广东省自然科学基金(06024444)
- 作品数：11 被引量：43H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C-反应蛋白致内皮炎症损伤的信号转导通路筛选被引量：5
- 2007年
- 目的探讨C-反应蛋白（CRP）作为急性期反应蛋白参与内皮系统炎症损伤过程涉及的信号通路及其意义。方法采用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行培养、鉴定，实验用第五代细胞，给予20mg／L的CRP处理24h，设立对照，提取RNA，进行信号转导通路特异性基因芯片检测。结果CRP处理组分别有13种基因表达增加、25种基因表达降低，其中炎症生长因子相关基因WISP2表达增加37．63倍，诱导凋亡关键信号通路p53相关基因表达增加30．50倍，而抑制凋亡相关信号通路Bcl-x和Bcl-2相关基因表达降低9．61％和49．95％。CRP处理后血管细胞黏附分子（VCAM）相关基因（VCAM-1）表达增加2．75倍，而血清细胞间黏附分子（ICAM）相关基因表达两组差异无统计学意义。结论CRP可能参与了内皮系统的炎症发生，其机制可能是通过诱导细胞凋亡及激活细胞黏附相关蛋白信号通路的表达实现的。
- 宋旭东陈爱华周立尧肖华傅强李志樑
- 关键词：C-反应蛋白内皮细胞炎症信号转导通路
- 人单核源性泡沫细胞疾病模型的建立
- 2008年
- 目的建立人单核源性泡沫细胞的疾病模型,为动脉粥样硬化(AS)的发生发展机制及其防治研究提供新途径。方法采用密度梯度离心法分离冠心病患者外周血单核细胞,以80nmol/L佛波酯(PMA)诱导48h使之转化为巨噬细胞,然后与80mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育48h,使之转化为泡沫细胞。结果经PMA诱导后,光镜下观察发现单核细胞已转化为形态典型的巨噬细胞。与ox-LDL共孵育48h后,油红O染色和透射电镜观察发现细胞内出现了大量的红染颗粒或脂质空泡。高效液相色谱检测发现细胞内胆固醇(TC)明显增加,其中胆固醇酯(CE)含量大于TC的60%,符合泡沫细胞的定义。结论从离体细胞培养方面探寻并建立了人单核源性泡沫细胞的疾病模型,该模型的病生特性与人类AS疾病接近,具有制备方法简易、细胞材料来源广等优点。
- 吴鹏刘映峰梁东辉陈允钦缪绯刘永源
- 关键词：单核细胞巨噬细胞泡沫细胞动脉粥样硬化
- 人外周血单核细胞源性泡沫细胞模型的建立被引量：2
- 2008年
- 目的建立人外周血单核细胞源性泡沫细胞模型,为研究动脉粥样硬化机制及其防治提供新途径。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白,以Cu2+诱导法将其氧化修饰成氧化低密度脂蛋白。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从冠心病患者外周血中分离出单核细胞,首先以50 nmol/L佛波酯刺激48 h使之转化为巨噬细胞,然后与80 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育24 h,使之转化为泡沫细胞。结果经50 nmol/L的佛波酯诱导48 h后,光镜下发现单核细胞已转化为典型的巨噬细胞。油红O染色发现,与80 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育24 h后培养细胞中出现了大量的红染颗粒。高效液相色谱法测定细胞内胆固醇提示细胞内总胆固醇明显增加,其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇,符合泡沫细胞的定义。结论直接采用冠心病患者外周血单核细胞成功地建立了泡沫细胞疾病模型,其病理生理学特性接近于体内状况,可为研究动脉粥样硬化机制和药物防治提供一种可靠的病理细胞模型。
- 吴鹏刘映峰梁东辉陈允钦缪绯张秀丽刘永源
- 关键词：人外周血单核细胞动脉粥样硬化泡沫细胞
- 直接法和公式法检测血清LDL-C含量的偏差和分析被引量：1
- 2008年
