OA防治研究,MMP-1、3及iNOS的高表达在OA软骨退变的病理过程中起着重要的作用,随着造模时间延长、软骨退变的加重,表达量持续升高,适合作为OA防治研究中的评价指标。
- 赫淑倩王海斌孙青赵冬梅刘世清邱波
- 关键词：基质金属蛋白酶类诱导型一氧化氮合酶骨关节炎
- 羧甲基壳聚糖对环磷酰胺诱发小鼠骨髓微核率的观察
- 2006年
- 余洋刘世清杜予民陈莹
- 关键词：羧甲基壳聚糖小鼠
- 羧甲基壳聚糖对兔骨关节炎软骨一氧化氮合酶表达的影响被引量：6
- 2006年
- 目的探讨关节腔注射羧甲基壳聚糖(CMCTS)对骨关节炎(OA)软骨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法大耳白兔32只,每只兔单侧膝关节行前交叉韧带切断术,术后5周将兔随机分为4组,每组8只,A组：关节腔注射2%高相对分子质量的CMCTS 0．3ml,每2周重复1次；B组：同等条件下注射2%低相对分子质量的CMCTS 0．3ml；C组：关节腔注射1%透明质酸钠(Na-HA)0．3ml,每周重复1次；D组：关节腔不注射任何药物。术后11周处死动物。采用免疫组织化学、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测软骨iNOS的表达。结果免疫组织化学及RT-PCR显示CMCTS注射组软骨iNOS的表达水平显著低于Na-HA注射组和不用药组,不同相对分子质量CMCTS注射组之间、Na-HA注射组和不用药组之间比较,iNOS的表达差异无统计学意义。结论CMCTS能够明显抑制OA软骨i NOS的表达,Na-HA对OA软骨iNOS的表达没有显著下调作用。
- 邱波刘世清陶海鹰彭昊陈凌云杜予民
- 关键词：骨关节炎软骨羧甲基壳聚糖诱导型一氧化氮合成酶
- 关节腔注射羧甲基壳聚糖对兔骨关节炎关节软骨MMP-1,-3 mRNA表达的影响被引量：15
- 2004年
- 目的观察关节腔注射羧甲基壳聚糖(CMCTS)对骨关节炎(OA)模型中关节软骨退变及软骨中基质金属蛋白酶1,3(MMP1,3)mRNA表达的影响。方法16只大耳白兔行单侧前交叉韧带切断术,术后5周将动物随机分为2组,每组8只,实验组关节腔注射2%CMCTS0.3ml,每2周1次,共注射3次,对照组不注射任何药物。术后11周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用RTPCR方法检测软骨中MMP1和MMP3的mRNA表达。结果实验组软骨退变程度较对照组明显减轻,实验组软骨MMP1和MMP3的mRNA表达明显低于对照组(P<0.01)。结论关节腔注射CMCTS能够明显抑制OA软骨中MMP1和MMP3mRNA的表达,明显减轻软骨退变的程度,对软骨有一定保护作用。
- 刘世清邱波杜予民彭昊陈凌云王海斌
- 关键词：关节腔注射MRNA表达MMP-1关节软骨MMP-3骨关节炎
- 羧甲基壳聚糖的骨髓细胞染色体畸变试验被引量：3
- 2008年
- 刘世清熊文杜予民丁万军
- 关键词：羧甲基壳聚糖遗传毒性致突骨髓细胞染色体畸变
- 透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质增殖能力和表型的影响被引量：8
- 2008年
- 目的研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β（rrIL-1β）诱导体外骨关节炎（OA）软骨细胞的表型和增殖能力的影响，并探讨其作用机制。方法体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后，加入不同浓度的透明质酸（10、20、40μg／ml），1h后，以10ng／ml IL-1β刺激，培养24h后，通过噻唑蓝（MTT）和流式细胞仪检测细胞增殖能力；以反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western—blotting检测Ⅰ、Ⅱ胶原及聚集蛋白聚糖的mRNA合成和蛋白表达。以Griess反应测定上清液中一氧化氮（NO）浓度，并通过诱导型一氧化氮合酶催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算iNOS的活力。结果透明质酸可有效抑制IL-1β诱导OA软骨细胞iNOS的活性和NO的产量。MTT和流式细胞仪检测显示透明质酸能恢复OA软骨细胞的增殖能力；RT—PCR和Western—blotting检测显示透明质酸能提高OA软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达和蛋白合成，抑制Ⅰ型胶原mRNA的表达和蛋白合成，且呈剂量依赖性。结论透明质酸对软骨细胞正常表型的维持有保护作用，并能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制，这可能与透明质酸降低NO的含量和iNOS的活性有关。
- 周庞虎刘世清
- 关键词：透明质酸白细胞介素类软骨细胞
- 关节腔注射羧甲基壳聚糖预防膝骨关节炎软骨退变被引量：11
- 2005年
- 目的观察羧甲基壳聚糖(CMCTS)关节腔注射对骨关节炎(OA)模型关节软骨退变及软骨基质金属蛋白酶(MMP-1,-3)及其组织抑制物(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法32只大耳白兔行单膝前交叉韧带切断术,随机分为A^D组,A、B组分别于术后立即关节腔注射高、低分子量2%CMCTS 0.3 ml,每2周1次;C组术后立即关节腔注射1%透明质酸钠(SH)0.3 ml,每周1次;D组术后不注射任何药物。术后6周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测软骨MMP-1,-3及TIMP-1 mRNA的表达水平。
- 刘世清邱波杜予民陈凌云彭昊何炳书
