国家自然科学基金(81250034)
- 作品数：11 被引量：21H指数：2
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- 伴del(5q)的骨髓增生异常综合征的分子生物学研究进展被引量：1
- 2015年
- 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)是一组起源于多能造血干/祖细胞的异质性恶性血液病,其发病机制尚不清楚。5号染色体长臂缺失是其最常见的分子生物学改变之一,与MDS的发病密切相关。RPS14、SPARC单倍剂量不足、micro RNA、P53基因突变等分子生物学改变均在del(5q)患者中发现,其中RPS14已证实在5q-综合征中发挥抑癌基因的作用。本文拟对近年来发现的伴del(5q)的MDS患者的分子生物学改变做一综述。
- 年青王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征5Q-综合征核糖体微小RNA
- 外周血造血干细胞移植治疗急性白血病50例疗效分析被引量：2
- 2013年
- 目的：评价外周血造血干细胞移植（peripheralbloodstemcelltransplantation，PBSCT）治疗急性白血病（acuteleukemia，AL）的临床疗效，比较异基因PBSCT（allogeneicPBSCT，Allo—PBSCT）与自体PBscT（autologousPBSCT，Auto—PBSCT）在AL治疗方面的优缺点，探讨移植预处理方案的选择及疗效。方法：回顾性分析我院从2004—2012年间收治的50例因AL行PBSCT的病例，其中21例男性，29例女性，行Allo—PBSCT及Auto—PBSCT的分别为28例及22例。分析移植疗效及并发症，比较异基因及自体移植复发率、无病生存率（disease—freesurvival，DFS）及移植相关死亡率（transplantrelatedmortality，TRM）的差异。分析预处理死亡及植入成功率。结果：50例患者中除2例MAC（马法兰＋阿糖胞苷＋环磷酰胺）方案预处理患者植入失败外，其余48例获得造血重建，移植成功率96％，中位白细胞植活时间（〉0．5×10-9个几）为11．3d[（7～24）d]，中位血小板植活时间（〉20×109个几）为14．3d[（5—44）d]。异基因移植与自体移植相关死亡例数分别为8例、3例，TRM为28．6％、15．O％；累计DFS分别为46．4％、35．O％；累计复发率分别为25．0％、55．0％。随访时间内异基因及自体移植的总存活率（overallsurvivalrate，os）为57．1％、50．O％，两者移植前处于首次化疗缓解（completeremissionatfirstcourse，CRl）及非首次化疗缓解或未缓解状态的患者，移植后0s分别为61．5％、53．3％及45．5％、55．6％；累计DFS分别为46．2％、46．7％及27．3％、44．4％；死亡率分别为38．5％、46．7％及54．5％、44．4％。结论：PBSCT是治疗AL的有效手段，特别是移植前状态处于CRl的患者移植效果更好。异基因移植后复发率较自体移植低，长期DFS较高，但移植相关并发症多，TRM较高。预处理方案的优化是提高移植疗效的关键，以马利兰，环磷酰胺方案为基础�
- 廖欣王利刘林陈建斌王建渝张红宾肖青唐晓琼陈礼平杨泽松
- 关键词：外周血造血干细胞移植异基因自体急性白血病疗效
- miR-143增强SKM-1细胞对阿糖胞苷的药物敏感性被引量：1
- 2018年
- 该文探讨了miR-143增强SKM-1细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的药物敏感性以及其相应机制。采用CCK-8法筛选出Ara-C干预的最佳条件。采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。采用Western blot检测Akt、p Akt蛋白表达水平。结果显示,过表达miR-143联合Ara-C组的细胞凋亡率(88.50%)显著高于空病毒对照联合Ara-C组(67.47%)及过表达miR-143组(31.01%),差异具有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-143联合Ara-C组G1期的细胞比例(87.24±6.12)%显著高于空病毒对照联合Ara-C组(72.10±3.71)%和过表达miR-143组(57.73±5.02)%,呈现较明显的G1期阻滞。过表达miR-143+Ara-C组的p Akt蛋白相对表达量相比于空病毒对照+Ara-C组和过表达miR-143组明显降低(P<0.05),而各组Akt蛋白相对表达量无明显差异(P>0.05)。以上结果表明,过表达miR-143能够提高SKM-1细胞对阿糖胞苷的药物敏感性,其机制可能与通过降低Akt蛋白磷酸化水平有关。
- 崔佳奇邓琳丽王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征MIR-143阿糖胞苷药物敏感性细胞周期
- SPARC基因过表达对SKM-1细胞凋亡的影响
- 2014年
- 构建SPARC基因过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞系SKM-1细胞,探讨SPARC基因过表达对人MDS细胞系SKM-1细胞凋亡的影响。以pcDNA-SPARC为引物,PCR扩增SPARC基因;将靶基因克隆入慢病毒载体pGC-GV,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体pGC-GV-SPARC转染人MDS细胞系SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达,Western blot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)对实验组增殖抑制的影响,Annexin V检测SPARC基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为(64.25±1.42)%;转染后,SPARC mRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高,加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。由此说明,作者成功构建了携带人SPARC基因的慢病毒载体,转染人SKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因,SPARC过表达可抑制细胞增殖,且联合小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)更有效地抑制SKM-1细胞的增殖,并诱导其凋亡。
