广东省自然科学基金(980089)
- 作品数：21 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：中山医科大学中山大学广州医学院更多>>
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- 恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCC1/HN株基因组DNA中PCR扩增Pf332基因片段 ,P332 -RO、P332 -R1和P332 -R2 ;用PCR扩增法合成鼠IgG轻链隹号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2和非分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf332基因片段 ,P332 -R0、P332 -R1、P332 -R1,大小分别为 489、42 9和 393bp。用PCR扩增法合成 6 3bp的Balb/c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含Pf332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论 成功构建分别包含恶性疟原虫Pf332基因片段—P332 -R0、P332 -R1和P332 -R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。
- 单志新余新炳卞国武马长玲陈守义周永安
- 关键词：恶性疟原虫基因片段分泌型非分泌型真核表达重组质粒
- 恶性疟原虫海南株STARP基因真核表达重组质粒的构建及基因结构分析被引量：1
- 2001年
- 目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株STARP基因真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;分析STARP基因结构 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株STARP基因序列的差异。方法 根据STARP基因已知序列设计合成两对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增两个部分序列重叠的STARP基因片段 ;将两基因片段分别双酶切后定向克隆入真核表达载体 pcDNA3 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。酶切 ,PCR扩增鉴定筛选重组质粒阳性克隆 ;用双脱氧链末端终止法测序 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果 分别PCR扩增获得 10 78bp ,10 92bp的两个STARP基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组质粒 ;恶性疟原虫FCC1/HN株与T9/ 96株STARP基因核苷酸序列同源性为 92 .2 % ;推测编码氨基酸序列同源性为 90 .9% ;在STARP蛋白中部重复区推测有多个明显的抗原表位区段。结论 从FCC1/HN株恶性疟原虫基因组DNA中获取STARP基因 ,并成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;FCC1/HN株与其它分离株STARP基因有高度的同源性。
- 单志新余新炳马长玲李学荣吴忠道方建民
- 关键词：恶性疟原虫重组质粒基因测序
- 恶性疟原虫FCC1/HN株exp-1基因的克隆及序列分析
- 2001年
- 单志新余新炳马长玲陆家海
- 关键词：疟原虫疟疾疫苗
- 恶性疟原虫FCC1/HN株RESA基因克隆及序列分析
- 2000年
- [目的 ]测定恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)环状体感染红细胞表面抗原 (RESA)基因 3′端部分基因序列 ,比较FCC1/HN与国外分离株RESA序列的差异。 [方法 ]应用PCR技术扩增RESA基因 3′端部分序列 ,将其克隆入pMD18 T载体。阳性重组克隆经酶切及PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定 ,并用分子生物学软件进行基因结构和同源性分析。 [结果 ]用PCR成功扩增出约 846bp的RESA基因特定片段 ,阳性克隆经酶切及PCR扩增确定。基因序列分析表明 ,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外FC2 7,PaloAlto ,NF7株RESA基因序列有不同程度的差异。 [结论 ]确定了恶性疟原虫FCC1/HN株RESA基因 3′端序列。同源性分析表明 。
- 李学荣余新炳单志新马长玲
- 关键词：恶性疟原虫克隆
- 3种恶性疟原虫红内期抗原基因的测序和序列分析
- 2002年
- 目的 测定我国恶性疟原虫海南株 (FCC1/ HN)谷氨酸富集蛋白 (GARP)、丝氨酸重复抗原 (SERA)和裂殖子表面蛋白 1(MSA1)基因序列 ,并进行序列分析。 方法 采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 GARP、SERA和 MSA1基因片段 ,分别插入到测序载体上进行测序。应用 DNAstar软件辅助分析 3种抗原基因的结构及 3种抗原在不同恶性疟原虫株间的分化情况。 结果 恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP基因全长 2 2 6 3bp,编码6 82个氨基酸残基 ,谷氨酸占 2 3.6 1% ,包含 5个典型的氨基酸重复序列 ;SERA基因全长 344 8bp,编码 995个氨基酸残基 ,丝氨酸含量为 10 .6 5 % ,包含 1个连续 32个丝氨酸 (S)残基的序列 ;MSA1基因全长 5 0 85 bp,编码 16 94个氨基酸残基 ,MSA1的氨基酸序列符合 MAD2 0型特征。恶性疟原虫 FCC1/ HN株与 3D7、FC2 7株 GARP的序列差异主要集中于 C-末端 ;FCC1/ HN株与 FCR3、3D7、FCBR、Hondulas- 1株 SERA的序列差异主要集中于 N-端。FCC1/ HN株与MAD2 0、3D7、HN1、HN2、FC2 7、RO- 71、RO- 33、CAMP和 Palo- alto株 MSA1的同源性高 ,K1和 WEL L COME株 MSA1的同源性高 ,各分离株 MSA1的序列差异主要处于第 2至 16分区。 结论 了解了恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP、SERA和 MSA1的?
