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突变k-ras基因修饰的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用被引量：7: 2005年; 目的探讨腺病毒介导的突变kras基因修饰的树突状细胞疫苗在体内的抗肿瘤作用。方法将突变kras基因修饰的DC经腹腔注射免疫小鼠(5×105/只),1次/周,共2次,随后将肿瘤细胞接种于皮下,观察DC能否诱发机体的免疫保护。结果突变kras基因修饰的DC疫苗组Lewis肺癌(3LL)移植瘤生长明显延缓,肿瘤体积显著低于空载体组、DC组和对照组(P<0.05),而抑瘤率显著高于空载体组、DC组和对照组(P<0.05)。突变kras基因修饰的DC疫苗组Lewis肺癌(3LL)移植瘤肺转移率(2/10,20%)显著低于空载体组(6/10,60%)、DC组(6/10,60%)和对照组(8/10,80%,P<0.05);肺部转移灶数目亦显著少于空载体组、DC组和对照组(P<0.05)。结论突变kras基因修饰的DC疫苗能有效诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应,抑制Lewis肺癌生长和远处转移。; 赵峰周清华陆燕蓉张洁王建军; 关键词：K-RAS基因基因修饰树突状细胞疫苗接种抗肿瘤作用

携带突变k-ras基因的重组腺病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫被引量：1: 2004年; 赵峰周清华陆燕蓉张洁王建军; 关键词：突变K-RAS基因病毒转染树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫

突变k-ras基因重组腺病毒的构建被引量：7: 2002年; 目的　利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法　用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV中 ,形成转移质粒pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val) ,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因重组质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacⅠ酶切后用脂质体转染 2 93细胞 ,包装成重组体腺病毒Ad k ras1 2 (Val)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用穿梭质粒pAdTrack CMV中带有GFP报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果　利用CaCl2 法由pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val)和pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,可获得 2 5%左右的阳性重组体细菌克隆。PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因 ,滴度为 1 .2× 1 0 1 2 pfu/ml。结论　细菌内同源重组法构建腺病毒相比于传统的细胞内同源重组法 ,具有成功率高、方法简便、快捷、实验周期短的优点。; 赵峰周清华覃扬孙芝琳孙泽芳; 关键词：腺病毒同源重组肿瘤免疫治疗

突变K-ras基因修饰的肺癌树突状细胞疫苗的体内实验研究被引量：7: 2001年; 周清华赵峰陆燕蓉张洁覃扬孙芝琳秦建军王允刘伦旭宁其志李潞朱文车国卫; 关键词：K-RAS基因肺癌免疫治疗树突状细胞

快速构建腺病毒载体的新方法被引量：2: 2001年; 目前腺病毒载体已成为重要的基因治疗载体 ,随着分子生物学技术的迅速发展 ,构建重组腺病毒的方法有了很大改进 ,本文主要介绍 3种快速构建腺病毒载体的新方法 :一是细菌内同源重组法构建重组腺病毒 ;二是细胞外连接法构建重组腺病毒 ;三是在黏粒中构建重组腺病毒。 3种构建腺病毒载体的新方法相比于传统方法 ,具有简便、快速 ,实验周期短的优点。; 赵峰; 关键词：腺病毒腺病毒载体基因治疗肿瘤

突变Ki-ras基因修饰的肺癌DC疫苗的体外抗癌活性被引量：6: 2004年; 目的　探讨以Ki ras基因 12位密码子点突变为靶点 ,构建DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗及其抗肺癌免疫治疗的可能性。方法　应用重组腺病毒的方法将人Ki ras基因 12位密码子点突变 (由甘氨酸转变为缬氨酸 )的cDNA导入DC ,构建DC Ad Ki ras(V 12 )肺癌疫苗 ,以流式细胞术、PCR、MLR和CTL等方法检测其免疫活性。结果　 ( 1)DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗不仅能表达人Ki ras(V12 )基因 ,且能明显刺激T细胞增殖及提高CTL的杀伤作用。 ( 2 )突变Ki ras基因修饰的DC免疫小鼠后 ,可产生针对表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的特异性杀伤作用 ,但对B16黑色素瘤细胞则无明显杀伤作用。结论　以人突变Ki ras基因修饰的肺癌DC疫苗可在体外特异性诱导抗可表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的活性。; 喻璟瑞陆燕蓉朱文王艳萍陈小禾易成罗德云Michael T.Lotze周清华; 关键词：KI-RAS基因基因修饰肺癌抗癌活性

TGFβ信号通路与肿瘤被引量：2: 2003年; TGFβ影响细胞的增殖和分化 ,在肿瘤发生与进展、细胞外基质形成和免疫调节等过程中发挥重要作用。TGFβ通过胞膜上的受体和胞内 Sm ads家族向核内传递信号 ,调控靶基因。肿瘤中的 TGFβ信号通路异常有其多样性和复杂性。近年来 ,TGFβ信号通路的研究取得了突破性进展 ,本文综述了恶性肿瘤中的 TGFβ信号通路的异常。; 秦建军周清华; 关键词：TGFΒ 信号通路肿瘤细胞增殖分化

Smad3D和Smad7重组腺病毒载体的快速构建被引量：4: 2003年; 目的　简化重组腺病毒载体的构造方法 ,构建含Smad3DcDNA或Smad7cDNA的重组腺病毒载体 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法　以AdEasySystem为基础 ,应用序贯化学转化方法 ,在大肠杆菌E .coliBJ5 183体内将携带目的基因的穿梭质粒和骨架质粒重组。结果　成功构建了重组腺病毒载体pAd Smad3D和 pAd Smad7及空腺病毒载体 ,并经酶切鉴定证实。结论　用序贯化学转化方法 ,可以快速高效地在大肠杆菌内构建重组腺病毒载体。; 秦建军周清华覃扬孙芝琳赵峰孙泽芳王艳萍易成朱文; 关键词：SMAD7 腺病毒载体基因治疗 AD

人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性被引量：1: 2005年; 目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化。结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL。结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12。; 李潞喻璟瑞周清华陆燕蓉王艳萍陈小禾朱文; 关键词：肺癌细胞株生物学特性

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