浙江省科技计划项目(2006C33018)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：董学君刘安定杨明峰郑专陈建军更多>>
- 相关机构：绍兴市人民医院绍兴文理学院温州医学院更多>>
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- siRNA干扰抑制乳腺癌细胞hTERT基因表达提高阿霉素化疗的敏感性被引量：2
- 2009年
- 目的应用小干扰RNA(siRNA)干扰乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞hTERT的表达,探讨hTERT-siRNA联合阿霉素对人乳腺癌细胞株的增殖和凋亡的影响,研究hTERT基因在化疗增敏中的作用。方法体外化学合成针对hTERT基因的小干扰RNA(siRNA)序列,在脂质体介导下转染MCF-7、MDA-MB-453细胞,实时定量PCR检测hTERTmRNA表达水平,western blot检测hTERT蛋白表达水平,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及流式细胞分析法分别测定hTERT-siRNA联合阿霉素后对细胞增殖及凋亡的影响。结果靶向hTERT的siRNA可以有效抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞株hTERT的表达;hTERTsiR-NA和阿霉素均可抑制MCF-7、MDA-MB-453细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡,当联合应用靶向hTERT的siRNA和阿霉素时,上述作用显著加强(P<0.05)。结论体外化学合成的hTERTsiRNA可以有效地抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞hTERT的表达,hTERT表达受抑制后,可增强阿霉素作用乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞的敏感性。
- 董学君刘安定郑海斌周国忠杨明峰郑专陈建军倪铁钧
- 关键词：小干扰RNAHTERT基因乳腺癌细胞阿霉素化疗敏感性
- 体外RNA干扰人乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶基因表达及促凋亡的研究被引量：1
- 2008年
- 我们以乳腺癌MDA-MB-453细胞株为模型，用小片段RNA（siRNA）特异性抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的表达，了解其促肿瘤细胞凋亡的效果。
- 郑专董学君刘安定杨明峰陈建军
- 关键词：人端粒酶逆转录酶人乳腺癌细胞基因表达RNA干扰促凋亡体外
- siRNA沉默hTERT基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的应用小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）抑制乳腺癌MCF-7细胞hTERT的表达，探讨其对乳腺癌细胞增殖和凋亡的效应。方法体外化学合成针对hTERT基因的siRNA序列，在脂质体介导下转染MCF-7细胞，实时定量PCR检测hTERTmRNA表达水平，Westernblot检测hTERT蛋白表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡状况，MTT法检测细胞增殖活性，平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比均可有效抑制hTERT的表达，hTERTsiRNA转染MCF-7细胞48h后，siRNAl-siRNA3组hTERTmRNA表达分别为（35．3±4．2）％、（30．7±2．8）％、（31．3±3．6）％，与阴性对照组（96．4±2．8％）相比，差异有统计学意义。MTT结果显示MCF-7细胞增殖能力显著降低，转染48h后，siRNAl～siRNA4细胞抑制率分别为（57．6±3．6）％、（61．3±4．3）％、（65．6±6．3）％和（3．1±4．5）％，细胞克隆形成能力下降，凋亡率明显增加。结论体外化学合成的hTERTsiRNA可以有效地抑制MCF-7细胞hTERT的表达，从而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。
- 刘安定董学君杨明峰郑专陈建军
- 关键词：小干扰RNAHTERT基因乳腺癌MCF-7细胞
- 体外siRNA抑制乳腺癌细胞株端粒逆转录酶基因的表达被引量：3
- 2008年
- 目的:筛选能高效抑制乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453端粒逆转录酶(hTERT)基因表达的RNA干扰靶点,为乳腺癌的基因治疗提供依据.方法:构建针对hTERT基因的三种siRNA(siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3),分别转导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453,同时以无同源性的siRNA-hTERT4作阴性对照,含GFP基因的载体作阳性对照.应用实时聚合酶链反应(real-timePCR)和WesternBlot技术检测siRNA处理前后hTERT基因表达变化;MTT法检测细胞生长率;流式细胞术分析基因沉默对细胞凋亡的影响.结果:与阴性对照组相比,siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3三个实验组siRNA转染细胞后,hTERT的mRNA表达量下调至21%～40%,蛋白表达下降至50%,而三个实验组间差异无统计学意义(P>0.05).转染48h后,MCF-7细胞抑制率分别为(57±4.3)%,(61±4.3)%,(65±6.0)%;MDA-MB-453细胞抑制率分别为(45±5.1)%,(45±4.1)%,(50±4.0)%.流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率有所增加,MCF-7细胞为(18.90±0.11)%,(27.30±0.18)%,(27.00±0.16)%;MDA-MB-453细胞为(12.25±0.17)%,(17.80±0.19)%,(20.60±0.21)%.结论:经siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2,siRNA-hTERT3处理均可明显抑制MCF-7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的增殖及hTERT基因的表达,能够明显促进细胞的凋亡.
- 杨明峰刘安定郑专陈建军董学君
- 关键词：乳腺肿瘤端粒酶逆转录酶RNA干扰
