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国家自然科学基金(30830041): 作品数：10 被引量：19H指数：3; 相关作者：张永学兰晓莉何勇张国鹏曹卫更多>>; 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金湖北省杰出青年人才基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

无机纳米晶体量子点光学成像应用进展被引量：3: 2014年; 光学成像是分子成像技术的重要组成部分，主要包括荧光成像、生物发光成像及扩散光学成像。无机纳米晶体量子点（QDs）因具有独特光学性质（如激发光谱宽且连续、发射光谱窄且对称、荧光强度高、抗光漂白能力强等）而成为光学成像的热点研究领域。该文综述了QDs的光学性质、在光学成像中的体内外应用、局限性及目前存在的问题。; 李崇佼兰晓莉张永学; 关键词：量子点光学成像

报告基因系统HSV1-sr39tk/FIAU监测治疗基因表达的体外研究被引量：1: 2010年; 构建HSV1-sr39tk为报告基因,以VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体Ad5-sr39tk-IRES-VEGF165(Ad5-SIV),将其以不同感染复数(MOI=0、10、25、50、75、100)感染大鼠骨髓间充质干细胞,用免疫激光共聚焦技术检测HSV1-sr39tk与VEGF165的表达。用酶联免疫吸附试验(ELISA)监测感染病毒后细胞培养上清中VEGF165蛋白分泌量;细胞摄取131I-FIAU实验监测HSV1-sr39tk报告基因的表达情况,以腺病毒包装增强型绿色荧光蛋白(Ad5-EGFP)为对照。结果显示:免疫共聚焦显微镜可观察到HSV1-sr39tk蛋白与VEGF165蛋白在细胞内成功表达;VEGF165蛋白分泌情况与MOI间呈线性正相关(P<0.05);感染Ad5-SIV后细胞对131I-FIAU摄取率增高与MOI间呈线性正相关(P<0.05)。不同时间摄取实验结果显示:30-150min间细胞摄取率迅速增高,之后增高减慢,进入平台期。MOI相关摄取结果与MOI相关ELLISA结果具有较好相关性(P<0.05)。Ad5-SIV经感染后可在大鼠骨髓间充质细胞中成功表达,并且治疗基因VEGF与报告基因HSV1-sr39tk的表达呈正相关,说明可通过报告基因HSV1-sr39tk监测治疗基因VEGF165的表达,为动物水平报告基因显像提供理论支持。; 张国鹏兰晓莉陈铨曹卫何勇张永学; 关键词：血管内皮生长因子骨髓间充质细胞报告基因基因治疗

新型核素报告基因系统hERL／核素标记雌二醇的实验研究被引量：5: 2012年; 目的在体外细胞摄取实验及在体显像基础上，评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域（hERL）／核素标记雌二醇（E2）应用的可行性，为其用于基因治疗的监测提供依据。方法以内部核糖体进入位点序列（IRES）方式构建携带hERL和治疗VEGF165的重组质粒pDC316-hERL-IRES．VEGF165（简写为EIV），将其用腺病毒包装构建重组腺病毒复合体（Ad-EIV）。采用悬浮贴壁法从sD大鼠股骨和胫骨原代提取骨髓MSCs并培养。将Ad-EIV和脂质体2000包裹重组质粒（Lipo-EIV）分别转染MSCs，利用RT-PCR和Westernblot，对hERL和VEGF165mRNA和蛋白质水平的表达分别进行检测。测定Ad．EIV组、Lipo．EIV组和未转染组MSCs对125I-E在不同时间（1、3,6、9、12和24h）的摄取率。将转染Ad-EIV的MSCs注射至大鼠左前肢、未转染MSCs注射至右前肢后1d，注射16a-^18TMF-17a-E2（^18F-FES）进行micro PET／CT活体显像。2组间均数比较采用t检验，相关性研究采用Pearson相关分析。结果Ad—EIV转染MSCs后RT—PCR检测示hERL和VEGFl65mRNA的表达随着感染滴度的增加而增加，且呈正相关（r2分别为0．953和0．966，P均〈0．05）；感染复数（MOI）=25、50、75和100时，其mRNA表达高于Lipo-EIV组。Westernblot检测蛋白质水平的表达也得到同样的结果。Ad-EIV组和Lipo-EIV组MSCs对^125I-E2的摄取率均随时间延长逐渐增高，24h最高，分别达到（10．94±0．30）％和（8．934-0．18）％；各个时间点2种载体转染组均明显高于未转染对照组（3．54％-5．52％；t值分别为15．489-26．560、10．523-24．204，P均〈0．05），而Ad-EIV组摄取率高于Lipo-EIV组（t=g．132—16．168，P均〈0．05）。MicroPET／CT大鼠活体显像显示注射Ad-EIV转染的MSCs之左前肢放射性浓聚明显高于对侧。结论报告基因hERL可以通过腺病毒转染、脂质体包裹等多种形式转染细胞并成功表达，应用核素标记E2可以对其�; 兰晓莉覃春霞田月丽夏晓天何勇袁辉张永学; 关键词：放射性核素显像雌二醇同位素标记

