黑龙江省科技攻关计划(GA07B401-6)
- 作品数：18 被引量：78H指数：5
- 相关作者：葛菁萍平文祥凌宏志宋刚孙红兵更多>>
- 相关机构：黑龙江大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 副干酪乳杆菌HD1.7遗传转化体系的初步建立被引量：3
- 2011年
- 优化副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7的电转化条件,为构建L.paracasei HD1.7prcR基因敲除突变株奠定基础。通过电转化方法将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L.paracasei HD1.7内,对影响L.paracasei HD1.7电转化的几个主要因素进行了初步研究。当L.paracasei HD1.7生长8h时,加入青霉素使终浓度为12.5μg/mL,再培养1h。经AEB1电转缓冲液(蔗糖浓度为0.3mol/L)处理后,在1.8～2.0KV电压下完成电击,并迅速加入MRS培养基中,复苏5h,成功地将自杀质粒pUC18-prcR-tet转入L.paracasei HD1.7内,并发生了部分同源重组。本研究得到了副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7较优电转化条件,为继续研究L.paracasei HD1.7的群体感应调控因子prcR奠定了基础。
- 葛菁萍高先军由田平文祥
- 关键词：副干酪乳杆菌电转化
- 休哈塔假丝酵母HDYXHT-01利用木糖生产乙醇的发酵工艺优化被引量：5
- 2011年
- 采用Plackett-Burman(PB)方法和中心组合设计(Central composit design,CCD)对休哈塔假丝酵母Candida shehatae HDYXHT-01利用木糖发酵生产乙醇的工艺进行优化。PB试验设计与分析结果表明:硫酸铵、磷酸二氢钾、酵母粉和接种量是影响木糖乙醇发酵的4个关键因素,以乙醇产量为响应目标,采用CCD和响应面分析法(Response surface methodology,RSM),确定了木糖乙醇发酵的最佳工艺为:硫酸铵1.73 g/L、磷酸二氢钾3.56 g/L、酵母粉2.62 g/L和接种量5.66%,其他发酵条件为:木糖80 g/L,MgSO4.7H2O 0.1 g/L,pH 5.0,培养温度30℃,装液量100 mL/250 mL,摇床转速140 r/min,发酵时间48 h,在该条件下发酵液中乙醇产量可以达到26.18 g/L,是优化前的1.15倍。
- 葛菁萍刘国明杨晓峰孙红兵凌宏志平文祥
- 关键词：休哈塔假丝酵母木糖乙醇响应面分析法
- 米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究被引量：2
- 2011年
- 对米曲霉HDF-7所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量约为30 KDa。该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0~8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2＋对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2＋对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度Vmax为6.29μg/min。
- 于艳颖董海莉平文祥葛菁萍
- 关键词：米曲霉蛋白酶分离纯化酶学性质
- 利用氦氖激光诱变提高枯草芽孢杆菌纤溶酶活力的研究被引量：1
- 2020年
- 通过诱变筛选纤溶酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株,得到突变株HDBF-N7HN5。使用氦氖激光诱变,设置不同的诱变时间,通过不同的蛋白平板处理,筛选高产突变株并检测纤溶酶活力。实验结果表明,在氦氖激光诱变处理45 min后,最高产突变株纤溶酶活力达到429.89±5.74 IU/mL。突变株经过10次传代培养后,保持稳定的高产纤溶酶特性。纤溶酶粗酶液处理血凝块的绝对溶解率可达到57.74±0.72%,10倍稀释液处理血凝块的绝对溶解率也能达到26.89±0.68%,菌株产生的纤溶酶具有良好的体外溶栓效果。本研究结果既提高了微生物纤溶酶活性,也为该菌株产纤溶酶的产业化提供了依据。
- 孙莹王海曼宋刚宋刚
- 关键词：纤溶酶诱变育种酶学性质枯草芽孢杆菌
- 地衣芽孢杆菌HDYM-04产β-甘露聚糖酶补料分批发酵条件优化被引量：6
- 2011年
- 利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformics)HDYM-04在5L发酵罐中发酵生产β-甘露聚糖酶,并对其发酵条件、补料策略及用量进行优化。得到最优起始魔芋粉加入量、初始pH值和接种量分别为60g/L、8.0和6.7%;最佳发酵工艺为:温度37℃,搅拌速率300r/min,通气量3L/min,发酵48h。最后确定最佳补料策略为起始加入30g魔芋粉,对数生长后期再加入90g魔芋粉,最终酶活力可高达3913U/mL,较未优化前(2070U/mL)酶活力提高了89%。
