科技部基础研究重大项目前期研究专项(2003CCA01000)
- 作品数：14 被引量：80H指数：6
- 相关作者：马纪张富春吕国栋薛娜赵干更多>>
- 相关机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：科技部基础研究重大项目前期研究专项新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金教育部“春晖计划”更多>>
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- 昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备被引量：6
- 2005年
- 目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。
- 王芸吕国栋薛娜张富春马纪
- 关键词：昆虫抗冻蛋白原核表达蛋白印迹抗冻蛋白基因抗血清制备纯化
- 木那格葡萄快速繁殖及愈伤组织的诱导和继代被引量：4
- 2006年
- 研究了木那格葡萄快速繁殖并确定了木那格葡萄愈伤组织诱导和继代的适宜条件。将木那格葡萄种子无菌处理,获得无菌幼苗,以单芽茎段为外植体,对木那格葡萄快速繁殖条件进行优化；以叶片为外植体,确定愈伤组织诱导和继代的适宜条件。结果表明：使用70%乙醇灭菌30s,0．1%升汞灭菌3min,使用浸湿的滤纸培养,适宜木那格葡萄种子萌发,萌发率为70%；适宜单芽茎段不定芽再生的培养基为B5+6-BA 0．05mg/L+IBA 0．3mg/L+蔗糖30g/L,不定芽增殖倍数为1．25；适宜不定芽生根的培养基为B5+IBA 0．2mg/L+蔗糖30g/L,平均单芽生根数为5．09,平均根长2．97cm；适宜愈伤诱导的培养基为B5+6-BA1．5mg/ L+NAA 0．2mg/L+蔗糖30g/L,愈伤诱导率为100%；适宜愈伤继代的培养基为B5+6-BA 1mg/L+2,4-D 0．1mg/L+蔗糖30g/L。
- 吕惠平王起才马纪
- 关键词：葡萄快速繁殖愈伤组织
- 检测抗冻蛋白生物学活性两种方法的比较被引量：4
- 2007年
- 为了比较两种方法测定昆虫抗冻蛋白生物学活性的优劣．通过抗冻蛋白细菌低温保护实验测定菌液OD500和菌落计数两种方法同时研究洛氏脊漠甲抗冻蛋白对大肠杆菌的低温保护效果，实验表明发现这两种方法所得结果相近，相关系数r=0.82～1．0，相关性显著（p〈0．05）．菌落计数法的误差小NOD值法，适用于菌落数少的情况，OD值法适用于菌落密度大的情况，两种方法都可用于研究抗冻蛋白低温保护活性.
- 吕国栋马纪
- 关键词：抗冻蛋白
- 水浮莲无菌苗的获得及其培养体系的优化被引量：5
- 2008年
- 为了有效地进行水浮莲(Pistia stratiotes)的基因工程改造,达到利用水浮莲进行污染水体的植物修复,本研究建立了水浮莲无菌苗培养体系。采用二次消毒法获得水浮莲的无菌苗,并研究了萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、蔗糖、pH值对其生长的影响,确立了水浮莲的优化培养体系为:1/2 MS+6-BA 0.25mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖20g/L,pH6.0。水浮莲在此培养基上可快速扩增和长期继代培养,无菌生长的水浮莲比温室中自然水浮莲的植株形态小,易于研究操作。
- 蒋刚强王瑜兰海燕张富春马纪
- 关键词：水浮莲无菌苗
- Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达被引量：9
- 2006年
- 利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆黄粉甲虫(Tenebriomolitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明,获得9条新cDNA片段,与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430,转化E.coliBL21进行原核表达,SDS-PAGE分析结果表明,抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达,相对分子量为38kDa。构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430,免疫小鼠,获得的抗血清滴度为1:2000。Westernblotting结果为单一的条带,证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430抗原的专一性。
- 刘忠渊王芸吕国栋王贤磊张富春马纪
- 关键词：抗冻蛋白CDNA片段原核表达
- 准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MPAFP5毕赤酵母表达产物的理化性质被引量：7
- 2006年
- 研究准噶尔小胸鳖甲Microdera punctipennis dzhungarica Kasz抗冻蛋白MPAFP5真核表达产物的功能及理化性质。首先用硫酸铵浓度梯度沉淀初步纯化酵母真核表达产物,然后通过细菌低温保护实验检测抗冻蛋白MPAFP5低温保护功能,同时探讨抗冻蛋白MPAFP5在酸碱环境和100℃时的稳定性,并通过等电聚焦凝胶电泳检测其等电点。研究表明MPAFP5真核表达产物在低温下能够提高细菌的存活率,能够耐受高温和一定程度的强酸强碱,其等电点约为5.8左右。准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MPAFP5真核表达产物与赤翅甲抗冻蛋白(DAFP)的比较表明拟步甲类昆虫抗冻蛋白具有相似的理化性质。
- 吕国栋孙洁马纪张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白理化性质等电点
- 新型食品原料--抗冻蛋白被引量：1
- 2008年
- 阐述抗冻蛋白的特性及分类,讨论抗冻蛋白作为一种新的食品原料在食品工业中的应用及前景。
- 孙琳杰李素丽马纪李友广张富春
- 关键词：抗冻蛋白食品原料
- 新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的克隆和抗冻活性分析被引量：35
- 2005年
- 根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3’-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲Microderapunctipenisdzunarica中获得了长约294bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长序列为363bp(GenBank注册号为AY821792)。基因测序结果表明,MpAFP5cDNA片段与加拿大拟步甲DendroidescanadensisAFP8基因片段、黄粉甲TenebriomolitorTHP4-9基因片段的核苷酸同源性分别达68.4%和71.8%,氨基酸序列同源性分别达70%和81%。将MpAFP5构建到原核表达载体pGEX4T-1中,重组质粒pGEX4T-1-MpAFP5在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达融合抗冻蛋白,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为37kD,Western印迹分析证明MpAFP5在大肠杆菌中正确表达。细菌的抗冻实验结果显示准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白对细菌具有显著的抗冻保护作用,保护效果与抗冻蛋白剂量呈正相关性。
- 赵干马纪薛娜杨长庚专芳芳张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白RT-PCR抗冻活性
- 昆虫抗冻蛋白的结构与生物学特性研究被引量：3
- 2006年
- 抗冻蛋白(antifreeze proteins AFPs)是一类抑制冰晶生长的蛋白质,它能以非依数性形式降低溶液的冰点而对其熔点影响甚微,因而也被称作热滞蛋白。近几年来对于昆虫抗冻蛋白的研究取得了较快的发展,已有20多种昆虫抗冻蛋白被分离纯化。就昆虫抗冻蛋白的结构特征、生物学特性以及在农业、医学和食品工业等方面的应用进行介绍。
- 马纪赵干
- 关键词：昆虫抗冻蛋白热滞活性生物活性
- “京亚”葡萄种子萌发特性及其卡那霉素抗性的研究被引量：1
- 2008年
- 探讨了不同消毒条件下"京亚"葡萄种子在培养瓶中萌发的情况,获得"京亚"葡萄种子最佳消毒条件是70%乙醇15S,0.1%升汞5min;通过对"京亚"葡萄种子进行不同浓度GA3浸种、不同浸种时间、不同培养基质和不同光照条件处理,得到优化的"京亚"葡萄种子萌发条件是GA34000mg/L浸种48h,置于1/2MS培养基中暗光培养,萌发率为79.4%;对"京亚"葡萄种子抗卡那霉素特性的研究得到"京亚"种子抗卡那霉素的临界浓度为40mg/L.
- 王起才王艳马纪叶峰
- 关键词：赤霉素种子萌发卡那霉素抗性