A Novel Technique for the Preparation of ^(125)I-5-trimethylstannyl-1-(2-deoxy-2-fluoro-beta-D-arabino-furanosyl) Urail and Its Biodistribution Pattern in Kunming Mice: 2011年; In this study, a novel technique for the preparation of 125I-5-trimethylstannyl-1-(2-deoxy-2-fluoro-beta-D-arabinofuranosyl) urail (FIAU) was developed, 125I-FIAU biodistribution profile was detected in Kunming mice and the possibility of using FTAU radio-labeling for reporter gene imaging was explored. 5-trimethylstannyl-1-(2-deoxy-2-fluoro-beta-D-arabinofuranosyl) urail (FTAU) was labeled with radioiodine (125I). A rotary evaporation method was used to remove excess methanol. The reactant was purified through a Sep-Pak C18 reversal phase column. The radiochemical purity and in vivo stability were determined using silica gel thin layer chromatography (TLC). The biodistribution of 125I-FIAU in Kunming mice was also detected. The results showed that 125I-FIAU could be radiolabeled effectively with FTAU, with mean labeling rate being (81±0.38)% (n =5). The mean radiochemical purity of (98.01±0.40)% (n=5) was achieved after a reversal phase Sep-park column purification. 125I-FIAU was stable when incubated in normal human serum or in saline at 37°C, with a radiochemical purity >96% during a 0.5-24 h time period. Biological experiments exhibited rapid clearance of 125I-FIAU from the blood pool. 125I-FIAU was mostly excreted by kidneys. 125I-FIAU in myocardium dropped conspicuously after 8 h and there was hardly retention at 24 h. We were led to concluded that the new method of radioiodinization of FTAU for the preparation of 125I-FIAU is easy, highly effective and stable in vivo. The biodistribution of 125I-FIAU in Kunming mice showed it can serve as an imaging probe for myocardial reporter genes.; 胡佳张永学孙逊李多兰李崇佼覃春霞曹卫兰晓莉

股骨头缺血性坏死基因治疗及早期影像学监测的研究进展: 2012年; 基因治疗是指将外源性基因导人靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷或异常而引起的疾病，以达到治疗目的。基因治疗作为一种新技术，已用于肿瘤、心血管和神经系统等疾病的治疗，为诸多难治性疾病的治疗带来了曙光。股骨头缺血性坏死是临床难治性疾病，也是骨科常见病，传统的手术疗法和保守疗法都有众多弊端，疗效难以令人满意，而基因治疗作为一种新型疗法，在骨科缺血性疾病的治疗中也展现了光明前景，大量动物实验已经证实了其可行性。该文着重介绍股骨头缺血性坏死基因治疗及早期监测方面的一些研究进展。; 王朋兰晓莉张永学齐红艳; 关键词：股骨头坏死基因疗法

利用报告基因rNIS监测大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌的可行性研究被引量：4: 2010年; 目的研究大鼠钠碘转运体（rNIS）作为报告基因监测大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSC）移植至大鼠心肌的可行性.方法构建含rNIS/增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组腺病毒载体（Ad/rNIS/EGFP）,转染rBMSC后应用荧光显微镜观察细胞表达EGFP情况.按随机数字表法将健康大鼠分为3组,rNIS组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC 抑制组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC,γ显像前口服高氯酸纳对照组大鼠心肌内移植未转染病毒的rBMSC.细胞移植到大鼠心肌后,以99TcmO4-作为报告探针对大鼠进行γ显像,随后进行生物学分布实验,用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别检测心肌组织中rNIS基因和蛋白表达水平,免疫组织化学检测心肌组织中CD11b、CD29、CD34、CD44、CD45和CD90表达情况.组间计量资料的差异用t检验分析.结果重组腺病毒转染后,荧光显微镜下可见到高表达EGFP的rBMSC.rNIS转染的rBMSC移植到大鼠心肌后,γ显像能清晰显示移植部位的心肌,心肌/右前肢放射性比值（RUR）为6.7±0.4,对照组RUR为3.0±0.2,二者之间比较差异有统计学意义,t=2.78,P=0.03.生物学分布实验中,对照组心肌组织的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）为2.5±0.4,明显低于rNIS组的60.2±20.8,差异有统计学意义,t=7.13,P＜0.001.移植心肌组织中rNIS的基因和蛋白都高表达,而对照组心肌组织rNIS表达较低.移植转染细胞的心肌组织中,CD29、CD44、CD90表达阳性,CD11b表达弱阳性,CD34、CD45表达阴性.结论 rNIS可作为报告基因有效监测rBMSC移植大鼠心肌.; 胡硕兰晓莉曹卫曹国祥张国鹏张斌青吴涛常伟张永学; 关键词：心肌干细胞钠碘转运体放射性核素显像

