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国家自然科学基金(30570009)

作品数：7 被引量：8H指数：2
相关作者：王行国宣文静蔡雪丽黄俊常玲更多>>
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文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学

主题

  • 3篇磷脂
  • 3篇磷脂酰胆碱
  • 2篇蛋白
  • 2篇细胞
  • 2篇活性
  • 2篇宫颈
  • 2篇宫颈癌
  • 2篇宫颈癌细胞
  • 2篇癌细胞
  • 2篇PC
  • 2篇E.COLI
  • 2篇E7
  • 2篇HPV
  • 1篇蛋白分泌
  • 1篇底物
  • 1篇荧光
  • 1篇生物活性
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学性质
  • 1篇特异性检测

机构

  • 7篇湖北大学

作者

  • 7篇王行国
  • 2篇宣文静
  • 1篇吕露超
  • 1篇常玲
  • 1篇李昌瑜
  • 1篇喻雪婧
  • 1篇蔡雪丽
  • 1篇叶青
  • 1篇赵琼
  • 1篇尹姣
  • 1篇吴彬
  • 1篇徐娴
  • 1篇张萍萍
  • 1篇何婷
  • 1篇黄俊
  • 1篇陈茹

传媒

  • 4篇武汉大学学报...
  • 2篇湖北大学学报...
  • 1篇微生物学报

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
  • 1篇2007
  • 1篇2006
  • 1篇2005
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
MG-132诱导宫颈癌细胞表达HPV病毒蛋白E6和E7被引量：1
2008年
使用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理宫颈癌细胞系CaSki和HeLa S3细胞,WesternBlot检测发现2-5 mg/L MG-132 37℃处理3 h明显增强CaSki细胞中人类乳头瘤病毒HPV E6和E7蛋白的表达量,增加MG-132浓度或延长处理时间并未见E6和E7蛋白量的增加.用相同的方法处理HeLa S3细胞,也观察到HPV E7蛋白的增加.XTT活细胞分析和台盼蓝死细胞检测显示2 mg/L MG-132处理癌细胞3 h,其细胞死亡率10%.这一发现将有可能协助提高以E6、E7蛋白作靶位点的生物导弹疗法的效果.
赵琼李洋王行国
关键词：宫颈癌细胞HPVMG-132
E.coliPC^+PE^-菌株AD93/ptac67的构建及其生物学性质被引量：1
2009年
将螺旋菌Borrellia.afzelii编码的磷脂酰胆碱合成酶基因(pcs)导入磷脂酰乙醇胺阴性菌株E.coliAD93(PE-)获得磷脂酰胆碱阳性、磷脂酰乙醇胺阴性的菌株E.coliAD93/ptac67(PC+PE-).生理生化特性调查显示:AD93/ptac67菌株的生长需要高于10 mmol/L的Mg2+,而对照细菌AD93则需要高于20 mmol/L的Mg2+,AD93/pDD72菌株则不需要;AD93/ptac67与AD93 SDS的MIC值为0.02%,比AD93/pDD72低约10倍;5%NaCl完全抑制AD93/ptac67的生长,3%NaCl则几乎完全抑制AD93的生长,而NaCl浓度为5%时,AD93/PDD72菌株仍能生长;SDS-PAGE图谱显示3种菌株的周质蛋白差异显著,而外膜蛋白差异不明显.在活体细菌中,磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺并不能使缺少磷脂酰乙醇胺的突变体恢复至野生型状态,显示磷脂酰胆碱不能完全替代磷脂酰乙醇胺的功能.
李昌瑜喻雪婧叶青吴彬李洋王行国
关键词：磷脂酰胆碱磷脂酰乙醇胺
推定的BB0462蛋白增强oppAⅤ启动子的转录活性
2006年
Borrelia burgdorferi基因组中BB0462 ORF编码一种由110个氨基酸组成的未知功能BB0462蛋白．使用推定的氨基酸序列在蛋白库中进行Blast比对以及推定蛋白的二级结构预测的结果都显示BB0462蛋白与YhaB家族的蛋白类似．共转化后β-半乳糖苷酶活性分析发现BB0462蛋白增强了B．burgdorferi lp54质粒携带的oppAⅤ上游调控区的转录活性，而对其他4个oppAⅠ～Ⅳ上游调控区调控区的转录活性没有影响．利用纯化的BB0462融合蛋白在体外分别与oppAⅠ～Ⅴ调控区DNA片段进行凝胶阻滞分析，发现BB0462蛋白仅与邻近oppAⅤ基因转录起始点的一段409bp上游调控区DNA结合．用未标记的oppAⅤ上游调控区DNA与DIG-标记的oppAⅤ上游调控区DNA竞争BB0462蛋白，使凝胶上的DNA迁移阻滞带完全消失．β-半乳糖苷酶活性分析和凝胶阻滞分析表明BB0462蛋白在oppAⅤ基因表达的转录调控中可能起重要作用．
