上海市公共卫生重点学科建设项目(08GWZX0301)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张天宝朱玉平朱江波王飞侯娟更多>>
- 相关机构：第二军医大学复旦大学上海市计划生育科学研究所更多>>
- 发文基金：上海市公共卫生重点学科建设项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 体外卵泡三维培养系统的研究现状被引量：2
- 2012年
- 卵泡体外培养方法是将早期卵泡不成熟卵母细胞（GV期或GV前期）在体外发育到可正常受精的成熟卵母细胞（MII）的方法。由于该方法能对卵巢的主要功能即卵泡发育、激素生成和卵子发生进行动态观察,可在卵泡不同发育阶段对卵泡每一组分进行分析,对卵泡发育,卵子发生和激素调控等生殖生物学机制和生殖毒作用机制进行深入研究，因而成为一项新的前沿技术，受到生殖生物学、临床医学和生殖毒理学等领域的关注。在过去10年当中，卵泡的体外二维培养方法得到了很大的发展，已基本建立绵羊、猪、小鼠和大鼠等体外卵泡培养方法。然而体内所有的细胞都处于一个三维的状态，这个三维的环境对于细胞的生长和分化都是非常关键的，在二维的状态下破坏了卵泡原本的三维结构，与卵泡在体内的实际生长环境不符。为了更好地模拟体内的三维环境，近年来发展了多种培养系统。本文拟对体外卵泡三维培养系统、相关生物材料及各个系统的优缺点等作一简要的综述。卵泡的三维培养方法根据目前文献报道，可大致分为原位培养、微流体培养、凝胶培养和非凝胶培养系统4类。1原位培养方法卵泡的原位培养是指将卵巢组织小块从卵巢皮质中分离出来在体外培养的一种方法。但卵巢组织小块的体外培养作为一项技术运用于原位三维卵泡成熟并不是很有效。Abir等。报道在这种培养模式下卵泡不能顺利的跨过腔前阶段进入有腔阶段，在体外要获得成熟的卵泡必须将卵泡从卵巢皮质中剥离出来。
- 夏仪张天宝
- 关键词：卵泡生物材料动物模型
- 化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进被引量：8
- 2009年
- 目的改进小鼠局部淋巴结实验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法。方法选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SLS)。按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2-氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性。三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同。己基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2-氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。
- 刘珍刘俊平王飞许桂凤侯娟万旭英张天宝
- 关键词：致敏性刺激性化妆品
- 镉对斑马鱼胚胎发育毒性的研究进展被引量：2
- 2010年
- 镉是一种广泛存在于生产和生活环境中的非必需重金属元素。镉染毒动物可出现多器官损害作用。本文综述了镉对斑马鱼胚胎体轴和肌节、血管、脑部及神经系统的发育的影响及可能机制，为深入研究镉对其他高等脊椎动物生长发育的影响提供了参考依据。
- 胡晓晴李卫华金秦廙丁训诚
- 关键词：斑马鱼镉发育毒性
- 纳米氧化锌与常规氧化锌对A549细胞的毒性与DNA损伤的比较研究被引量：3
- 2011年
- 目的:比较纳米氧化锌(Nano-ZnO)和常规氧化锌(Micro-ZnO)对人肺腺癌A549细胞的毒性及DNA损伤作用。方法:采用不同浓度(25、50、100μg/ml)的纳米ZnO(30nm)和常规ZnO(≤1μm)染毒体外培养的A549细胞,实验同时设对照组(DMEM培养液)。分别于染毒后6、12、24、48 h,观察细胞形态及生长情况,采用MTT法和单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测细胞毒性及对DNA的损伤作用。结果:纳米ZnO和常规ZnO对A549细胞的半数致死浓度(IC_(50))分别为53.91和190.15μg/ml;纳米ZnO在50μg/ml剂量时对A549细胞就已出现明显的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖效应关系;而常规ZnO在100μg/ml剂量时才出现细胞生长的抑制。纳米ZnO与常规ZnO的剂量-效应曲线和时间-效应曲线的斜率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,纳米ZnO能够导致A549细胞产生DNA损伤;常规ZnO在相同受试剂量下未观察到DNA损伤。结论:纳米ZnO与常规ZnO均对体外A549细胞产生细胞毒性,但纳米ZnO产生毒性的剂量低、出现时间早,并产生了常规ZnO未观察到的遗传毒性。
- 洪丽玲丁树娟朱江波朱玉平张天宝
