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三种Bcl-2家族蛋白的表达、纯化及活性分析被引量：3: 2010年; Bcl-2家族蛋白(Bcl-xL、Bcl-2、Mcl-1等)是细胞凋亡、自吞噬等生命过程的重要调控因子,是近年来热门的抗肿瘤药物靶标。从文献报道的蛋白序列出发,克隆用于表达Bcl-2蛋白的人源Bcl-2/Bcl-xL嵌合基因以及用于表达Mcl-1蛋白的人源与鼠源Mcl-1嵌合基因,分别构建谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和组氨酸标签融合基因的原核表达质粒,建立这些融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及纯化方法,以及GST融合的Bcl-xL蛋白的表达纯化方法。通过基于荧光偏振原理的实验方法,测定表达纯化得到的目标蛋白与Bid BH3多肽的结合常数,所得结果与文献报道值接近,而且带有GST标签的融合蛋白与无标签蛋白的活性基本一致。这些成功表达纯化的目标蛋白可应用于以Bcl-2家族蛋白为靶标的小分子调控剂的体外筛选。; 朱翠侠李勋李雯雯石志敏周佳海王任小; 关键词：BCL-2家族蛋白纯化荧光偏振体外筛选

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上海市科学技术委员会资助项目(074319113)