农业部农业结构调整重大技术研究专项项目(04-10-03B)
- 作品数：11 被引量：52H指数：4
- 相关作者：景志忠陈国华窦永喜路彩霞李军成更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所广西农业职业技术学院兰州大学更多>>
- 发文基金：农业部农业结构调整重大技术研究专项项目国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪Toll样受体2基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2008年
- 本研究从猪肠系膜淋巴细胞中,克隆了猪Toll样受体2基因(pTLR2)。基因序列分析表明,克隆的pTLR2基因ORF为2358bp,编码785个氨基酸,含15.01%的亮氨酸,含有一段21个氨基酸的信号肽序列;与GenBank中登录的pTLR2序列(NM_213761)的同源性为99.2%;与牛、马、绵羊和人的同源性较高,与家鼠、中国仓鼠相比次之,而与鱼类的最低。蛋白分子结构预测表明,该分子由胞外区(588个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(174个氨基酸)组成,其胞外结构域由多个串联重复的LRR基序(XLXXLXLXX)组成,而胞内区含有与人白细胞介素1受体(IL-1R)高度同源的区域即TOLL/IL-1受体同源区(TIR),说明pTLR2分子具有病原分子模式识别和信号传导的作用,这为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。
- 房永祥景志忠陈国华窦永喜蒙学莲
- 关键词：克隆生物信息学
- 猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究被引量：2
- 2008年
- 重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠,免疫后不同时间迫杀,并取各种组织抽提基因组DNA:一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性;二是以PCR技术检测免疫动物现场环境样品,监测pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒中的猪IFN-γ基因、CMV启动子基因和抗性基因是否转移和扩散到环境细菌中。结果表明,免疫24h后在小鼠的各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫5d后仅有1只小鼠注射部位肌肉和血液中存在重组表达质粒,免疫15d后所有动物的各组织中无重组表达质粒存在;同时未发现pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒对动物和环境是安全的。
- 蒙学莲景志忠房永祥窦永喜陈国华贾怀杰段凤云才学鹏
- 关键词：重组表达质粒生物安全性
- 猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定被引量：1
- 2006年
- 为克隆和研究猪细胞因子及相关基因，应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结，分离单个核细胞，经LPS＋PHA联合刺激不同时间后，提取总RNA。将各组样品混合，分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链和第二链，与EcoRⅠ和HindⅢ接头连接。酶切和过柱分级分离后，与λSereen载体连接，经体外包装转染E．coli ER1647宿主菌，进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板，利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序。结果表明，成功构建了猪细胞因子cDNA文库，文库原始库容量为8×10^5，插入片段在300～2000bp，扩增得到特定的IL-2和IL-4基因，说明文库质量高、代表性强，为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。
- 夏小慧景志忠王勤窦永喜
- 关键词：细胞因子CDNA文库基因克隆
- 微卫星标记对高原蕨麻猪的遗传多样性研究被引量：19
- 2007年
- 目的探讨蕨麻猪的亲缘关系,遗传多样性,是否受外来血缘的影响。方法用9个微卫星DNA标记对5群猪进行等位基因频率、遗传距离、系统发生树构建和主成分等分析。结果微卫星标记在125个个体中,共检测出148个等位基因,蕨麻猪最少(55个)。蕨麻猪与兰州猪的遗传距离DA和标准遗传距离DS最大,分别为0.6781和1.3312,DA、DS分别用UPGMA和NJ构建了四种系统发生树,都是蕨麻猪聚为一类,其余4种猪聚为一类。主成分1(PC1)为62.174%,看作是蕨麻猪的代表,与其他4群猪差异较大。结论蕨麻猪与兰州、武威、临洮和青海四群猪相比,遗传距离大,主成分差异大,亲缘关系较远,蕨麻猪比较纯,没有受到这4群猪血缘的影响。
- 李军成景志忠路彩霞余四九
- 关键词：蕨麻猪微卫星DNA亲缘关系主成分