- 关键词：羧甲基壳聚糖基质金属蛋白酶类软骨关节软骨退变关节腔注射膝骨关节炎
- 羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶-1,3的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨羧甲基壳聚糖抑制重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激下的兔软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)的作用机制。方法:分离、培养兔软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)或L-精氨酸甲酯(L-NAME),培养24h后,检测上清液中的一氧化氮含量和软骨细胞内的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力。提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测iNOS,MMP-1,MMP-3的mRNA表达。通过ELISA方法检测上清液中MMP-1,MMP-3的含量。结果:IL-1β能够增加软骨细胞一氧化氮的释放及iNOS的酶活性,诱导细胞iNOS,MMP-1,3的mRNA表达,增加MMP-1,3的分泌。羧甲基壳聚糖对软骨细胞一氧化氮的释放,iNOS酶活力及iNOSmRNA表达均有抑制作用,不同浓度的抑制效果相近;它对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及MMP-1,3的分泌也有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。L-NAME对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及分泌也有抑制作用,但L-NAME与羧甲基壳聚糖对一氧化氮的影响相似时,羧甲基壳聚糖对MMP-1,3mRNA表达和分泌的抑制作用强于L-NAME。结论:羧甲基壳聚糖抑制软骨细胞合成MMP-1,MMP-3是部分通过降低iNOS表达,减少一氧化氮合成来实现的。
- 陈庆刘世清李亚明杜予民
- 关键词：羧甲基壳聚糖白细胞介素-1软骨细胞
- 透明质酸钠对兔创伤性骨关节炎软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的干预(英文)被引量：1
- 2006年
- 背景:各种关节损伤、关节手术后导致的创伤性骨关节炎较为常见,关节腔注射透明质酸钠已被视为一种治疗骨关节炎的有效手段。目的:以前交叉韧带切断的方法建立兔创伤性骨关节炎模型,观察关节腔注射透明质酸钠对其关节软骨中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达水平的影响。设计:随机对照动物实验。单位:武汉大学人民医院骨科。材料:实验于2003-04/12在武汉大学人民医院骨科实验室完成。选取清洁级5～6月龄大耳白兔16只,随机数字表法分为透明质酸钠注射组、生理盐水对照组,8只/组。透明质酸钠(上海建华精细生物制品有限公司提供,国药准字2000第366095号)。方法:①两组均建立创伤性骨关节炎模型。每只兔以氯胺酮1.0mg/kg体质量麻醉,单侧膝关节行前交叉韧带切断造模。②术后第5周,透明质酸钠注射组患膝关节腔注射质量浓度为10g/L的透明质酸钠0.3mL,1次/周,连续5周。生理盐水对照组注射等量生理盐水。③术后10周处死,观察两组股骨内髁关节软骨的大体形态学(0分:关节面光滑,色泽正常;1分:关节面粗糙,有小的裂隙,色泽灰暗;2分:关节面糜烂,软骨缺损达软骨表层或中层;3分:关节面溃疡形成,缺损达软骨深层;4分:软骨剥脱,软骨下骨质暴露)和组织学病理变化,采用反转录聚合酶链反应方法检测软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达情况。主要观察指标:①两组股骨髁关节面标本大体观察结果。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果。③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达。结果:实验选取清洁级大耳白兔16只,全部进入结果分析。①两组股骨髁关节面标本大体观察结果:解剖显微镜下观察股骨髁关节面病理变化,透明质酸钠注射组软骨退变程度较生理盐水对照组明显减轻。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果:透明质酸钠注射组见软骨膜变性脱落,表�
- 何小俊邱波刘世清陶海鹰方洪松
- 关键词：骨关节炎透明质酸一氧化氮合酶软骨
- 羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡及作用机制的研究被引量：5
- 2006年
- 目的评价羧甲基壳聚糖对重组人白细胞介素(rhIL)-1β刺激下软骨细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养兔软骨细胞,加入不同浓度羧甲基壳聚糖预处理1h后,加入rhIL-1β共培养24h,通过Annexin V-FITC和PI双标及Hoechst 33342荧光染色检测软骨细胞凋亡；以罗丹明-123荧光染色检测线粒体膜电位和荧光素酶反应检测线粒体合成ATP能力来评价线粒体功能。结果羧甲基壳聚糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性；羧甲基壳聚糖可恢复IL-1β对软骨细胞线粒体功能的损害。结论羧甲基壳聚糖通过保护线粒体功能抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。
- 陈庆刘世清杜予民彭昊余洋孙立苹
- 关键词：壳聚糖白细胞介素1软骨细胞凋亡
