宁夏回族自治区自然科学基金(NZ11262)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
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- 人胎盘MSCs对异基因小鼠皮肤移植排斥的免疫调节作用被引量：3
- 2013年
- 目的观察人胎盘MSCs(placental-derived MSCs,PMSCs)对异基因小鼠皮肤移植的影响。方法取自愿捐赠人胎盘胎儿侧组织,分离培养PMSCs,并以第3代细胞进行实验。选择30只6～8周龄C57BL/6小鼠作为受体,背部制作直径12 mm圆形皮肤缺损;以1～2日龄Vr∶CD1(ICR)乳鼠皮肤作为供体,建立小鼠异基因皮肤移植排斥模型。将30只受体小鼠随机分为3组,每组10只。A组为自体皮肤移植组,B组为同种异体皮肤移植+PBS尾静脉注射组,C组为同种异体皮肤移植+人PMSCs(1×105个/只)尾静脉注射组。观察各组移植皮片成活情况,检测术后7 d受体小鼠血液白细胞数量、腹腔液巨噬细胞活化率,采用ELISA、RT-PCR法检测受体小鼠血液、脾脏中IL-4、IL-17及IFN-γ表达量的变化。结果 A、B、C组移植皮片成活时间分别为(58.33±4.04)、(3.80±0.92)、(6.80±0.82)d,A组明显优于B、C组,C组优于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后7 d,A、B、C组小鼠血液白细胞计数分别为(6.32±0.45)×109/L、(7.45±0.52)×109/L、(6.35±0.39)×109/L,A、C组显著低于B组(P<0.05),A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组小鼠巨噬细胞活化率分别为6.87%±2.40%、7.84%±0.44%、15.98%±2.87%,C组显著高于A、B组(P<0.01)。ELISA检测示,3组血液中IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05);C组IL-17和IFN-γ含量显著低于B组(P<0.05);B组IFN-γ含量明显高于A组(P<0.05);其余各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测示,B、C组IL-4、IL-17和IFN-γmRNA相对表达量与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C组IL-4和IFN-γmRNA相对表达量明显低于B组(P<0.05),IL-17 mRNA相对表达量与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论异基因小鼠皮肤移植后尾静脉注射人PMSCs可抑制免疫排斥反应,其机制可能与减少IL-17及IFN-γ等相关细胞因子分泌有关。
- 王琼刘婷张耀林陈冬梅王立斌李玉奎魏军
- 关键词：免疫排斥异基因
- 小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的：构建携带小鼠CD200基因的重组腺病毒载体,并鉴定其在小鼠胰腺内皮细胞（mile sven 1,MS1）中mCD200基因的表达情况。方法：mCD200基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒pYr-adshuttle-4,获得重组质粒pYr-ads-4-mCD200。从该重组质粒上利用LR（attL×attR）特异性同源重组的方法,将mCD200表达框构建至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST上,获得的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd-4-mCD200,并用酶切和PCR等鉴定。采用TCID 50（tissue cell infectious dosage 50,TCID50）法测定重组腺病毒滴度。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,并感染小鼠内皮细胞MS1,通过荧光显微镜、real-time PCR检测MS1中小鼠CD200基因的表达。结果：PCR鉴定重组腺病毒证实重组腺病毒rAd-4-mCD200构建成功;扩增后检测病毒滴度约为109~1010pfu/ml;荧光显微镜及real-time PCR检测发现该重组腺病毒能在MS1细胞中高效的表达。结论：构建的重组腺病毒rAd-4-mCD200在MS1细胞中成功表达mCD200基因,为下一步开展关于CD200基因免疫抑制调节等相关研究奠定了基础。
- 王琼陈冬梅王立斌魏军李玉奎
- 关键词：腺病毒载体CD200免疫调节
