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人睾丸特异性新基因hTSC29合成肽单克隆抗体制备与鉴定被引量：1: 2015年; 目的:制备和初步鉴定人睾丸特异性新基因h TSC29(Gen Bank登录号:BC032957)合成肽的单克隆抗体(m Ab)。方法:利用生物信息学方法对h TSC29的蛋白质序列进行分析和预测,根据免疫原性、表露性、亲疏水性及柔韧性4个参数,合成一段由18个氨基酸组成的多肽,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合后,通过有限稀释法筛选阳性克隆,采用ELISA法、Western blot、免疫组化和免疫荧光法鉴定h TSC29 m Ab的特异性。结果:获得了1株稳定分泌h TSC29 m Ab的杂交瘤细胞株,分泌的抗体属Ig G2b(κ)亚型,杂交瘤细胞培养上清效价达到1∶104;Western blot鉴定表明,制备h TSC29 m Ab可特异性地识别人睾丸总蛋白中Mr约为60 000处的蛋白;免疫组织化学和免疫荧光结果显示h TSC29蛋白主要定位在正常人睾丸组织中的精母细胞和精子细胞。结论:成功建立了1株稳定分泌抗h TSC29 m Ab的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体效价高、特异性强,为进一步研究h TSC29的功能提供了特异的检测工具。; 颜秋霞陈彩蓉李介华周秀琴冼英杰陈润强蔡志明唐爱发; 关键词：合成肽单克隆抗体

精浆NAG和血清FSH联合检测在梗阻性无精子症诊治中的应用被引量：1: 2014年; 目的探讨精浆中性α糖苷酶(NAG)和血清促卵泡生成素(FSH)联合检测在梗阻性无精子症诊断中的意义。方法分析24例男性无精子症患者(14例为梗阻性无精子症,10例为非梗阻性无精子症)精浆NAG和FSH水平,与16例健康已生育男性(正常对照组)的检测结果进行相关性分析,同时结合睾丸体积和详细的病史资料判断无精子症病因及分型。结果无精子症患者(包括梗阻性和非梗阻性无精子症组)与正常对照组年龄差异无统计学意义(P>0.05),非梗阻性无精子症组睾丸体积明显比梗阻性无精子症组和正常对照组小(P<0.01)。无精子症患者NAG含量均明显低于正常对照组(P<0.01),FSH水平均明显高于正常对照组(P<0.01);梗阻性无精子症组NAG和血清FSH水平明显低于非梗阻性无精子症组(P<0.01)。结论精浆NAG和血清FSH联合检测具有经济、快速、安全、无创等优点,对无精子症的诊断和临床指导治疗具有重要意义。; 颜秋霞周秀琴陈润强冼英杰王秋香邱佩嫦李艳红陈彩蓉; 关键词：促卵泡生成素梗阻性无精子症

清远地区男性不育症患者精液质量与年龄的关系被引量：6: 2014年; 目的：探讨清远地区男性不育症患者精液质量与年龄的关系。方法选取该院生殖中心男科门诊就诊的727例男性不育症患者为研究对象，依据年龄分为5组：≤25岁、＞25～30岁、＞30～35岁、＞35～40岁、＞40岁。采用计算机辅助精液分析（CASA）技术以及 Diff-Quick 快速染色法进行精液质量分析。结果＞30～40岁年龄段男性精液浓度较高，各年龄组间精液浓度变化没有统计学差异（P ＞0．05）。随着年龄的增长，前向运动（PR）精子比例、精子总活力以及精子存活率呈相对下降趋势，但各组间无明显统计学差异（P ＞0．05）。＞25～30岁组各项精液参数指标均达到 WHO 标准的比例最高，占该组人数的38．19％，＞40岁组比例最低，占该组人数的27．42％。结论随着年龄的增长，男性的精液质量呈下降趋势，但是不育症可发生在生育期男性的任何阶段。; 颜秋霞颜秋霞周秀琴冼英杰邱佩嫦周秀琴李艳红陈润强陈彩蓉; 关键词：男性不育症精液质量年龄

人睾丸特异性新基因hT279单克隆抗体制备及其应用: 2014年; 目的构建人睾丸特异性新基因hT279(GenBank登录号BC016750)的原核表达载体,纯化融合蛋白并以其为抗原免疫Balb/c小鼠制备抗人睾丸特异性hT279蛋白单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法用PCR方法得到睾丸特异性新基因hT279并克隆至pET32a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21诱导融合蛋白表达;获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗hT279 mAb,并通过间接ELISA、Western blot和免疫组织化学法对mAb进行特性鉴定。结果实现了hT279的原核表达,获得了1株稳定分泌抗hT279 mAb的杂交瘤细胞株4B2,抗体亚型为IgG2b(κ),效价达到1×104。Western blot鉴定表明,该mAb在人正常睾丸蛋白中相对分子质量约为22 000处检测到特异条带。免疫组织化学显示hT279蛋白主要在正常人睾丸的精母细胞及圆形精子细胞中表达,而在男性不育患者睾丸组织中表达消失。结论成功制备出1株抗hT279的mAb 4B2,为进一步研究hT279在人类精子发生中的功能和男性不育症的诊断提供了特异的检测工具。; 颜秋霞李介华陈彩蓉冼英杰周秀琴陈润强蔡志明唐爱发; 关键词：原核表达单克隆抗体男性不育症

ACRV1在正常男性和弱精子症患者精液精子中的表达差异被引量：5: 2015年; 目的研究精子顶体小泡蛋白-1（ACRVl）在正常人和弱精子症患者精液精子中的表达差异，探讨ACRVl在弱精子症发生机制中的作用。方法采用计算机辅助精液分析（CASA）技术对精液进行常规分析，经非连续密度梯度离心分离纯化正常男性和弱精子症患者精液精子，以排除生精细胞和白细胞的污染。采用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）和免疫印迹（Western Blot）方法，从mRNA和蛋白水平检测ACRVl的表达及其差异。结果Real．time PCR结果表明，ACRVl mRNA在弱精子症患者精子中的表达量明显低于其在正常对照组精子中的表达量，下降了5．9倍。Westem Blot发现ACRVl蛋白在弱精子症组较正常组下降，该结果与Real-time PCR结果相一致。结论ACRVl基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切关系，提示ACRVl基因及蛋白可能是导致弱精子症发生的原因之一。; 颜秋霞漆正宇赵晓英郭晓燕陈彩蓉蔡志明唐爱发; 关键词：聚合酶链反应印迹法蛋白质弱精子症

精子顶体相关蛋白Dkkll在小鼠睾丸组织中的表达研究: 2013年; 目的：研究顶体相关蛋白Dkkl1在小鼠睾丸组织发育过程中的表达特征。方法将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的Dkkl1基因。采用RT-PCR方法检测Dkkl1基因在小鼠不同日龄和不同组织中的表达情况，采用免疫组化方法检测Dkkl1蛋白在小鼠睾丸组织中的定位。结果对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后，筛选得到1个差异表达杂交点，通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Dkkl1基因。RT-PCR结果表明Dkkl1 mRNA呈小鼠睾丸特异性表达，在出生31d小鼠睾丸开始高表达，在成年前达到高峰。Dkkl1蛋白主要定位在睾丸精母细胞和圆形精子细胞。结论 Dkkl1基因存在发育的表达调控，为小鼠年龄依赖性表达基因，其表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性，且具有睾丸特异性表达的特征，因此我们推测该基因可能在精子发生中具有关键作用。; 颜秋霞郭晓燕陈彩蓉李介华蔡志明唐爱发; 关键词：基因芯片精子发生

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深圳市基础研究计划项目(JC201005260216A)