- 单志新余新炳徐劲吴忠道马长玲李学荣
- 关键词：疟原虫恶性裂殖子表面蛋白1
- 恶性疟原虫肝期抗原1基因3′端的克隆及序列分析
- 2001年
- 【目的】克隆并测定恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)肝期抗原 1基因 (LSA 1) 3′端序列 ,比较FCC1/HN株与国外分离株LSA 13′端序列的差异。【方法】应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增LSA 13′端序列 ,用T A克隆法将其克隆入pMD18 T载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR扩增鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用DNASTAR软件进行不同分离株LSA 13′端序列的同源性分析。【结果】PCR扩增得到特异的FCC1/HNLSA 13′端序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的 pT LSA 1重组质粒。测序表明 ,所克隆的LSA 13′端大小为 795bp ,编码 2 6 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的NF5 4、T9/ 96、KEN、PNG及BRA株LSA 13′端编码的氨基酸序列只在 3个位点存在不同。【结论】克隆了恶性疟原虫FCC1/HNLSA 13′端片段。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/HNLSA 13′端序列与其它分离株有高度的同源性。
- 单志新余新炳李学荣马长玲徐劲陈守义
- 关键词：疟原虫基因扩增恶性疟原虫克隆
- 恶性疟原虫FCC1/HN株EBA-175基因克隆及序列分析
- 2001年
- 目的 将恶性疟原虫 FCC1/ HN株 175 ku的红细胞结合抗原 (EBA- 175 )基因克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其结构与功能奠定基础。 方法 利用 PCR扩增技术 ,分两个片段从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中 ,特异扩增 EBA- 175全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T- A克隆入测序载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5 α,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及 PCR扩增鉴定 ,获得含有编码 EBA- 175基因的重组质粒 p MD18- T- EBA。用Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定。 结果 FCC1/ HN株 EBA- 175基因序列与 Camp株基本一致 ,全长 430 8bp,编码 1435个氨基酸 ,含有与 Camp株相似的 C片段。利用计算机软件对其 RII区的 F2亚区以及 4肽进行抗原表位分析 ,结果显示这些区域可能含有抗原表位。 结论 EBA- 175全基因编码序列的测定 。
- 马长玲余新炳单志新李学荣吴忠道胡旭初
- 关键词：疟原虫抗原分子克隆DNA序列分析
- 恶性疟原虫HRP-Ⅲ基因的克隆及序列分析
- 2001年
- 目的 克隆并测定恶性疟原虫海南 (FCC1/ HN)株 HRP- 基因序列 ,比较 FCC1/ HN株与国外分离株 HRP- 基因序列的差异。方法 根据 HRP- 基因已知序列设计合成一对引物 ,应用 PCR技术从 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 HRP- 基因。通过定向克隆 ,构建真核表达重组质粒 pc DNA3- HRP- 。阳性克隆的重组质粒经酶切及 PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件进行不同分离株 HRP- 基因序列的同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的 FCC1/ HN株 HRP- 基因序列。酶切及 PCR鉴定获得了正确的 pc DNA3- HRP- 重组质粒。测序表明 ,恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因全长 80 2 bp,包含一个内含子 ,编码 2 2 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫 FCC1/ HN株与国外的 Itg2、FC2 7及 IMTM2 2株 HRP- 基因序列有较高的同源性。 结论 成功克隆恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/ HN株与其它分离株的 HRP- 基因序列有高度的同源性。
- 单志新余新炳马长玲方建民李学荣卞国武吴忠道
- 关键词：恶性疟原虫聚合酶链式反应分子克隆
- 恶性疟原虫子孢子表面蛋白2基因的克隆与序列分析
- 2003年
- 目的克隆恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)子孢子表面蛋白2(PfSSP2)基因,并进行序列分析。方法根据PfSSP2基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增出PfSSP2基因,并克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测序,用DNAstar软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果PCR扩增得到特异的FCC1/HN株PfSSP2基因序列,酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-PfSSP2重组质粒。测序表明,所克隆的PfSSP2基因大小为1680bp,编码559个氨基酸残基。序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的3D7、DD2、FCR3、HB3A、K1、Thai814、Thai838、Thai842、Thai947及7G8株PfSSP2的氨基酸序列在33个位点存在氨基酸替代,1处氨基酸序列增加;各株间PfSSP2的氨基酸序列同源性都在95.7%以上。结论克隆了恶性疟原虫FCC1/HN株PfSSP2基因。序列测定及同源性分析表明,恶性疟原虫不同分离株间有高度的同源性。
- 单志新余新炳徐劲马长玲李学荣卞国武吴忠道陈守义胡旭初
- 关键词：恶性疟原虫克隆
- 恶性疟原虫FCC1/HN株Pf332基因的克隆和测序
- 2001年
- 目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株红细胞膜相关巨大蛋白 (Pf3 3 2 )部分基因的真核表达载体 ;并测定Pf3 3 2基因序列 ,了解FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株Pf3 3 2基因序列的差异。 方法 根据已知Pf3 3 2基因序列设计合成一对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf3 3 2基因片段 ;将Pf3 3 2部分基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件辅助分析Pf3 3 2序列及进行同源性比较。 结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的 pcDNA3-Pf3 3 2重组质粒。测序表明 ,获得的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段大小为 12 60bp ,编码 4 2 0个氨基酸残基。恶性疟原虫FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株间Pf3 3 2基因片段编码的氨基酸残基中分别有 1个、15个位点不同。结论 从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取Pf3 3 2基因片段 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Pf3 3 2 ;FCC1/HN与 3D7株间比FCC1/HN与PaloAlto株间的Pf3 3 2基因序列的同源性高。
- 单志新余新炳马长玲卞国武陈守义
- 关键词：恶性疟原虫克隆基因测序