- 目的:观察和分析直接法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量与Friedewald公式换算值之间的关系。方法:采集1330例送检者的血脂水平,其血清三酰甘油均低于400mg.dL-1(4.52mmol·L-1)。测定LDL-C采用选择性水解法和根据Friedewald公式换算。结果:两种方法检测LDL-C值随非高密度脂蛋白胆固醇(non-HDL-C)水平的线性变化而波动,其偏差超过直接法检测值10%以上的占所有血样的40.76%。结论:直接法和Friedewald公式法检测血清LDL-C含量存在明显的偏差,可能与两种方法的系统误差有关。
- 张秀丽刘映峰梁东辉陈允钦吴鹏
- 关键词：血清低密度脂蛋白胆固醇FRIEDEWALD公式
- 脂蛋白和C反应蛋白对单核细胞趋化蛋白-1的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体趋化因子受体2(CCR-2)经动脉粥样硬化相关因素刺激后表达量的变化情况。方法密度梯度离心法从健康成人外周血中分离获得单个核细胞,体外培养48h。给予氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、C反应蛋白(CRP)及高密度脂蛋白(HDL)进行干预。干预后用实时荧光定量RT-PCR技术检测单核细胞MCP-1mRNA和CCR2mRNA的含量,ELISA法检测MCP-1蛋白含量。结果ox-LDL+CRP组、ox-LDL、CRP处理组MCP-1和CCR2mRNA表达水平和MCP-1蛋白含量明显高于对照组(P<0.05)。而经HDL处理的单核细胞表达MCP-1和CCR2mRNA水平下调,MCP-1蛋白含量低于对照组(P<0.05)。结论在体外培养的条件下,CRP和ox-LDL可以促进MCP-1和CCR2mRNA表达,继而导致MCP-1含量增加,增强炎症反应的范围和强度。HDL可以有效的抑制MCP-1的表达。
- 何非陈爱华宋旭东张琼
- 关键词：C反应蛋白脂蛋白炎症趋化因子动脉粥样硬化
- 阿托伐他汀抑制巨噬细胞泡沫化被引量：4
- 2008年
- 目的探讨阿托伐他汀对人外周血单核细胞源性巨噬细胞泡沫化的影响作用,为深入探讨阿托伐他汀的抗动脉粥样硬化(AS)机理提供实验依据。方法采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离单核细胞,以50 nmol/L 佛波酯(PMA)刺激48 h 使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组与实验组,以阿托伐他汀干预后分别测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)与蛋白的含量,观察阿托伐他汀对细胞内 TC 与蛋白比值影响的量效关系和时效关系。结果成功建立了人单核细胞源性泡沫细胞模型。经不同浓度阿托伐他汀作用后,细胞中 TC 与蛋白比值随阿托伐他汀浓度的增加而呈剂量依赖性降低(P<0.01),细胞泡沫化程度也随着药物浓度的升高而降低,且在药物浓度一定的情况下,细胞中 TC 与蛋白比值随阿托伐他汀处理时间的延长而呈时间依赖性降低(P<0.01)。结论实验结果提示阿托伐他汀通过降低细胞内 TC 的含量,一定程度上减轻巨噬细胞的泡沫化程度,从而发挥抗 AS 的作用。
- 吴鹏刘映峰陈允钦梁东辉张秀丽刘永源陈文忠
- 关键词：阿托伐他汀单核细胞泡沫细胞胆固醇外流
- 血清高密度脂蛋白的超速离心、氧化修饰及DiI标志被引量：6
- 2007年
- 目的:探讨一种方便快捷地从血浆中分离高密度脂蛋白(HDL)及氧化修饰、荧光标记的方法。方法:采用一次性密度梯度超速离心法,经超速离心分离后获得HDL(10℃,50000r/min,5h),并用Cu2+进行氧化修饰(37℃,50μmol/L,24h)及DiI进行荧光标记(37℃,15mg/mL,15h)。结果:5h内成功分离出脂蛋白,并氧化、标记了HDL;琼脂糖凝胶电泳、Bradford蛋白质定量及MDA测定证实其为纯度和浓度较高的HDL及氧化HDL(OX-HDL);标记的HDL(DiI-HDL)结合到体外培养的ECV-304细胞,表明DiI-HDL保持了正常脂蛋白的配体功能。结论:本方法缩短了超速离心时间并降低了标记成本,效果理想,可成功应用于脂蛋白受体的研究。