- 解鑫平文祥葛菁萍
- 关键词：地衣芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶补料
- 树干毕赤酵母(Pichia Stipitis)木糖还原酶(xyl1)基因克隆与序列分析被引量：2
- 2011年
- 根据木糖还原酶基因序列相似的特点,设计一对引物获得PichiastipitisCICC1960的一段基因片段,此片段长度为957bp,共编码318个氨基酸。利用生物信息学软件对该序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、CDS分析及二、三级结构预测。结果表明该片段为Pichia stipitis CICC1960木糖还原酶基因序列。
- 孙博葛菁萍
- 关键词：PICHIA木糖还原酶
- 氦氖激光和亚硝基胍复合诱变选育高产乙醇的休哈塔假丝酵母被引量：2
- 2011年
- 木糖的乙醇发酵一直被视为木质纤维原料生物转化产生乙醇的关键因素,休哈塔假丝酵母(Candidashehatae)是木糖发酵性能较好的天然酵母之一。对Candida shehatae HDYXHT-01进行了氦氖激光诱变和NTG诱变,力求选育出发酵木糖产乙醇能力强的菌株。氦氖激光诱变得到的突变株HN-3乙醇产量为17.03g/L,乙醇得率达到0.3393g/g,相比原始菌株提高20.36%。再对HN-3进行NTG诱变,得到的突变株NTG-2乙醇产量为24.20g/L,相比HN-3提高42.10%。进而对NTG-2菌株进行了摇瓶48h连续发酵试验,测得其乙醇产量、木糖利用率、乙醇得率和乙醇产率分别达到24.16g/L,69.26%,0.4360g/g和0.7075g/(L·h)。
- 葛菁萍孙红兵王轶男宋刚平文祥
- 关键词：休哈塔假丝酵母NTG诱变乙醇
- 响应面法优化黑曲霉HDF05产β-葡萄糖苷酶过程参数被引量：9
- 2011年
- 为获得黑曲霉Aspergillus niger HDF05菌株较高的β-葡萄糖苷酶酶活,对其发酵条件进行了优化。采用Plackett-Burman实验设计考察关键发酵操作参数对产酶的影响。继而采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并结合中心组合实验和响应面对4个显著性因素进行分析。Plackett-Burman实验结果表明,发酵温度、装液量、麦麸和(NH4)2SO4浓度对β-葡萄糖苷酶合成影响显著。通过响应面分析得到一元二阶方程,对方程求解得到优化的发酵过程参数:发酵温度为28℃,装液量为71.4 mL/250 mL,麸皮浓度为36 g/L,(NH4)2SO4浓度为5.5 g/L。采用该优化的过程参数,菌株的最大产β-葡萄糖苷酶活力可达60.06 U/mL,较优化前提高了23.9%。将黑曲霉HDF05产生的β-葡萄糖苷酶用于酸解玉米芯纤维残渣的酶解实验中,可明显降低纤维二糖的积累,48 h内可使玉米芯纤维素残渣酶解得率达到80.4%。
- 凌宏志葛菁萍平文祥许修宏
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶响应面
- 1株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法研究被引量：5
- 2011年
- 从齐齐哈尔市拜泉县的自酿农家豆酱制品中分离筛选出1株产纤溶酶菌株HDBF-DJ3,对其进行菌体、菌落、生理生化特征分析,并结合16S rDNA序列分析结果,鉴定其为枯草芽孢杆菌。经亚硝基胍诱变筛选得到突变株HDBF-DJ3N7,其纤溶酶活力为368.78IU/mL,是出发菌株的2.1倍。对菌株HDBF-DJ3N7进行连续10代的培养,结果表明该突变株的高产纤溶酶特性能够稳定遗传。该菌株有望应用到生产领域。
- 王海曼宋刚柴洋洋平文祥葛菁萍
- 关键词：豆酱纤溶酶枯草芽孢杆菌诱变
- 黑龙江省不同产地亚麻温水脱胶系统细菌菌群结构分析
- 2012年
- 为使微生物脱胶方法在黑龙江省乃至全国范围内推广,需要对黑龙江省各地亚麻茎秆上的微生物分布情况加以研究。在实验室条件下模拟亚麻温水脱胶系统,采用PCR-DGGE技术对黑龙江省虎林市、北安市、孙吴县、双城市、明水县5个主要的亚麻种植区域所产亚麻原茎的温水脱胶系统中细菌群落多样性进行分析,结果显示,孙吴县和明水县所产亚麻沤制系统中SHANNON-WINENER指数(H)变化趋势相似,虎林市、北安市、双城市所产亚麻沤制系统中H值变化趋势相似,但5个地区亚麻温水脱胶系统中细菌多样性并不丰富。对北安DGGE图谱中两个主要条带进行序列分析,结果表明d条带中主要包含4类菌群,即泛菌属(Pantoea)、芽孢杆菌属(Bacillus)、不可培养细菌(Unidentified bacterium)及未知细菌(New);e条带只含有一个主要类群,假单胞菌属(Pseudomonas)。
- 葛菁萍宋刚凌宏志王平文祥
- 关键词：亚麻脱胶细菌多样性PCR-DGGE
