广西壮族自治区自然科学基金(2012GXNSFBA053077)
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 相关作者：周兴文李纪元朱宇林殷恒福孙迎坤更多>>
- 相关机构：玉林师范学院中国林业科学研究院青岛农业大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金高层次人才科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 金花茶黄烷酮3-羟化酶基因CnF3H的克隆及表达分析被引量：6
- 2015年
- 本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c DNA序列全长为1 360 bp,5'非翻译区(untranslated regions,UTR)长54 bp,3'UTR长202 bp,开放阅读框长为1 104 bp编码367个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,Cn F3H与茶(C.sinensis)F3H同源性高达99%。二级结构预测表明,无规则卷曲在Cn F3H蛋白结构中所占比例最大,其次为α-螺旋和延伸链。相对荧光定量PCR分析表明,Cn F3H基因的表达量在幼蕾期、初蕾期和膨大期的表达量较高,之后逐渐降低;Cn F3H基因在花器官不同部位中均有表达,其表达量高低顺序为雄蕊、花瓣、萼片、雌蕊和苞片。本研究为全面深入地研究金花茶花色形成的分子调控机理提供了充实的理论依据。
- 周兴文殷恒福朱宇林李纪元
- 关键词：金花茶基因克隆
- 金花茶CnCHS基因原核表达载体的构建及表达分析
- 2014年
- 根据已经克隆得到的金花茶(Camellia nitidissima Chi.)查尔酮合成酶基因序列,设计引物对P1/P2扩增出该基因全长并将其构建到原核表达载体pGEX-4T-1中,转入大肠杆菌BL21后,用浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导其表达。SDS-PAGE电泳检测结果显示,被诱导的大肠杆菌菌体中出现了约68ku的特异融合蛋白,表明该基因在大肠杆菌中成功表达。
- 周兴文李纪元朱宇林孙迎坤
- 关键词：金花茶查尔酮合成酶原核表达
- 金花茶FLS基因的克隆及其植物表达载体的构建被引量：8
- 2013年
- 利用RT-PCR和RACE技术,从我国珍稀濒危植物金花茶花瓣中获得了黄酮醇合成酶(Flavonol synthase,FLS)基因的cDNA全长,命名为CnFLS,GenBank登录号JF343560.1。根据该基因序列设计全长扩增引物P3/P4进行PCR扩增,将扩增产物插入PMD18-T载体并转化克隆菌株DH5α,提取质粒DNA酶切鉴定,通过酶切连接的方法将该基因与改造后的pCAMBIA1300表达载体连接,成功构建了该基因的正义表达载体pCAM-CnFLS。根据该基因的保守序列设计了含有酶切位点的特异引物G1/G2,扩增出250 bp的干扰片段并将其克隆到PMD18-T载体,在中间载体pUCCRNAi及表达载体pCAMBIA1300的基础上,通过多次酶切连接,成功构建了金花茶FLS基因的干扰表达载体pCAMRNAi-CnFLS。金花茶正义及干扰植物表达载体的成功构建,为进一步研究该基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。
- 周兴文李纪元殷恒福范正琪李辛雷
- 关键词：金花茶RNA干扰表达载体构建
- 金花茶查尔酮合成酶基因CnCHS的克隆及遗传转化研究被引量：5
- 2015年
- 根据已发表的金花茶查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因(CnCHS)序列设计全长扩增引物,以金花茶花瓣总cDNA为模板进行PCR扩增,成功获得了该基因cDNA全长。将扩增所得全长产物连接PMD18-T载体后转化大肠杆菌E.coli DH5α,提取质粒后经酶切、测序鉴定后,将其与双元表达载体pCAMBIA1300连接,成功构建了CnCHS基因的正义表达载体pCAM-CnCHS。将该重组表达载体转化农杆菌EHA105后,利用农杆菌介导法将CnCHS基因转入烟草,获得转基因烟草18株。利用PCR法及Southern blotting对所获得的转基因植株进行鉴定,结果显示CnCHS基因成功整合到烟草基因组中,阳性率达67%,并获得了单拷贝转基因植株。这些结果表明本研究成功构建了金花茶CnCHS基因对烟草的遗传转化体系,为深入研究CnCHS基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。
- 周兴文李纪元朱宇林
- 关键词：金花茶查尔酮合成酶转基因植株
- 盐胁迫对香石竹种子萌发及幼苗生长的影响被引量：1
- 2013年
- 以香石竹为试材,研究了不同浓度NaCl处理对香石竹种子萌发、幼苗生长等生理生化指标的影响,探讨盐胁迫对香石竹种子萌发及幼苗生长的抑制效应。结果表明:NaCl处理可抑制香石竹的生长量和生物量;与地上部分相比,根系对盐胁迫更加敏感。随着NaCl浓度的增加,香石竹的发芽率和发芽势不断降低,脯氨酸含量呈上升趋势;在NaCl浓度为0.6%时,脯氨酸含量明显增加,而根系活力显著降低,香石竹幼苗生长明显受到抑制。
- 杨凯孙迎坤谭雯周兴文
- 关键词：盐胁迫香石竹种子幼苗
