国家重点基础研究发展计划(G1999011901)
- 作品数：17 被引量：284H指数：9
- 相关作者：谢庆阁刘在新常惠芸张显升李冬更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所中国农业大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 口蹄疫病毒China/99基因组RNA序列测定及比较分析被引量：10
- 2003年
- 测定了1999年我国口蹄疫流行毒株(China/99,Tibet)基因组全序列,China/99基因组RNA全长8173个核苷酸(nt),开放阅读框含盖6999nt,编码2332个氨基酸的聚合蛋白。5’和3’非翻译区(UTR)分别长1081和93nt.China/99与12株参考株基因组序列比较发现:China/99与英国2001年流行毒、海南和西藏1999年流行毒Id基因的序列同源性高达97％以上,均属泛亚毒株;在牛和猪FMDV的功能未知区、p2和p3区存在较为显著的核苷酸序列差异,3a基因最为显著;l,1a,1b,2a,2c,3b和3d基因没有核苷酸缺失或插入现象,属于病毒必需基因;口蹄疫病毒S片段、功能未知区和内部核糖体进入位点(IRES)二级结构均可分为3种类型。S片段和3’UTR折叠成一个三叶草类似结构。
- 张显升刘在新赵启组常惠芸谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒核苷酸氨基酸
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达被引量：21
- 2004年
- 从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9～ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组
- 曹轶梅刘在新卢曾军胡永浩常惠芸谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒3ABC基因3AB基因基因克隆基因表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达、纯化与结构分析被引量：5
- 2004年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)BJ 4毒株N基因克隆至原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组表达载体pET2 8 N ,转化EscherichiacoliBL2 1(DE3)细胞 ,获得可溶性表达 ,表达量占菌体蛋白的 2 8%。经ProbandNi2 + 亲和层析获得重组蛋白P2 8 N ,圆二色谱 (CD)测定结果表明 ,P2 8 N重组蛋白螺旋占 2 6 1% ,折叠占 2 3 7% ,转角 19 8% ,卷曲占 30 3%。
- 黄金海杨汉春郭鑫陈艳红查振林
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白圆二色谱
- FMDV OH99株基因组全序列的测定及其基因特征研究被引量：5
- 2003年
- 采用RT-PCR方法对FMDV OH99株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明OH99株基因组全基因组序列长8040nt,其中5’NCR长1026nt,前导蛋白(L)编码区长603nt。该毒株结构蛋白与非结构蛋白编码区的核苷酸序列为6318nt,3’NCR长93nt,其后是poly(A)尾巴,测序结果表明该结构至少含有56个A。应用分子生物学软件,将OH99株与其它参考毒株进行了序列比较,并对其基因特征、推导的氨基酸序列进行了研究分析。结果显示,在分类地位上OH99株归属于O型FMDV,与OTY TW/97具有较高的同源性,而与其他参考毒株的差异性比较大,而且在基因组功能未知区域和3A编码区域具有两处明显的基因片段缺失现象,其中3A编码区缺失30nt,与OTY TW/97株相同,但功能未知区域的缺失状况与OTY TW/97稍有差异。根据VP1基因序列,对OH99株与参考毒株进行了系统发生树分析,分析结果表明OH99株与OTY TW/97株在同一基因型内,其遗传关系最近,而与其毒株遗传关系较远。
- 刘光清刘在新张显升常惠芸郭慧琛李冬刘相涛谢庆阁
- 关键词：FMDV分子克隆非编码区结构蛋白口蹄疫病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的全基因组分子特征
- 采用5’Fill RACE技术及RT-PCR方法,分段设计引物,成功扩增出包含猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株HB-2(sh)/2002全基因组的所有cDNA片段,分别克隆到pGEM-T Easy质粒载体,经序列测定和拼接获...
