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应用RNAi技术培育抗TMV病毒转基因烟草被引量：25: 2007年; 利用烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白基因构建RNAi干涉载体,通过叶盘法转化至烟草K326和龙江911两个栽培品种。对转基因株系的荧光定量PCR分析表明,不同转基因株系的病毒RNA靶序列都得到一定程度的降解,抗病性鉴定结果证实,转基因K326和龙江911两个栽培品种的转基因材料分别有83%和90%转基因株系对TMV呈现免疫级抗性。; 颜培强白先权万秀清郭兆奎李丽杰公海英储成才; 关键词：RNAI 转基因烟草 TMV

应用RNAi技术培育抗2种病毒病的转基因烟草被引量：15: 2007年; 分别提取烟草普通花叶病(TMV)和烟草黄瓜花叶病(CMV)的病毒RNA。经反转录和外壳蛋白阅读框PCR扩增,获得TMV和CMV外壳蛋白基因cDNA,分别进行两种病毒已知株系cDNA序列比对获得各自的保守序列。设计干涉序列,将干涉片段扩增产物连接到pMD18-T的相邻酶切位点,制备融合序列,并将其正向和反向序列插入pUCCRNAi载体,再转化到pCAMBIA2300-35S-OCS表达载体中。利用农杆菌LBA4404侵染烟草K326,获得3份含有TMV和CMV外壳蛋白基因干涉序列的转化材料,经分子鉴定证实干涉序列已导入烟草。采用荧光定量PCR技术对其mRNA表达差异进行分析。抗病性调查表明转化烟株对TMV和CMV抗性都显著增强。; 颜培强李丽杰康宏万秀清白先权郭兆奎储成才; 关键词：RNAI 烟草普通花叶病烟草黄瓜花叶病烟草

根癌农杆菌介导外源基因转化烟草体系的优化被引量：7: 2010年; [目的]为了建立优化的根癌农杆菌介导的烟草外源基因转化体系,提高烟草外源基因转化率。[方法]以无菌烟草苗叶盘预培养时间和农杆菌与烟草叶盘的共培养条件为试验要素,筛选适宜的预培养时间和共培养条件范围,其余操作按常规步骤进行。[结果]烟草叶盘的预培养适宜时间为27℃下35～40h;农杆菌与烟草叶盘共培养的适宜条件为22～24℃下共培养30～45h,其中23℃下共培养45h效果最佳;之后转入选择培养基内培养。[结论]该研究可为烟草外源基因的转化提供理论依据。; 律凤霞; 关键词：烟草外植体根癌农杆菌

外植体预培养时间对番茄外源基因转化的影响: 2014年; 以番茄叶片为外植体,含有烟草花叶病毒外壳蛋白（TMV-rep）基因的工程农杆菌LBA4404为外源基因转化的双元载体,通过农杆菌叶盘法将外源基因转入番茄,转化前将番茄叶片进行不同时间预培养,研究外植体预培养时间对外源基因转化率的影响.结果表明,最适宜的预培养时间为32～48 h,番茄外植体转化率均达到70％以上.; 李猷尹蕾唐凯悦律凤霞; 关键词：番茄烟草花叶病毒转化率

外源RNA干涉基因在烟草中的转化及表达被引量：4: 2009年; 依据RNA干涉机制,以TMV复制酶基因为靶标基因,针对TMV5个株系复制酶基因间高度同源序列设计引物,经RT-PCR反应获得靶序列,构建靶序列反向重复结构的RNA干涉双元载体。用根癌农杆菌介导将外源基因转化至烟草品种K326基因组中,培育RNA干涉转基因烟草。人工接种病毒验证转基因烟草中外源基因在植物抗病毒能力方面的表达效果,实时荧光定量PCR分析转基因烟草抗病毒能力。结果表明,实验培育的RNA干涉转基因烟草67%对TMV呈现高度抗性;荧光定量PCR分析显示,对TMV具高度抗性的转基因烟草中病毒复制酶基因转录产物mRNA存在很大程度的降解,证实了RNA干涉技术在培育抗病毒烟草品种中的效果。; 律凤霞潘永明郭兆奎; 关键词：RNA干涉烟草花叶病毒基因表达

