国家自然科学基金(20772040)
- 作品数：11 被引量：25H指数：3
- 相关作者：祁超马艳玲陆胜利邓海刘艳丽更多>>
- 相关机构：华中师范大学安庆医药高等专科学校更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola大片段DNA基因组文库的构建被引量：6
- 2010年
- 目的:构建稀有海洋放线菌S.arenicola基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌S.arenicola为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5′-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌S.arenicola的基因组文库,效价达6.5×104CFU/mL,得到3000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的657个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估S.arenicola所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。
- 马艳玲邓海刘中来邓灵福刘艳丽祁超
- 关键词：基因组文库噬菌体
- 海洋放线菌Salinispora areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活测定被引量：2
- 2014年
- [目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的酶动力学参数为:Km=(0.040 33±0.003 67)mmol/L,Vmax=(2.135 05±0.029 43)μmol/(min·L),kcat=(14.233 6±0.196 2)min;Phe为底物时:Km=(0.027 65±0.001 51)mmol/L,Vmax=(1.558 06±0.009 7)μmol/(min·L),kcat=(10.387 1±0.064 6)min。[结论]丰富洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS腺苷化结构域的底物特异性和密码子领域的研究,为组合生物学和体外酶系合成NRPs提供依据。
- 陆胜利祁超
- 关键词：海洋放线菌底物特异性
- 蛋白质-小分子相互作用的研究方法被引量：4
- 2014年
- 蛋白质是生物体的重要组成部分和生命活动的物质基础,几乎参与了所有的生命活动,如生物体内的代谢、催化作用等过程大都涉及蛋白质与小分子的相互作用。从分子水平上研究蛋白质与小分子物质相互作用,既有利于研究小分子物质的作用机理,也利于得到稳定性质的蛋白质及其复合物。在此简述紫外-可见吸收光谱法、荧光光谱法、等温滴定量热法、表面等离子共振和生物分子相互作用分析技术、石英晶体微平衡技术等方法。
- 赵志娟
- 关键词：蛋白质小分子表面等离子共振
- 胸膜肺炎放线杆菌Δlip40回复突变株的构建及鉴定
- 2015年
- 胸膜肺炎放线杆菌(APP)可引起猪胸膜肺炎,在一定程度上阻碍了养猪业的发展.目前,APP基因组中已得到有效鉴定的基因不足10%.为建立有效的APP功能基因研究体系,本文以前期构建的血清1型APP SLW01株外膜脂蛋白基因缺失突变株Δlip40为亲本,通过电转化法将携带有完整lip40基因的穿梭质粒pJFF-lip40导入Δlip40中,通过氯霉素抗性筛选获得回复突变株CΔlip40.对CΔlip40的生物学特性进行了初步分析发现,穿梭质粒可在APP中稳定遗传,并且APP生长能力未受穿梭质粒转入的影响.此外,SLW01和Δlip40对氯霉素高度敏感,但回复突变株CΔlip40较前两种菌株对氯霉素抗性明显增强,表明穿梭质粒pJFF224-XN抗性基因可在APP菌株中稳定表达.回复突变株CΔlip40的成功构建为分析脂蛋白Lip40致病机制提供了有效对照材料,本研究中建立的互补菌株构建系统以及APP抗性评价方法将有助于今后深入研究APP生物学特性及基因功能.