^99Tc^m-亚锡葡庚糖酸钠结合GGC序列监测基因治疗的实验研究被引量：4: 2011年; 目的构建以金属结合肽（双甘氨酰半胱氨酸,即GGC序列）为核素报告基因、人VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体,以99Tcm-GH为报告探针,探讨该报告系统监测治疗基因表达的可行性.方法 pcDNA3-VEGF165质粒线性化后,将金属结合肽GGC序列连于VEGF165基因C端,通过内部核糖体切入位点（IRES）连接增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,构建重组腺病毒载体Ad5-VEGF165GGCmotif-IRES-EGFP（Ad5-VIE）,同时构建腺病毒包装EGFP（Ad5-EGFP）为对照.以不同感染复数（MOI=0,10,25,50,100）Ad5-VIE感染大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）后,用99Tcm-GH为报告探针,研究感染细胞摄取动力学（30,60,90和120 min）情况,以检测GGC序列在MSC中的表达,并与实时定量PCR、Western-blot蛋白印迹、免疫组织化学等方法鉴定的VEGF165表达进行对比分析.通过荧光显微镜及实时定量PCR检测EGFP在细胞中的表达.采用SPSS 13.0软件进行统计学处理,组间比较运用独立样本成组t检验、q检验和直线（Pearson）相关分析.结果以Ad5-VIE感染MSC后,不同MOI摄取实验结果示细胞对99Tcm-GH的摄取率随病毒MOI的增加而逐渐增加（r2=0.86,P＜0.05）,并且在MOI=100时达到（7.94±0.75）%;不同时间摄取实验示随99Tcm-GH孵育时间延长,细胞摄取率逐步增高,至120 min时达到（7.72±0.22）%.Ad5-VIE感染组与Ad5-EGFP感染组摄取率在各个不同时间点差异均有统计学意义（t=15.10～54.92,P均＜0.05）.在mRNA水平上,VEGF165及EGFP表达均随病毒MOI增加而增加（r2=0.99,P＜0.05）.不同MOI下细胞对99Tcm-GH的摄取与VEGF165蛋白表达呈较好的相关性（r2=0.90,P＜0.05）.免疫组织化学检查结果表明人VEGF165目的基因在MSC中成功表达.荧光显微镜下可以观测到被感染细胞中的EGFP蛋白.结论成功构建的重组腺病毒系统Ad5-VIE感染MSC对99Tcm-GH的摄取与VEGF165表达呈正相关.以GGC多肽为报告基因可以监测治疗基因VEGF165的表达,为; 张国鹏兰晓莉何勇陈铨张永学; 关键词：甘氨酸半胱氨酸肽类

多模式成像及多功能分子影像探针技术的研究进展被引量：2: 2013年; 医学影像学技术发展的主要目标是无创性获得人体解剖、生理等多方面信息,以期准确诊断疾病、早期评估疗效。就目前而言,影像模式可以分为两大类：一是提供结构信息的影像,如MRI、CT及超声检查等;二是提供功能及分子信息的影像,如PET、SPECT、磁共振波谱成像及光学成像等。然而对于某些病例,往往无法通过单一的成像方式进行诊断,如：单纯的X-CT成像对肿瘤分期稍显不足,单纯的PET图像也缺乏足够的定位信息。; 高永恒张永学; 关键词：PET

多功能报告探针的制备及应用多模态分子显像监测干细胞的可行性研究: 目的通过蛋白融合技术构建核素报告基因(HSV1-tk)、荧光报告基因(eGFP)和生物素酶报告基因(F1uc)的融合性报告基因TGF并应用腺病毒(Ad)包装,转染骨髓间充质干细胞(BMSCs),研究融合报告基因TGF在B...; 裴之俊兰晓莉覃春霞王朋何勇田月丽张永学

报告基因显像监测干细胞治疗的研究进展: 2010年; 干细胞移植治疗各种组织损伤或退行性疾病是目前国内外研究热点,而对干细胞移植后的活体归巢、分化及功能表达等动态变化却所知甚少,影响了干细胞治疗的进一步发展.报告基因显像是分子影像技术的重要组成部分,通过间接监测转染报告基因的表达,可以动态监测移植干细胞活体内变化过程.该文简述报告基因显像活体监测移植干细胞治疗的最新研究进展和未来发展趋势.; 裴之俊张永学; 关键词：分子诊断技术干细胞移植

国家自然科学基金(30830041)

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