六盘水植烟土壤主要养分特征分析被引量：17: 2009年; 为了对六盘水烤烟生产的营养调控和合理布局提供参考，对六盘水烟区主要植烟乡镇的105份土壤样品的主要理化性状进行了分析。结果表明：六盘水烟区的土壤pH5．3～6．7，除米箩和野钟植烟土壤的pH值稍偏低外，其余植烟乡镇的土壤pH均在烤烟适宜的PH值范围内；有机质和全氮含量丰富，分别为24．21～64．50g／kg和1．78～3．67g／kg，但大部分植烟土壤有机质含量和全氮含量偏高，应适当限制氮肥和有机肥的施用量；土壤全磷含量为0．48～1．70g／kg，供磷潜力较大；土壤全钾舍量16．72～39．55g／kg，大部分乡镇植烟土壤的供钾潜力较强，蟠龙、猴场、珠东和民主的有效钾含量较低。应根据具体的地块适当增施钾肥；有效硫、锰、铁、铜含量丰富，分别为19．90～84．79mg／kg、26．18～109．33mg／kg、17．33～65．91mg／kg和0．63～7．27mg／kg；有效锌、有效硼含量为0．65～3．70mg／kg和0．38～1．35mg／kg，属中等水平；水溶性氧含量4．55～18．21mg／kg，优于优质烤烟生产的氯素最佳水平。; 王忠宇何建华瞿鸿飞周小平; 关键词：烤烟土壤养分含量

TMV复制酶基因靶向的RNA干涉载体构建被引量：4: 2008年; 以TMV复制酶基因作为RNAi的靶向序列,应用RT-PCR法获得目的DNA序列。依据RNAi机制,以酶切后连接的方法将目的DNA序列正向、反向锚定连接到pUCCRNAi载体质粒,构建含目的序列反向重复结构的RNA干涉中间载体;反向重复结构酶切后插入含超强启动子的pC2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒经冻融法转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成双元载体系统的构建。每步的重组子经特异引物PCR验证和酶切验证有相应的特异条带存在,且测序鉴定序列正确。确认成功构建了TMV复制酶基因靶向的RNAi双元载体,为RNAi技术在植物病毒病害防治中的应用奠定基础。; 律凤霞郭兆奎颜培强万秀清潘永明; 关键词：RNA干涉

TMV和CMV病毒外壳蛋白基因双靶向的RNA干涉载体构建: 2016年; 依据RNA干扰机制构建多病毒基因靶向的RNA干涉双元载体系统,为培育抗病毒复合侵染的番茄品种提供遗传转化载体。以烟草病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)病毒外壳蛋白基因作为RNA干扰靶标基因,针对病毒株系间外壳蛋白基因同源区域设计靶序列引物,经RT-PCR获得两段靶标基因的DNA靶序列。借助T载体将两段靶序列连接成一条DNA序列。酶切后正向、反向锚定连接到p UCCRNAi中间载体的克隆位点,形成靶序列在载体中的双向重复结构;重复结构酶切后插入含超强启动子的p C2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒电击转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成RNAi双元载体系统的构建。; 尹蕾唐凯悦张跃新李猷律凤霞; 关键词：RNA干涉

盘县主要烟区土壤养分状况及生产对策被引量：1: 2010年; 2:008年对盘县主要的10个种烟乡镇48个土壤样品进行了调查分析。结果表明,盘县土壤有机质较丰富,平均值超过30 g/kg;土壤速效磷分布均匀性较差,含量从总体上看偏低,新民乡、忠义乡、大山镇局部土壤磷含量过低;全县总的土壤钾含量较充足,有利于烟叶发展,大山镇、保田镇的土壤含钾较丰富,珠东乡土壤属于贫钾,需要增加施钾量;全县总体含硫量丰富,四格乡土壤含硫量过高,要控制肥料含硫量。; 周小平张崇德王忠宇张福全; 关键词：烟草养分

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国家烟草专卖局基金(110200401008)