- 胡雪鹤刘彩红阎浩祁超
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola非核糖体肽合成酶和卤代酶生物合成基因簇核心区的克隆及序列分析被引量：9
- 2011年
- 克隆稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的非核糖体肽合成酶(NRPS)和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段。根据已发表的放线菌NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区的核苷酸序列保守区设计两对简并性引物,采用PCR的方法扩增NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析。获得两段大小分别为662bp和557bp的基因片段,编码220个和185个氨基酸。这两段序列与海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因核苷酸序列的同源性分别为99%和98%。成功地获得了稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,该基因片段的获取将为分离全长基因簇以及研究该基因簇在生物合成中的功能奠定基础。
- 马艳玲邓海魏菁菁郭秀红刘中来邓灵福刘艳丽郭建军姚汉超熊国梅祁超
- 关键词：系统进化
- 胞外基质材料木糖葡聚糖对HepG2细胞的黏附及相关功能的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:研究胞外基质(ECM)材料木糖葡聚糖(XG)对人肝癌细胞系HepG2细胞在细胞培养板上的贴壁性及对微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率、NH_4^+清除速率、细胞增殖速率和间隙连接蛋白(Cx32)、细胞黏附分子(E-cadherin)表达的影响。方法:将HepG2细胞接种于不同浓度XG(0,0.5,1,4,6mg/ml)包被的细胞培养板上,孵育4h后收集贴壁细胞,BCA法测贴壁细胞总蛋白量进而测定细胞贴壁率;利用自制装置制备包被HepG细胞的海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸(APA)微囊并在培养微囊第6,10,14天以Human Serum Albumin Elisa Kit、Ammonia Assay Kit分别测定培养液中人血清白蛋白(HSA)和处理溶液中NH_4^+的浓度,检测微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率和NH_4^+清除速率;微囊培养1,2,3d后裂解微囊收集HepG2细胞并以RT-PCR方法检测细胞内Cx32和E-cadherin的表达情况。结果:HepG2细胞在XG包被的细胞培养板上的贴壁率随XG浓度增大呈递增趋势,同时微囊内细胞数随XG浓度增大、培养时间延长而增加,说明XG可促进细胞/基质间相互作用,促进细胞生长增殖;微囊化HepG2细胞的清蛋白合成速率与NH_4^+清除速率在XG浓度为1 mg/ml时达到最大且较空白组高,说明XG对细胞合成及代谢功能有一定促进作用;加入XG的微囊内细胞表达Cx32、E-cadherin的时间较空白组提前,说明XG的存在促进了HepG2细胞肝脏特有功能的维持和体现。结论:XG对微囊化HepG2细胞的增殖及肝脏特有功能的体现都具有一定促进作用。
- 陆胜利祁超
- 关键词：肝组织工程海藻酸微囊化
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola CNH643 DSM 44819的sare4854基因异源表达对链霉菌抗生素产量的影响
- 2014年
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola CNH643DSM 44819的sare4854基因编码1个典型的SARP,但其确切功能没有得到认证.为了研究sare4854基因的功能,我们在链霉菌Streptomyces sp.AM-7161中异源表达了sare4854基因.实验结果表明,对比野生菌,转化子中抗生素的产量被明显抑制.生物信息学分析表明,sare4854除了与编码SARPs蛋白家族中的其他1样在N-端编码1个SARP样结构域外,在其C-端还编码有1个核苷三磷酸水解酶(nucleoside triphosphate hydrolases,NTPase)结构域.这可能是sare4854基因对Streptomyces sp.AM-7161抗生素产量负调控的主要作用机制.
- 舒晓余金龙吴绍文张巍马艳玲朱珉喆夏思思夏诗超张浩李爱英祁超
- 关键词：放线菌
- 海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建被引量：2
- 2010年
- 目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。
- 马艳玲邓海刘中来邓灵福刘艳丽郭建军祁超
- 关键词：基因组文库噬菌体
- 海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域研究进展被引量：2
- 2015年
- 概述了海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域的研究进展.
- 陆胜利祁超
- 关键词：海洋放线菌代谢产物
- 胸膜肺炎放线杆菌脂蛋白疫苗的开发前景
- 2015年
- 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种高度接触传染性猪呼吸道疾病。由于APP的血清型较多,目前大部分疫苗缺乏交叉保护使该病难以得到有效的预防和控制。脂蛋白(Lipoprotein,LPP)作为细菌的重要毒力因子在导致宿主发病方面起着非常重要的作用,研究发现脂蛋白在APP各种血清型中是高度保守的。本文主要论述当前APP疫苗开发中存在的问题以及脂蛋白有望成为治疗猪胸膜肺炎的候选疫苗的前景。
- 刘彩红胡雪鹤
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌疫苗脂蛋白