- 关键词：纳米氧化锌A549细胞细胞毒性DNA损伤
- 兔着床后全胚胎培养方法及其研究进展被引量：1
- 2012年
- 随着兔在发育毒性评价中的应用越来越广泛以及鼠着床后全胚胎培养技术作为体外替代方法的优势和广泛应用,兔着床后全胚胎培养技术在理论研究和实际应用中均具有重要价值。本文从兔全胚胎培养方法、胚胎形态评分系统、方法学的研究动态、在发育毒性研究中的应用情况以及该方法的优缺点等方面进行综述。
- 王卓张天宝
- 关键词：全胚胎培养致畸性
- 纳米与常规二氧化钛对A549细胞毒性及DNA损伤的比较
- 2011年
- [目的]比较纳米二氧化钛(nano-TiO_2)和常规TiO_2对细胞的毒性及DNA损伤有无差异。[方法]体外培养人肺腺癌细胞(A549细胞),采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)比较25、50、100、200μg/mL质量浓度(以下简称"浓度")的nano-TiO_2(5～10nm)和常规TiO_2的细胞毒性与DNA损伤作用。[结果]nano-TiO_2对A549细胞的毒性与常规TiO_2的变化趋势相近,nano-TiO_2毒性大于常规TiO_2,200μg/mL浓度时作用12h以上两者细胞存活率的差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,nano-TiO_2各剂量组尾DNA含量、Olive尾距、彗星尾长均明显增加(P<0.05);常规TiO_2在受试剂量下尾DNA含量、Olive尾距、彗星尾长与对照组比较均无明显增加。[结论]nano-TiO_2对A549细胞的毒性高于常规TiO_2,且nano-TiO_2可诱导DNA损伤,而常规TiO_2未观察到DNA损伤作用。表明nano-TiO_2与常规TiO_2在毒性大小和毒作用性质均有差异。
- 洪丽玲丁树娟朱江波朱玉平张天宝
- 关键词：纳米二氧化钛A549细胞细胞毒性DNA损伤
- 兔着床后全胚胎培养方法的建立被引量：2
- 2012年
- 目的:建立用于发育毒物研究和评价的兔着床后全胚胎培养方法。方法:取怀孕第9天(gestation day 9,GD9)的孕兔胚胎,参照Carney和Naya的方法,剥离胚胎后单瓶培养,体外培养48 h后将发育情况与文献报道的结果进行对比;并用5.0mmol/L的甲氧基乙酸(methoxyacetic acid,MAA)作为致畸阳性物对所建立的培养方法作进一步验证,采用Carney建立的兔胚胎形态评分系统进行评分。结果:本研究中23个GD9兔胚胎体外培养48 h后,存活率为100%,头长平均增长2.15倍,卵黄囊闭合和胚胎弯曲情况、体节数、自发畸形率、形态评分均数等指标均与文献报道的体外培养发育情况相近,5.0 mmol/L的MAA显示对兔胚胎有发育毒性,包括卵黄囊闭合减少、头部肿胀、面部器官缺失、体节紊乱、尾神经管闭合不全等,形态评分低于溶剂对照(P<0.05)。结论:本研究所建立的兔着床后全胚胎培养方法是可行的。
- 王卓夏仪朱江波朱玉平张天宝
- 关键词：体外全胚胎培养发育毒性
- 扩展的简单串联重复位点诱发突变在遗传毒理学的应用进展
- 2011年
- 扩展的简单串联重复(ESTRs)序列是基因组DNA上高不稳定的一类重复序列。由于其自发突变和诱发突变率高,因而在生殖细胞诱发突变中的研究中得到广泛的应用。随着研究的深入,目前发现有3类重复序列——小卫星、微卫星和ESTRs,主要通过系谱法和单分子PCR法来研究这些重复序列的变化。但迄今为止,这些重复序列的突变机制还不明确。本文主要综述了目前国内外对这3种重复序列的异同、ESTRs突变研究方法的优缺点以及突变机制。
- 梁春柳姚朗张天宝
- 关键词：串联重复序列等位基因系谱聚合酶链反应
- 大鼠体外多器官细胞共培养模型的建立被引量：3
- 2010年
- 目的 建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法 采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;采用飞片法,将5种细胞的飞片放入同一培养皿,用体积分数为10%的FBS DMEM培养基培养7 d,用噻唑蓝（MTT）比色法比较原代细胞在单独培养和共培养时的生长情况.结果 建立的大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞、真皮成纤维细胞分离方法稳定,细胞分离成活率均达90%,其中胶原酶消化法培养肝细胞的存活率达90.3%,两步消化法培养肾细胞的细胞存活率达91.9%,心肌细胞的胶原酶消化法细胞存活率达93.0%.3～15 d的心肌细胞搏动频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,差速贴壁法培养的肺泡巨噬细胞存活率可达90.8%,以胶原酶消化法培养的原代真皮细胞存活率达92.7%,细胞生长状态良好.5种原代细胞的多器官细胞共培养结果显示,共培养时细胞生长增殖情况良好,单独培养与共培养细胞生长曲线基本重合.结论 所建立的大鼠多器官细胞共培养方法是成功的.
- 许桂凤朱江波郑怡文朱玉平马玺里刘珍侯娟王飞张天宝
- 关键词：细胞培养毒理学体外研究
