国家自然科学基金(30800524)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：袁劲栾弘许小利张茜吕永曼更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院崇左市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外分化的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可减轻小鼠皮肤移植急性排斥反应被引量：3
- 2010年
- 目的利用转化生长因子-β1(TGF-β1)体外诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞,通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间,并研究其相关机制。方法分选获取CD4+CD25-T细胞,根据诱导条件不同分为3组:对照组、无TGF-β1刺激组和TGF-β1组。检测CD4+CD25+T细胞比例,并用RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型,于0、1、2、3 d输注上述细胞,观察皮肤移植物存活时间,并检测移植物的病理改变和受鼠外周淋巴细胞的增殖能力。结果 TGF-β1组中CD4+CD25+T细胞比例与无TGF-β1刺激组相近,但高表达Foxp3 mRNA(P<0.05)。将培养的细胞输注给受鼠后发现,输注无TGF-β1刺激组细胞的受鼠其移植物平均存活时间(mean survival time,MST)为(7.3±1.6)d,低于对照组(P<0.05);而输注TGF-β1组细胞小鼠MST为(24.1±2.5)d,较对照组和无TGF-β1刺激组明显延长(P<0.05)。病理检测亦显示TGF-β1组受鼠移植物结构完整,无明显淋巴细胞浸润。用Alamar Blue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示,TGF-β1组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制,低于对照组。进一步检测外周血中IL-4和IFN-γ的表达水平,结果显示TGF-β1组小鼠体内IL-4和IFN-γ均明显低于对照组和无TGF-β1刺激组。结论 TGF-β1可诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞,将诱导后的调节性T细胞进行过继输注可延长小鼠皮肤移植物存活时间。
- 袁劲吴轲陈忠华
- 关键词：转化生长因子-Β1调节性T细胞皮肤移植
- 小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3^-T细胞凋亡
- 2010年
- 目的 构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法 常规分子克隆方法 结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3^＋ T细胞的比例.结果 重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3^＋ T细胞的比例.结论 重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.
- 何文涛袁劲徐逸周鸿敏蔡兰军郭晖李超左利群宫念樵陈忠华
- 关键词：凋亡T细胞
- Galectin-9对活化的CD4^＋T细胞免疫调节作用的机制研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究Galectin-9对活化的CD4＋T细胞的免疫调节作用，并进一步探讨其作用机制。方法获取野生型C57BL／6小鼠淋巴细胞，利用MACS分选CIM＋naiveT细胞，给予anti-CD3（2．5μm1）抗体、anti-CD28（5μg／ml）抗体和IL-2（100ng／ml）刺激，培养3d。将活化的CD4＋T细胞分为3组：正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9＋α-乳糖组。利用CFSE检测T细胞增殖情况，并动态观察细胞形态变化；检测CD4＋CD69＋T细胞、Thl、Th2和Thl7细胞的比例；并利用ELISA检测淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17A和TGF-β1等细胞因子的水平；利用Westernblot检测T-bet、GATA-3和ROR-γt等T细胞分化调控蛋白的变化。结果与正常对照组和Galectin-9＋α-乳糖组相比，Galectin-9组于2h时开始出现细胞形态改变，同时CD4＋CD69＋T细胞、Thl和Thl7细胞表达减少（P〈0．05），但Th2细胞无明显变化；培养上清液中IFN-γ、IL-12、IL-17A和TGF-β1的表达水平降低（P〈0．05），而IL-4和IL-10等Th2型细胞因子水平无明显变化；同时T-bet和ROR-γt的表达水平减少（P〈0．05）。结论Galectin-9抑制活化CD4＋T细胞的Thl和Thl7型免疫应答，而对Th2型免疫应答无影响，免疫调节的机制可能与其在转录水平影响Thl和Thl7特定转录因子的表达有关。
- 栾弘张茜王艻张妙陈艳许小利李杏爱刘丽丽袁劲吕永曼
- 关键词：GALECTIN-9TH2TH2TH17
- 狼疮肾炎患者引发尿毒症及其相关因素分析被引量：1
- 2016年
- 目的分析影响狼疮肾炎发展至尿毒症的各类危险因素,探讨预防和减缓狼疮肾炎病情加重的临床措施。方法选择38例确诊狼疮肾炎的患者,观察期内,有23例发展为尿毒症。采用单因素及多因素Logistic回归分析其影响因素。结果单因素Logistic回归分析提示:高血压史、血肌酐>133μmol/L、尿素氮>6.5mmol/L、SLEDAI>10分、GFR降低、尿蛋白>2g是狼疮肾炎发展为尿毒症的危险因素(P<0.05);多因素Logistic回归分析表明:血肌酐>133μmol/L、高血压史、GFR降低、SLEDAI>10分为狼疮肾炎发展为尿毒症的独立的危险因素(P<0.05)。尿毒症患者三年累计病死率(43.48%)远高于病情稳定组患者(6.67%)(P<0.05)。结论应积极控制血压,减少脂肪摄入,低蛋白、低磷饮食为主,结合药物治疗等综合预防措施预防狼疮肾炎患者发生尿毒症。
- 冯绍华袁劲
- 关键词：狼疮肾炎尿毒症
- Galectin-9对CD4＋T细胞亚群Th1／Th2／Th17／Treg免疫平衡的调节作用被引量：5
- 2013年
- 目的研究Galectin．9对CD4＋T细胞亚群Th1／Th2／Th17／Treg免疫平衡的调节作用，并进一步探讨可能的作用机制。方法获取野生型C57BIM6小鼠淋巴细胞，利用MACS分选CD4＋naiT细胞，并分别向Th1／Th2／Th17／Treg进行定向分化，培养5d。所有亚群细胞各分为3组：正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9＋α-乳糖组。利用流式检测各组亚群细胞的比例，realtime-PCR检测亚群细胞各组转录因子的基因表达水平。结果与正常对照组和Galectin-9＋α乳糖组相比，Galectin．9组Th1细胞和Th17细胞比例下降，Th2无明显变化，Treg细胞表达增加；T-bet和RORγt的基因表达水平均下降，GATA-3无明显变化,Foxp3的基因水平则升高。结论Galectin-9能抑制Th1和Th17细胞的免疫应答反应，对Th2细胞无明显作用，同时能上调Treg细胞免疫应答。
- 张茜栾弘王芳许小利周焕李杏爱徐卿吕永曼袁劲
- 关键词：TH2
