广州市科技攻关项目(201300000040)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张玲华马苗鹏蔡海明杨军李华周更多>>
- 相关机构：华南农业大学广州市良种猪场更多>>
- 发文基金：广州市科技攻关项目广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 5'非翻译区序列改建提高抗菌肽PR39表达被引量：5
- 2013年
- 目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到pPIC9K-PR39-D,再经PCR、酶切连接构建5'UTR已删除8个核苷酸GGATCCAA的新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E;pPIC9K-PR39-D-E转化到毕赤酵母SMD1168,经PCR鉴定及G418筛选,用0.5%的甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性,表达产物经反相层析及SP-Sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果:经Tricine-SDS-PAGE检测,在4.7kDa左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/L。获得的抗菌肽PR39对E.coli DH5α,有明显抑菌活性。结论:经改建后新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽PR39,为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。
- 明飞平杨军朱进美邝哲师李华周夏枫耿叶明强王候光赵祥杰黄志丰蔡海明施巨清马苗鹏张玲华
- 关键词：抗菌肽分泌表达抗菌活性
- 猪去乙酰化酶SIRT3的克隆及表达被引量：3
- 2014年
- 本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3,并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列;通过Ω-PCR,将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达和亲和层析纯化;经免疫印迹分析初步评价SIRT3的抗原性和特异性。重组原核表达质粒pET28aSIRT3经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约39ku,能被相关抗体识别。结果表明,本试验成功在大肠杆菌中表达猪去乙酰化酶SIRT3,为对其进行进一步研究奠定了基础。
- 王候光马苗鹏黄魁英李华周明飞平王伟芳夏枫耿罗梦晓杨军蔡海明施巨清黄朝远楚品品董建明朱红霞张玲华
- 关键词：原核表达
