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O型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA诊断方法的初步建立: 2016年; 利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL^(-1),待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断ELISA试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于O型FMDV血清抗体水平的检测。; 何奇松陈磊颜健华冯淑萍黄胜斌胡巧云梁晟易春华许瑞胜韦达有兰宗宝熊毅; 关键词：O型口蹄疫病毒竞争ELISA

两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比被引量：5: 2016年; 为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。; 吕晓丽姚晓韵何奇松冯淑萍马军覃雨阳李雪梅熊毅颜健华; 关键词：O型口蹄疫抗体

O型口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1的克隆与原核表达被引量：14: 2008年; [目的]为进一步研究口蹄疫病毒的诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上已公布的O型口蹄疫病毒核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至表达载体pGEX-6p-1中,经测序鉴定目的基因正确地整合至表达质粒中,用IPTG诱导重组基因表达。[结果]通过PCR扩增获得682 bp的目的片段,所克隆的VP1基因在原核细胞中成功表达,表达产物为融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量为51 kD,Western Blot结果表明融合蛋白具有免疫原性。[结论]获得了猪O型口蹄疫VP1融合蛋白,可作为包被抗原用于口蹄疫诊断试剂盒的研制。; 付薇陈磊熊毅潘琼王常伟陈进喜胡晓静刘棋; 关键词：口蹄疫病毒 VP1 克隆

猪FMDV的VP1结构蛋白特异性抗体间接ELISA的建立: 2008年; 以纯化的FMDV-VP1融合蛋白为抗原,建立了猪口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白间接ELISA检测方法。抗原包被浓度为10μg·mL-1时,血清最佳稀释度为1∶40,通过测定30份FMDV阴性血清,确定了该方法的阳性判定标准。结果表明,该方法特异性强,重复性好;对216份送检猪血清用ELISA检测,阳性检出率为31.5%,阴性检出率为68.5%,与HA符合率为96.2%,表明建立的VP1结构蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。; 陈磊付薇胡晓静熊毅潘琼刘棋; 关键词：间接ELISA

A型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2: 2016年; 为了深入了解VP1蛋白的结构和功能,并建立A型口蹄疫(FMD)血清抗体检测方法,试验采用纯化的重组蛋白p ET-32a-VP1免疫Balb/c小鼠,以纯化的重组蛋白p GEX-6p-1-VP1作为检测抗原包被酶标板检测抗体效价。将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,其杂交瘤细胞用间接ELISA法进行筛选,获得4株能稳定分泌抗口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性杂交瘤细胞株,分别命名为1D10、3D12、4E12和5G7。结果表明:这4株单克隆抗体均为Ig M亚型和κ轻链,单克隆抗体间可能识别同一个表位,或表位重叠性大。4株单克隆抗体均能被A型FMDV阳性血清所阻断,具有特异性,且以单克隆抗体4E12产生的抗体效价最高、稳定性强、亲和力最大,并能与重组蛋白FMDV-A-VP1特异性结合。说明单克隆抗体4E12可作为单克隆抗体竞争ELISA法的竞争抗体用于检测A型FMDV血清抗体。; 颜健华兰宗宝何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌韦达有易春华许瑞胜梁晟熊毅; 关键词：A型口蹄疫病毒 VP1蛋白单克隆抗体

A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立被引量：3: 2015年; 用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。; 颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌胡巧云易春华许瑞胜梁晟熊毅; 关键词：A型口蹄疫病毒 VP1蛋白竞争ELISA

O型口蹄疫病毒VP1基因主要抗原位点基因串连表达载体的构建及序列测定: 2016年; 以构建好的O型FMDV VP1基因的重组质粒PMD18-T—VP1为模板，通过PCR扩增出VP1基因主要抗原位点VP1（61～180bp）的核苷酸及VP1（421～639bp）的核苷酸，采用重组PCR方法将扩增所得的2个基因片段用linker连接，结果构建出1个含384bp的重组质粒，将该重组质粒定向插入原核表达载体pGEX-6P-1，成功构建了pGEX-6P-1-VP1（384bp）串联表达载体。该串联表达载体的构建为进一步研制FMDV的诊断抗原及多肽疫苗奠定了基础。; 何奇松颜健华冯淑萍易春华韦达有许瑞胜梁晟熊毅; 关键词：口蹄疫病毒 VP1基因

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