浙江省中医药管理局科研基金(2003C073)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：金洁童向民孟海涛薛永权钱文斌更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院浙江大学苏州大学更多>>
- 发文基金：浙江省中医药管理局科研基金浙江省科技厅科技计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 急性髓系白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的研究被引量：11
- 2004年
- 目的 将急性髓系白血病 (AML)原代细胞诱导成树突状细胞 (DC) ,并探索白血病免疫治疗的新途径。方法 分离初诊AML患者 12例和正常人 6例的骨髓单个核细胞 ,用重组人粒单核细胞集落刺激因子 (rhGM CSF) 10 0 0U /ml、重组人白细胞介素 4(rhIL 4) 50 0U/ml和肿瘤坏死因子α(TNF α) 50U/ml联合培养 10d ;经形态学 (Wright染色、倒置显微镜、透射电镜 ) ,免疫学 (CD80 、CD86 、CD83 、CD1a、HLA DR)鉴定 ,荧光原位杂交 (FISH)进行细胞遗传学分析 ,混合淋巴细胞反应检测功能。结果 细胞因子联合诱导后 ,呈现DC的典型形态 ,CD80 、CD86 、CD83 、CD1a的表达与对照组比较明显上调 (P <0 0 5) ,具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。经FISH证实来源于白血病细胞的这类DC与正常DC在形态和免疫学表达方面相似 (P >0 0 5) ,但功能较弱。结论 在体外可成功的将AML原代细胞诱导分化成DC 。
- 童向民金洁薛永权王云贵
- 关键词：急性髓系白血病细胞诱导分化树突状细胞
- 慢性髓系白血病来源的树突状细胞生物学特性的研究被引量：5
- 2005年
- 目的:体外诱导慢性髓系白血病(CML)原代细胞分化生成树突状细胞(DendriticcellsDCs),并研究其生物学特性和功能。方法:分离初诊13例CML患者的骨髓单个核细胞和5例正常人外周血的单个核细胞,用rhGM-CSF1000U/ml、rhIL-4500U/ml和TNF-α50U/ml联合培养10d;形态学(Wright染色、倒置显微镜、透射电镜),免疫学(CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR)鉴定,荧光原位杂交(FISH)进行细胞遗传学分析,ELISA检测分泌IL-12的能力和混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能。结果:慢性白血病细胞体外诱导后,大部分细胞呈现树突状细胞的典型形态,而且有免疫标记的明显上调(CD8624.49±25.87vs61.73±28.54;CD1a10.41±9.52vs47.26±35.60,P<0.05);FISH证实这类DC还携带有白血病克隆,并且具有分泌IL-12和刺激T淋巴细胞增殖的能力。结论:在体外可成功地将CML细胞诱导分化成树突状细胞,这类DC与正常DC无论在形态学和免疫学表达方面均相似,但是功能较弱。
- 童向民金洁钱文斌孟海涛薛永权
- 关键词：白血病髓系树突状细胞肿瘤细胞
- 人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究被引量：3
- 2006年
- 目的:以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)融合基因,并观察其生物学功能。方法:健康人单核细胞经RT-PCR扩增hIL-18后、T-A克隆。亚克隆至经N heⅠ、H indⅢ酶切的PCDNA 3.1(+)/hTERT中,限制性内切酶验证后,挑选出含有目标基因的正确克隆。经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT/hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T 3细胞中表达,经W estern-b lot验证目的基因表达产物,同时对转染细胞作免疫荧光染色。以EL ISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌γ干扰素的能力,以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力。结果:hTERT/hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA 3.1(+)构建成功,经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析,该基因片段与NCB I基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99.9%;而细胞转染后经W estern-b lot验证,hTERT/hIL-18融合蛋白的分子量约127 kM r,与预期一致,荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达。此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素,并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能。结论:本实验构建的PCDNA 3.1(+)/hTERT-hIL-18质粒能够在真核细胞中表达,并具有生物学功能,为进一步转染树突状细胞,研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。
- 童向民金洁姚航平钱文斌孟海涛
- 关键词：白细胞介素18基因表达端粒酶逆转录酶蛋白
- 白血病细胞和正常细胞生成树突状细胞的比较研究被引量：5
- 2005年
- 目的 体外诱导髓系白血病原代细胞分化生成树突状细胞 (dendritic cell,DC) ,并与正常的 DC比较。方法 分离初诊 2 4例急性髓细胞性白血病和 10例慢性髓细胞性白血病患者的骨髓单个核细胞以及 5例正常人外周血的单个核细胞 ,用 rh GM- CSF 10 0 0 U/ m1、rh IL- 4 5 0 0 U/ m l和 TNF- α5 0 U/ m l联合培养 10天 ;形态学(Wright染色、倒置显微镜、透射电镜 )、免疫学 (CD80、CD86、CD83、CD1a、HL A- DR)鉴定 ,RT- PCR检测白血病克隆以及混合淋巴细胞反应 (ML R)检测抗原递呈功能。结果 细胞因子诱导后 ,正常细胞和白血病细胞均出现典型形态的树突状细胞 ,CD80、CD86、CD83、CD1a的表达明显上调 (正常和 CML- DC的 HL A- DR也明显上调 ) ,急性和慢性髓细胞性白血病以及正常细胞来源的树突状细胞具有不同程度的刺激异基因 T淋巴细胞增殖的能力。结论 无论是急性和慢性白血病细胞均能诱导分化成 DC,并且特征完全相似 ;白血病与正常骨髓的 DC在形态和免疫学表达方面相似 ,但功能较弱。
- 童向民金洁李敏伟符哲海孟海涛
- 关键词：树突细胞免疫学