王行国尹姣徐娴
关键词：凝胶阻滞分析转录活化因子
掺入大肠杆菌膜中的磷脂酰胆碱(PC)影响青霉素β-内酰胺酶的分泌被引量：6
2008年
【目的】为了研究磷脂酰胆碱（PC）在原核生物细胞中的生物学作用，探讨PC对细菌膜系统的功能的影响。【方法】使用p^tac85质粒作载体，将螺旋菌pcs基因导人E．coli Top10细胞构建了E．coli Top10 pcs^＋菌株，并在特定的条件下培养细菌，使细菌膜磷脂中合成30％左右的磷脂酰胆碱。然后再使用抗生素抗性分析、β-内酰胺酶的酶活测定以及Western blot杂交技术，分析质粒编码的β-内酰胺酶从细胞质到细胞间质的分泌情况。【结果】抗生素抗性分析发现，高浓度的氨苄青霉素抑制E．coli Top10 pcs^＋细菌的生长的氨苄青霉素剂量低于对照组，其半致死剂量IC50在700～800μg／mL之间。酶活检测显示E．coli Top10 pcs^＋细菌周质内β-内酰胺酶的酶活性只有对照菌株的1／5，Western blot进一步分析发现周质内β-内酰胺酶的含量也为对照菌株的1／5。由此可见，周质内低含量的β-内酰胺酶是导致E．coli Top10 pcs^＋细菌氨苄青霉素抗性降低的原因。【结论】掺人细菌膜磷脂双分子层的PC影响β-内酰胺酶通过Sec转运途径从细胞质分泌到细菌周质空间内，提示细菌磷脂酰胆碱可能在调节蛋白转运和分泌方面起着重要的作用。
蔡雪丽李洋宣文静王行国
关键词：磷脂酰胆碱Β-内酰胺酶氨苄青霉素蛋白分泌
F15L和K207E突变与Borrelia螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶的生物活性被引量：2
2005年
磷脂酰胆碱合成酶是磷脂酰胆碱合成酶(PCS)途径中的关键酶.根据Borrelia burgdorferiBB0249ORF的DNA序列设计引物对,从B.afzelii总DNA中扩增出一段660 bp DNA.序列分析发现扩增的DNA片段编码的蛋白中仅两个氨基酸(L15和E207)不同于B.burgdorferiBB0249 ORF编码的蛋白(F15和K207).将克隆的基因插入pET表达载体,并在大肠杆菌中表达.在活体中进行的活性分析发现,克隆的DNA片段编码的蛋白质能利用外源的胆碱和大肠杆菌细胞内的CDP-二酰基甘油合成磷脂酰胆碱(PC),表明螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶15位的苯丙氨酸和207位赖氨酸残基分别被亮氨酸和谷氨酸替代并不影响磷脂酰胆碱合成酶的活性.
王行国宣文静常玲黄俊
关键词：螺旋菌磷脂酰胆碱
E.coli酪氨酸转氨酶的纯化与非天然氨基酸的底物特异性检测
2010年
构建重组菌株E.coliBL21(DE3)转pET23a-tyrB,IPTG诱导其大量表达,然后依次通过盐析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析获得纯酶,运用薄层层析技术(TLC)检测,结果表明纯化的TyrAT转氨酶对自身底物酪氨酸在37℃和50℃具有较高活性.分别加入非天然氨基酸L-正缬氨酸、L-新戊基甘氨酸、L-叔亮氨酸、D-正亮氨酸作为底物,检测到TyrAT转氨酶对L-叔亮氨酸在50℃下有活性,对D-正亮氨酸在37℃和50℃均有催化活性,且50℃下效果更好.
陈茹王行国何婷张萍萍
关键词：纯化非天然氨基酸薄层层析
抗HPV E7小鼠单克隆抗体与人类宫颈癌细胞的特异性结合
2007年
使用抗HPV E7蛋白的小鼠单克隆抗体进行Western blot杂交,发现3种人类宫颈癌细胞系CaSki、Hela S3和SiHa均表达一定量的HPV E7病毒蛋白,表达量由高至低依次为CaSki,Hela S3,SiHa.选取CaSki为代表,用荧光免疫标记法检测抗E7抗体分子与活体癌细胞中HPV E7蛋白结合的情况.结果发现,仅衰亡细胞、0.3%Triton X-100处理30 min后的活细胞以及137Cs辐射处理后的活细胞显示荧光,暗示只有细胞膜通透性发生改变后抗E7小鼠单克隆抗体分子才能进入细胞与HPV E7蛋白特异地结合.流式细胞仪检测表明,与同型IgG抗体mAbS26相比,抗E7抗体分子与CaSki细胞作用时荧光标记细胞的净增百分率为16.5%,说明抗E7小鼠单克隆抗体分子与CaSki细胞结合具有特异性.
吕露超李洋王行国
关键词：宫颈癌细胞HPVE7蛋白免疫荧光
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