- 高志强郭鑫杨汉春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子特征
- 文献传递
- 大肠埃希氏菌表达FMDV3AB非结构蛋白的纯化复性与活性检测被引量：13
- 2003年
- 采用超声波裂解细菌 ,高浓度尿素裂解包涵体和金属螯合亲合层析的方法对大肠埃希氏菌中表达的FMDV 3AB非结构蛋白进行纯化 ,经SDS PAGE分析 ,3AB融合蛋白纯度达 90 %以上。采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对融合蛋白进行复性 ,通过Westernblotting分析 ,表明复性后的 3AB融合蛋白能与抗FMDV抗体发生特异性结合。ELISA检测表明 ,复性后的 3AB融合蛋白有很好的抗原活性。
- 曹轶梅卢曾军刘在新谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒复性抗原活性
- 小RNA病毒蛋白翻译调控元件研究进展被引量：10
- 2004年
- 真核生物的起始复合物并不是在起始AUG处形成 ,而是在mRNA的 5′末端形成 ,其识别信号就是 5′末端的帽子结构。小RNA病毒科成员RNA 5′末端没有帽子结构 ,而有一个病毒编码的小蛋白质与基因组共价相连。小RNA病毒的蛋白翻译起始于 5′非翻译区中的内部顺式调控元件 ,称为内部核糖体进入位点 (IRES)。口蹄疫病毒 (foot and mouthdiseasevirus,FMDV)是该科病毒的典型代表 ,引起偶蹄动物的急性接触性传染病。完整FMDV含有单链正股RNA、衣壳蛋白及少量装配过程中夹带的非结构蛋白和宿主细胞肌动蛋白 ,其基因组RNA全长约 8 5kb ,可直接作为信使RNA。对IRES的一、二级结构进行了比较 。
- 张显升任艳魏艳丽李红梅王少杰蒋宏彬谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒蛋白翻译调控元件核糖体
- 反向遗传学技术及其在FMDV研究中的应用被引量：12
- 2003年
- 反向遗传技术是一种新兴的分子生物学技术 ,已广泛应用于生命科学研究的各个领域。综述反向遗传技术研究进展 ,并讨论该技术在口蹄疫病毒研究中的应用。
- 刘光清刘在新谢庆阁
- 关键词：反向遗传学反向遗传技术全长CDNA克隆技术
- 口蹄疫病毒基因组内部核糖体进入位点一级和二级结构分析被引量：8
- 2002年
- 以口蹄疫病毒 (foot-and -mouthdiseasevirus,FMDV)强毒China/ 99株牛舌水泡皮为材料 ,用RT -PCR法提取RNA及扩增目的cDNA ,然后与 pGEM -TEasy载体连接并转化JM10 9菌株 ,再经重组质粒电泳、PCR和 EcoRI酶切鉴定。用DNAstar软件比较了内部核糖体进入位点 (IRES)的序列差异 ,并用RNAdraw软件绘制和分析了该区段的二级结构。 8株FMDVIRES核苷酸序列比较表明该区段较为保守 ,并对非保守区域进行了分析。二级结构分析表明 ,FMDVIRES至少有 3种二级结构图形 :第一型有 5个结构域 ,与Pilipenko等报道的一致 ;第二和三型分别有 6和 11个结构域 ,与Pilipenko等报道的结果不同。无论FMDVIRES二级结构如何不同 ,但单链区大部分核苷酸序列或基序相同 ,如AACUCC、GAAA、CUUU、AGG、AACC、GUAA等。茎环柄部核苷酸对维持二级结构的空间构像具有十分重要的作用 ,环中或单链区序列 (基序 )在维持其功能方面具有很重要的作用 。
- 张显升赵启祖刘在新江鹏斐常惠芸陈应理李冬魏怀录谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因组内部核糖体进入位点
- 用3′RACE方法扩增并克隆口蹄疫病毒基因组3′末端序列被引量：4
- 2003年
- 应用 3′RACE方法扩增并克隆了口蹄疫病毒 ( FMDV) OH99株基因组 3′端真实序列。测序结果表明 ,所扩增的目的基因片段长 15 0 0 nt,包括 3D基因部分序列、3′端非编码区 ( Non- Coding Region,NCR)和 Poly( A)尾巴 ,其中 3′NCR位于终止密码子 TAA之后 ,长 93nt,Poly( A)尾序列至少含有 5 6个 A。与参考毒株进行序列比较 ,结果显示 ,OH99株与 OTY TW/ 97株的核苷酸同源性较高 ,为 91.4 % ,而与 O1K、CHINA99、A12等毒株的核苷酸同源性较低 ,其同源性分别为 6 8.1%、71.0 %、70 .2 %。 3′NCR的末端存在保守性较高的基序 :CCCTCAGATG,TTTTCCC-CGCTTCCT。本研究为进一步研究 FMDV基因组的功能、构建 OH99株的反向遗传操作系统奠定了基础。
- 刘光清刘在新谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因克隆同源性