- 年青魏春梅黄婧但春莉肖青杨泽松王利
- 关键词：阿糖胞苷慢病毒载体骨髓增生异常综合征
- miR-143通过抑制AF9调控SKM-1细胞增殖和凋亡被引量：1
- 2018年
- 目的探讨miR-143在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)中的表达情况及AF9对人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测收集的33位MDS/AML患者以及11位健康人(健康对照)的骨髓标本中miR-143的表达;细胞实验分为过表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143的慢病毒载体)、低表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143-inhibitors的慢病毒载体)和阴性对照组(SKM-1细胞感染含空病毒LV-control的慢病毒载体),分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测各组SKM-1细胞增殖、周期和凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测miR-143对下游靶基因AF9在转录水平的影响;Western blot测定miR-143对下游靶基因AF9蛋白表达水平的影响。结果与健康对照比较,MDS患者的miR-143相对表达水平明显降低(P <0. 05);过表达组的光密度值在第3天为(0. 562±0. 069),明显低于阴性对照组(P <0. 05);低表达组的光密度值在第3天为(1. 537±0. 094),明显高于阴性对照组(P <0. 05);过表达组G0/G1期细胞比例为(57. 92±3. 58)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);低表达组G0/G1期细胞比例为(29. 73±2. 44)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);过表达组细胞凋亡率为(29. 80±2. 53)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);而低表达组细胞凋亡率为(5. 17±1. 04)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);miR-143可以显著抑制AF9 3’-UTR野生型的报告基因活性;低表达组AF9蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P <0. 05)。结论 miR-143在MDS患者中的相对表达水平明显减低;过表达miR-143后骨髓增生异常综合征SKM-1细胞增殖活性降低、G0/G1期细胞阻滞增多、凋亡率增加;同时miR-143能够负性调节其靶基因AF9。
- 崔佳奇魏春梅邓琳丽王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征MIR-143细胞凋亡细胞周期
- 自体外周血造血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤56例临床分析被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨自体外周血造血干细胞移植（autologous peripheral blood stem cell transplantation,APBSCT）治疗非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）的临床疗效。方法：回顾性分析2009年2月至2013年10月在我院行APBSCT的NHL患者56例,其中男37例,女19例,中位年龄44岁（16~69）岁,缓解病例46例,部分缓解7例,复发难治3例。结果：56例移植患者中55例获造血重建,1例未造血重建。中性粒细胞绝对值〉0.5×109个/L的中位时间9.5 d（7~18 d）、血小板计数〉20×109个/L的中位时间11.5 d（6~24 d）。24例患者于粒细胞缺乏期时出现发热,5例出现轻中度腹泻,1例出现轻度肝功能损害,1例出现带状疱疹。所有患者随访截止于2014年4月1日,中位随访时间20.25月（3.0~60.5月）。45例存活（其中5例带病生存）,10例复发,11例死亡（其中5例死于复发）。复发率为17.9%,总生存率（overall survival,OS）、无病生存率（disease free survival,DFS）分别为80.4%、71.4%。结论：APBSCT是治疗NHL的有效手段,造血重建快,并发症少。
- 张端众肖青张红宾唐晓琼王建渝王欣杨泽松陈建斌刘林王利
- 关键词：造血干细胞移植自体非霍奇金淋巴瘤
- 自体外周血造血干细胞移植治疗高危难治恶性淋巴瘤96例疗效分析被引量：8
- 2017年
- 目的探讨恶性淋巴瘤患者接受自体外周血造血干细胞移植的疗效及预后因素。方法收集96例恶性淋巴瘤患者病理资料,常规化疗后均接受自体外周血造血干细胞移植。统计患者的基本临床资料、移植前相关指标及预后情况,采用SPSS19.0统计软件对预后情况进行Kaplan-Meier生存分析,应用Cox比例风险模型进行预后因素分析,回顾性的分析总体疗效及预后因素。结果 96例患者中94例顺利完成造血重建,中性粒细胞重建时间为7~19d,平均9d;血小板重建时间10~37d,平均16d;随访时间0~74个月,平均26个月。3年总体生存(OS)率为86.4%,3年无进展生存(PFS)率为70.3%。单因素分析显示IPI评分大于2分、移植前未能达到完全缓解(CR)、乳酸脱氢酶(LDH)高于正常水平、骨髓浸润等为不良预后因素,多因素分析显示移植前状态及LDH水平为独立影响因素。结论大剂量化学治疗联合自体外周血造血干细胞移植是高危难治恶性淋巴瘤安全、有效的治疗方法。移植前能否达到CR、LDH水平为移植疗效的影响因素。
- 张丽霞刘林陈建斌肖青唐晓琼张红宾王建渝陈礼平王欣王利
- 关键词：外周血造血干细胞移植淋巴瘤个体化治疗
- 自体外周血造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤99例临床分析被引量：7
