陕西省科技攻关计划(2005k15-G15)
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 相关作者：王斌历强贺西京朱振中臧全金更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院广州医学院第二附属医院青岛市市立医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家教育部博士点基金吴阶平医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚嗅粘膜嗅鞘细胞的分离、培养和纯化被引量：1
- 2008年
- 目的采用经我们改良的差速贴壁法结合神经营养因子3(NT3)和低浓度血清的培养方法对人胚嗅粘膜嗅鞘细胞进行分离和原代纯化培养,探讨建立嗅粘膜嗅鞘细胞体外培养的方法。方法对差速贴壁后的人胚嗅粘膜嗅鞘细胞交替应用含10%胎牛血清和含2.5%胎牛血清、NT3的DMEM-F12培养基进行原代培养。观察嗅粘膜嗅鞘细胞的形态学变化,采用p75NTR和GFAP免疫细胞化学染色进行鉴定和纯度检测。结果人胚嗅粘膜嗅鞘细胞形态多呈双极、三极,伴有细长的突起。p75NTR和GFAP染色均呈阳性反应,体外培养9d时纯度可达83%。结论差速贴壁法结合低浓度血清和NT3应用可以分离培养出人胚嗅粘膜嗅鞘细胞。
- 历强贺西京石建峰王斌朱振中臧全金樊沛
- 关键词：嗅鞘细胞鼻粘膜细胞培养纯化
- 三种纯化方法体外培养人胚嗅球嗅鞘细胞的比较被引量：4
- 2008年
- 目的：嗅鞘细胞纯化培养方法有免疫亲和吸附法、免疫磁珠法、化学药物法、差速贴壁法、无血清饥饿法等,但均存在缺陷。比较3种纯化方法原代培养人胚嗅球嗅鞘细胞的纯度,寻求简单实用的高纯度人胚嗅球嗅鞘细胞的体外培养方法。方法：实验于2007-08/12在西安交通大学口腔医院医学实验中心进行。选用流产胚胎标本24份,胎龄4-6月,由西安交通大学第二医院和陕西省妇幼保健院产科提供。实验经产妇及家属同意,并经医院伦理委员会的批准。实验方法：取胚胎嗅球分离培养嗅鞘细胞,制成单细胞悬液。将单细胞悬液加入未包被的培养瓶中培养,然后再次将细胞悬液加入未包被的培养瓶中,具体差速时间根据观察决定。最后将差速贴壁后含未贴壁细胞的细胞悬液加入多聚赖氨酸包被的培养瓶或培养板中,用3种方法纯化培养：阿糖胞苷法、无血清饥饿法和间断神经营养因子3法纯化培养人胚嗅球嗅鞘细胞。比较3种纯化方法下嗅鞘细胞生长变化及纯度。结果：①培养早期嗅鞘细胞呈圆形,随着培养过程进行细胞逐渐伸出细长突起呈双极、三极和多极细胞,胞核位于细胞中央。成熟的嗅鞘细胞大多呈双极、三极细胞与许旺细胞相似,细胞折光性好,胞核呈圆形位于细胞中央,＂煎蛋样＂细胞少见。②差速贴壁法培养3-6d时纯度为88%,以后成纤维细胞增殖嗅鞘细胞纯度迅速下降。阿糖胞苷法阿糖胞苷作用后细胞大量死亡,免疫染色几乎未见阳性反应细胞存在。无血清饥饿法培养3-6d时嗅鞘细胞纯度为90%,但细胞状态差。间断神经营养因子3法培养3-9d时嗅鞘细胞纯度为95%,且细胞状态良好。结论：差速贴壁结合间断间断神经营养因子3法比结合阿糖胞苷法、无血清饥饿法获得的嗅鞘细胞纯度高,且细胞状态良好。
- 王斌贺西京历强李浩鹏王栋
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养纯化
- 不同纯化方法体外培养人胚嗅球嗅鞘细胞被引量：7
- 2008年
- 目的采用不同纯化方法原代培养人胚嗅球嗅鞘细胞(OECs),探讨简单实用可获得高纯度人胚嗅球OECs的体外培养方法。方法以差速贴壁法为基础结合阿糖胞苷法、无血清饥饿法和间断神经营养因子3(NT3)法纯化培养人胚嗅球OECs。观察不同纯化方法下OECs生长变化,采用免疫细胞化学染色进行纯度鉴定。结果体外培养的人胚嗅球OECs为双极、三极细胞,细胞突起细长,并可形成细胞突起网络。差速贴壁法培养3～6 d时纯度约为88%,以后成纤维细胞增殖,OECs纯度迅速下降。无血清饥饿法培养3～6 d时OECs纯度约为90%,但细胞状态差。间断NT3法培养3～9 d时OECs纯度约为95%,且细胞状态良好。经统计学处理,第6 d后差速贴壁+间断应用NT3法优于其他方法,细胞纯度的差异有统计学意义(P<0.05)。结论差速贴壁结合间断NT3法可获得高纯度状态良好的OECs,是一种简单实用的OECs纯化培养方法。
- 王斌贺西京历强李浩鹏王栋
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养纯化神经营养因子3
- 差速贴壁结合神经营养因子3体外纯化培养人胚嗅鞘细胞被引量：12
- 2007年
- 目的:采用差速贴壁结合神经营养因子3的方法对人胚嗅球嗅鞘细胞进行原代纯化培养,探讨简单实用的嗅鞘细胞体外培养方法。方法:将差速贴壁后人胚嗅鞘细胞间隔48h用含100mL/L胎牛血清和含NT3的DF12培养液交替进行体外培养。观察嗅鞘细胞的生长变化,采用形态学和P75免疫细胞化学染色进行细胞及纯度鉴定。结果:体外培养的人胚嗅鞘细胞P75染色呈阳性反应,呈双极、三极细胞,细胞突起细长,并可形成细胞突起网络。在体外培养9d时可以获得95%的嗅鞘细胞,12d时为83%,且细胞状态良好。结论:差速贴壁法结合间断NT3应用是一种简单实用的嗅鞘细胞纯化培养方法。
- 历强贺西京饶国洲董恩霞樊沛王斌朱振中臧全金
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养纯化
