湖南省重点学科建设项目(03-985-3-7)
- 作品数：3 被引量：17H指数：2
- 相关作者：徐绍锐余俊龙戴橄何卓汪世平更多>>
- 相关机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省重点学科建设项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果:获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。
- 余俊龙汪世平何卓戴橄姜孝新曾少华肖晓芹周松华李文凯徐绍锐吕志跃彭先楚
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 日本血吸虫中国株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的克隆、表达及其免疫保护性研究(英文)被引量：15
- 2006年
- 根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)EST(BU803192)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接,获得SjHGPRT全长cDNA(1270bp),经序列分析,推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框,其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SmHGPRT)全长编码基因碱基一致性为82%,其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%.将其编码基因克隆到表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子质量约为28ku.用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测,在预测位置上出现明显的识别条带.重组蛋白动物免疫保护性结果显示:在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面,疫苗组与对照组比较差异均具有显著性(P<0.05,P<0.01).结果表明,日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达,表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子.
- 余俊龙汪世平何卓戴橄李文凯姜孝新曾少华肖小芹徐绍锐吕志跃彭先楚周松华刘雪琴
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA的克隆、表达及保护性免疫评价被引量：1
- 2007年
- 根据GenBank日本血吸虫(Schistosoma japonicum)琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)不完整的表达序列标签(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR策略,对SjSDISP cDNA不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用序列比对拼接电子软件比对,基于重叠区进序列合并,获得1071bp的SjSDISP全长cDNA.序列分析推断该片段含有编码SjSDISP基因的完整阅读框,编码278个氨基酸残基.将其编码基因克隆到原核表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子量约为32kD.用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行Western blot检测,在预测位置上出现明显的识别条带.用纯化的重组蛋白rSjSDISP免疫小鼠,进行动物免疫保护性评价,在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵数方面,与佐剂对照组比较差异均具有显著性(P<0.05,P<0.01).结果表明,日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白酶(SjSDISP)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达;表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗日本血吸虫病疫苗候选分子.
- 余俊龙汪世平李文凯戴橄徐绍锐何卓彭先楚周松华刘雪琴
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达免疫保护