- 2017年
- 目的:探讨自体外周血造血干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell transplantation,APBSCT)治疗恶性淋巴瘤的疗效。方法:回顾性分析2005至2015年于我院血液科接受APBSCT治疗的99例恶性淋巴瘤患者的临床资料。结果:(1)99例患者中,男性68例,女性31例,中位发病年龄44(16~69)岁。其中,非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)88例(BNHL 60例,T-NHL 28例),霍奇金淋巴瘤11例;国际预后指数(international prognostic index,IPI)评分≤2和IPI评分>2分别为78例和21例;移植前处于完全缓解(complete remission,CR)状态的患者65例;临床分期Ⅲ~Ⅳ期者84例;移植前化疗中,31例B-NHL应用利妥昔单抗联合化疗,29例未使用。(2)全部患者动员后均采集到足够的造血干细胞,其中2例未获得全面造血重建,后因脓毒血症死亡,其余患者均造血重建成功。全组中位随访时间25(0~109)个月,3年总生存(overall survival,OS)率和无进展生存(progression-free survival,PFS)率分别为74.70%和61.60%。移植前达CR状态患者的3年OS率和PFS率分别为86.20%和76.90%;未达CR状态的3年OS率和PFS率分别为52.90%和32.40%;两组相比OS率和PFS率差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.000)。移植前IPI评分处于低中危组(IPI≤2)患者的3年PFS率为69.20%,中高危组(IPI>2)3年PFS率为33.30%,2组间PFS率差异有统计学意义(P=0.000)。B-NHL患者的3年PFS率与T-NHL相比差异有统计学意义(3年PFS率70.00%vs.42.90%,P=0.019)。B-NHL中应用1~2疗程利妥昔单抗联合化疗组、3~4疗程组与未使用组相比OS率和PFS率差异均无统计学意义(P=0.152,P=0.368)。结论:APBSCT是治疗恶性淋巴瘤安全、有效的方法;移植前未达CR状态、移植前IPI评分>2以及T-NHL为影响恶性淋巴瘤的预后不良因素。
- 黄婧王利
- 关键词：造血干细胞移植自体淋巴瘤利妥昔单抗
- miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响
- 2016年
- 目的研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响。方法我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞。然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达。用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证。结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)%,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)%、(2.78±1.04)%,P<0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高。用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达。结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达。
- 匡兴怡魏春梅张涛王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征细胞凋亡
- CALR基因在MDS患者中的表达及其对细胞生长和凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 该文研究了钙网蛋白(Calreticulin,CALR)基因在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中的表达,并构建了CALR-RNAi慢病毒载体,观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞生长和凋亡的影响。反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测34例低危、高危MDS患者、8例非MDS患者骨髓标本及细胞株中CALR的表达;设计3条含靶向沉默CALR基因的Oligo DNA,与酶切后的GV248质粒连接形成表达载体,经筛选、鉴定后得到3种GV-CALR-RNAi重组慢病毒载体。分别转染SKM-1细胞,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR及Western blot验证干扰效果,筛选出最佳靶向序列。然后,使用含最佳靶向序列的慢病毒载体转染SKM-1,CCK-8法和Annexin V/7-AAD双染法分别观察其对细胞生长和凋亡的影响,Western blot检测caspase-3的表达。34例低危、高危MDS患者中有31例检测到CALR基因表达较正常组明显降低(P<0.01)。成功构建了3种CALR-RNAi慢病毒载体,流式细胞术检测平均转染效率在70%以上。RT-PCR及Western blot检测结果显示,CALR-RNAi(3)慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点。结果发现,CALR-RNAi(3)转染SKM-1后可促进细胞生长、抑制细胞凋亡(P<0.05),同时CALR-RNAi(3)组的G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。Western blot证实凋亡因子cleaved-caspase-3的水平降低。CALR基因在MDS中起到抑癌基因的作用,构建的GV-CALR-RNAi(3)重组慢病毒载体有利于进一步研究CALR基因在MDS中的作用机制。
- 张涛匡兴怡魏春梅张端众王利
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰细胞生长骨髓增生异常综合征