- 周立尧陈爱华宋旭东
- 关键词：超速离心法DII
- 高密度脂蛋白及其亚类与冠心病被引量：5
- 2009年
- 血清高密度脂蛋白(HDL)是迄今唯一具有抗动脉粥样硬化(AS)作用的心脏保护性因子,HDL的水平与冠心病的发病率呈明显的负相关。HDL通过多种机制发挥其抗AS的作用,其中最为重要的是参与胆固醇的逆向转运,将胆固醇从外周血管壁等组织细胞中转运至肝脏并被清除,从而发挥其调节血胆固醇的水平、阻止巨噬细胞转化为泡沫细胞,以及防止胆固醇在血管壁中沉积的作用。本文主要综述了HDL及其亚类与冠心病的关系及以其为冠心病治疗靶点的相关进展。
- 曹保卫吴鹏覃学美彭怡兰梁东辉
- 关键词：高密度脂蛋白动脉粥样硬化冠状动脉疾病胆固醇逆转运
- 提高人外周血单核细胞分离率的方法探讨被引量：18
- 2008年
- 目的:对常规的单核细胞Ficoll-Hypaque密度分离法和塑料吸附法进行改进,以提高单核细胞的分离率,减少分离时间和实验耗材。方法:以改进的Ficoll-Hypaque密度分离法和塑料吸附法为实验组,常规Ficoll-Hypaque密度分离法为对照组,评价与对比两种方法的单核细胞分层效果、单核细胞分离率、所需时间和耗材,以及细胞收集率等内容和指标。结果:抗凝血离心结束后,实验组离心管中内容物清晰地分为上、中、下三分层。在上、中层液体交界处可清晰地见到环状乳白色的单个核细胞层,分层效果较常规对照组理想。在对20mL/管抗凝全血进行单个核细胞分离的过程中,实验组平均耗时(1.18±0.08)h(n=5),对照组为(1.50±0.07)h(n=5),差异有显著性(P<0.01)。在2～4h内收集到的贴壁单核细胞在实验组为(2.12±0.13)×106/mL(n=5),对照组为(1.60±0.16)×106/mL(n=5),差异有显著性(P<0.01)。结论:改进的Ficoll-Hypaque密度分离法和塑料吸附法可明显提高单核细胞的分离率,减少了分离的时间和原料,同时也在一定程度上提高了单核细胞的收集率。该法对于需要从较大量的血液中分离出较多量的单核细胞时尤为适用,可为基础与临床细胞学研究提供一个较为有效的细胞获取途径。
- 吴鹏刘映峰梁东辉陈允钦
- 关键词：单核细胞白细胞分离术
- 体外氧化修饰高密度脂蛋白对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨体外氧化修饰后的高密度脂蛋白(ox-HDL)对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL),分别以Cu2+诱导法将其氧化修饰成ox-LDL及ox-HDL。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol/L佛波酯(PMA)刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组(ox-LDL组)、阳性对照组(HDL组)及实验组(ox-HDL组),对照组仅加入终浓度为80mg/L的ox-LDL;HDL组和ox-HDL组分别先加入终浓度均为50mg/L的HDL和ox-HDL共孵育1h后,再分别加入终浓度为80mg/L的ox-LDL,并于实验的0、6、12及24h测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)及蛋白(Pro)含量。观察不同时间点各组细胞内TC/Pro比值的变化,并比较ox-HDL与HDL对细胞内TC/Pro比值影响的时效关系。结果成功地由体外氧化修饰了LDL及HDL并制备出理想的泡沫细胞模型。在实验的6、12及24h,ox-HDL组细胞内TC/Pro比值均较HDL组细胞高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论体外氧化修饰后的HDL导致其胆固醇逆向转运(RCT)功能与效率的降低。
- 张秀丽刘映峰吴鹏陈允钦梁东辉缪绯
- 关键词：高密度脂蛋白氧化修饰泡沫细胞胆固醇
