国家自然科学基金(30800563)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：杭州市第三人民医院安徽医科大学更多>>
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- 蛋白酶体抑制对黑素细胞酪氨酸酶表达及输出的影响被引量：3
- 2013年
- 目的明确蛋白酶体抑制对黑素细胞酪氨酸酶表达及输出的影响。方法Western印迹检测8例白癜风患者和4名健康对照皮肤组织26S蛋白酶体水平。蛋白酶体抑制剂（1actacystin）处理黑素细胞后，四甲基偶氮唑盐（MTr）法测定黑素细胞活性，检测蛋白酶体活性，电镜观察黑素细胞内质网形态，激光共聚焦观察酪氨酸酶与内质网标志蛋白的共定位表达，Western印迹分析26S蛋白酶体和酪氨酸酶表达水平。结果白癜风患者皮损部位26S蛋白酶体表达水平（1．05±0．40）显著低于正常表皮部位（1．82±0．88）和健康对照（1．88±0．16）（P〈0．05），但后二者间差异无统计学意义（P〉0．05）。与未处理组相比，10μmol／Llactacystin处理12h后对黑素细胞开始有显著抑制作用（细胞活性吸光度值：0．999±0．110比1．372±0．127，P〈0．05），蛋白酶体活性显著低于未处理组（0．234±0．019比1，P〈0．01）。lactacystin处理组内质网相对膨胀值显著高于未处理细胞（1．91±0．17比1．17±0．11，P〈0．01）。lactacystin处理组酪氨酸酶与内质网标志蛋白共定位于内质网，而未处理组酪氨酸酶能有效输出于内质网。与未处理组相比，lactacystin处理组酪氨酸酶表达水平显著下降（146±10比269±8，P〈0．01），且酪氨酸酶活性也显著下降（0．159±0．017比0．221±0．019，P〈0．01）。结论白癜风患者皮损处26S蛋白酶体水平显著下降，蛋白酶体抑制引起黑素细胞内质网膨胀，影响酪氨酸酶有效输出于内质网及表达。
- 许文林福全刘继锋傅丽芳洪为松周妙妮许爱娥关翠萍
- 关键词：白癜风黑素细胞一元酚单氧酶蛋白酶体
- 槲皮素对鼠黑素细胞株BIOBR细胞的抗氧化保护效应及对其生物学活性的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨槲皮素保护鼠永生化黑素细胞（B10BR）对抗氧化应激的有效性及其对B10BR细胞生物学活性影响。方法MTT法测定BIOBR细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，倒置显微镜下观察细胞形态改变．并检测槲皮素对酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果经33．33μmol／L槲皮素预处理24h后细胞活性增高至（94．22±3．36）％，此外黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量可分别增高至（107．15±10．96）％和（111．85±9．49）％，与过氧化氢处理组相比，差异均有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测结果表明，槲皮素可抑制过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡。结论槲皮素抑制过氧化氢诱导黑素细胞凋亡的保护效应为其治疗白癜风提供一定的依据。
- 孙学成关翠萍洪为松林福全许爱娥
- 关键词：黑素细胞槲皮素过氧化氢
- 人黑素浓集素受体1抗原表位肽的表达、纯化及其在白癜风患者中的检测
- 2010年
- 目的 表达及纯化人黑素浓集素受体1抗原表位肽,探讨其在白癜风患者自身抗体检测中的应用.方法 人黑素浓集素受体1抗原表位肽编码基因合成后克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析和Western印迹鉴定目的 蛋白表达.以提取的黑素细胞膜蛋白作为阻断抗原,进行阻断ELISA分析.以目的 蛋白为抗原,检测100例进展期白癜风患者和30例正常人血清IgG抗体情况.结果 成功构建重组表达载体,重组蛋白成功表达并纯化,上样量低于0.0625μg时纯化率达100%.目的 蛋白与白癜风患者血清IgG抗体间的结合能被天然黑素细胞膜抗原抑制.100例进展期白癜风患者血清中有36例与目的蛋白结合反应呈阳性.结论 成功表达并纯化了人黑素浓集素受体1抗原表位肽,该目的蛋白能够结合白癜风患者血清中IgG抗体,可以用于抗人黑素浓集素受体1抗体的检测.
- 关翠萍周妙妮林福全许文洪为松傅丽芳许爱娥
- 关键词：白癜风
- 核因子E2p45相关因子2核转位对黑素细胞生物学活性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨核因子E2p45相关因子2（Nrf2）核转位对永生化黑素细胞株B10BR细胞生物学活性的影响。方法构建电转染野生型和nls缺失型nrf2质粒载体至B10BR细胞，结合叔丁基氢醌（TBHQ）和（或）H2O2处理，Western印迹检测Nrf2，his标签蛋白表达，MTT法测定细胞活性，多巴氧化法检测酪氨酸酶活性，Transwell法测定转染细胞的迁移。结果TBHQ处理的转染组细胞核中Nrf2表达均显著高于TBHQ未处理组（P〈0．01）。转染质粒组间及其与未处理组间细胞酪氨酸酶活性差异均无统计学意义（P〉0，05），H2O2处理使2个质粒转染组酪氨酸酶活性较单独质粒转染组显著下降（pcDNA-nrf2，P〈0．05；pcDNA-nrf2△nls，P〈0．05）。相对于TBHQ未添加H2O2 处理的nrf2组，TBHQ显著增强H2O2处理的野生型nrf2质粒转染细胞酪氨酸酶活性（P〈0．05）；相对于TBHQ未添加H2O2处理的nls组，nls缺失型nrf2质粒转染组细胞酪氨酸酶活性差异无统计学意义（P〉0．05）。相对于nrf2未转染组，H2O2对野生型nrf2质粒转染组细胞活性的影响无统计学意义（P〉0．05）；相对于两组的未处理组，H2O2引起未转染组及nls缺失型质粒转染组细胞活性显著下降（未处理组，P〈0．05；pcDNA-nrf2Anls，P〈0．01）。TBHQ可以保护野生型nrf2质粒转染细胞免受H2O2引起的氧化损伤，对nls缺失型质粒转染组细胞无明显保护作用。各处理组黑素细胞迁移差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Nrf2核转位异常影响黑素细胞的抗氧化能力、黑素细胞活性及酪氨酸酶活性。TBHQ可以激活野生型Nrf2在细胞核中表达水平，增强酪氨酸酶和黑素细胞活性，进而提高细胞的抗氧化水平。
- 林福全许文周妙妮洪为松傅丽芳许爱娥关翠萍
- 关键词：黑素细胞核转位一元酚单氧酶