- 新型免疫佐剂的研究及其在人兽共患病疫苗中的应用被引量：2
- 2007年
- 随着许多人兽共患病的突发和流行,使得新疫苗的发展非常急迫。但由基因工程重组抗原或化学合成多肽组成的新一代疫苗存在免疫原性弱等缺陷,需要新型免疫佐剂来增强其作用,对适用于临床应用的新佐剂的研究与开发势在必行。目前研究较多的有黏膜佐剂、天然佐剂和纳米粒子佐剂等,因此分析阐述细胞因子、CpG DNA、脂质体、免疫刺激复合物和纳米粒子佐剂的特点、作用机制及在人兽共患病疫苗中的应用、佐剂应用的安全性和发展趋势很有必要。
- 蒙学莲景志忠
- 关键词：免疫佐剂疫苗人兽共患病
- 蕨麻猪生长激素基因的克隆及多态性分析被引量：2
- 2010年
- [目的]探索蕨麻猪生长激素基因与其生理学和生物学特性的关系。[方法]从蕨麻猪血液细胞中提取基因组DNA,通过PCR技术扩增出蕨麻猪生长激素基因序列,进行碱基组成多态性和突变分析。[结果]蕨麻猪生长激素(pGH)基因序列全长1671bp,有5个外显子和4个内含子。外显子1、2、3、4和5的碱基数依次是10、161、117、162和201bp,内含子1、2、3和4的碱基数分别是244、210、192和277bp。除第1外显子和第1内含子碱基剪切有明显的例外,其余全部符合GT-AG规则;蕨麻猪生长激素基因4种碱基含量依次为G>C>T>A。(G+C)含量和(A+T)含量分别在62%和37%以上。蕨麻猪编码区第4外显子在+1046位处A→G,为错义突变,其余均为同义突变。蕨麻猪生长激素基因编码的前体蛋白含216个氨基酸,成熟蛋白是由190个氨基酸残基组成的一个分泌性蛋白;二级结构中含有6个α螺旋结构,三级结构是结构松散的球状蛋白,含有6个α螺旋前区。[结论]为蕨麻猪生长激素基因序列的研究提供了参考依据和借鉴。
- 李军成路彩霞景志忠
- 关键词：蕨麻猪生长激素基因多态性
- 猪白介素家族重要基因的克隆、表达及其结构与功能预测分析被引量：11
- 2006年
- 【目的】克隆、表达和预测分析猪白介素家族重要成员的结构与功能。【方法】以猪白介素基因家族为对象,通过对猪PBMC刺激诱导,提取RNA,采用RT-PCR技术克隆IL-4、IL-6、IL-18等重要功能基因,并进行原核表达和结构与功能分析。【结果】成功地克隆和表达了IL-4、IL-6和IL-18基因,序列分析发现,克隆的基因与NCBI/GenBank上登载的参考序列的同源性分别为99.25%、99.21%和100%,与其它各物种的基因及其编码蛋白间具有较大的种属差异性;在大肠杆菌中表达的IL-4和IL-6重组蛋白具有较高的生物活性;结构预测表明,这些蛋白分子均含有较多的磷酸化修饰、糖基化修饰(除IL-6)、蛋白激酶以及信号传导结合位点,其中IL-4、IL-6蛋白分子的螺旋化程度较高,均在60%左右,水溶性较低,但这3种蛋白的立体空间结构均为致密的球状,说明该结构特征是其多种生物学功能发挥的基础。【结论】本研究成功地克隆、表达和分析了猪白介素家族的IL-4、IL-6和IL-18等重要分子的结构与功能,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。
- 景志忠窦永喜罗启慧陈国华蒙学莲郑亚东骆学农才学鹏
- 关键词：基因家族同源性分析
- 猪IL-2基因真核表达载体的构建及在酵母中的表达被引量：11
- 2006年
- 用真核表达引物从pGEM-IL-2重组质粒中扩增出猪IL-2基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到了猪pPIC9K-IL-2重组表达质粒。通过电激法将经SalⅠ酶切线性化的pPIC9K-IL-2质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,利用甲醇诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,表明在摇床水平及发酵罐中均表达出约17 ku大小的分泌性目的蛋白,采用Sephadex G-100分子筛层析对其表达产物进行纯化,纯化结果理想。
- 张巧颖景志忠栗震亚陈国华
- 关键词：白细胞介素-2基因毕赤酵母
- 微卫星标记对高原小型蕨麻猪遗传变异的研究被引量：5
- 2008年
- 用9个微卫星DNA标记对蕨麻猪的等位基因变异、多态信息含量(PIC)、群体杂合度(H)进行了分析.在5个群体中共检测出148个等位基因,蕨麻猪的等位基因数最少,为55个,平均观察杂合度(Ho)为0.836 6,平均期望杂合度(HE)为0.861 5,PIC平均值为0.824 8.结果显示:蕨麻猪群体的杂合度和多态信息含量与兰州、临洮、青海和武威4种猪相比低,但Ho>0.7,HE>0.8,PIC>0.7,仍然比较高,受野猪血缘影响的可能性很大.表明蕨麻猪的杂合程度比较高,遗传变异大,遗传多态性丰富,适应高寒恶劣环境的能力较强,比其它地方猪品种具有更丰富的基因资源.
- 李军成景志忠路彩霞余四九
- 关键词：蕨麻猪微卫星DNA杂合度多态信息含量遗传多态性
- 规模化猪场支原体肺炎药物防治效果比较研究
- 2006年
- 通过对天津、北京、河北猪支原体肺炎的防治调查研究,了解到目前我国养猪场在基础设施方面差,规模比较小且在预防猪支原体肺炎方面做的比较少的特点。提出了主要以预防为主,兼顾治疗的原则,以自繁自养、控制净化为预防措施。治疗时可用支原净、二氟沙星及卡那霉素加土霉素的治疗方案等,同时加强环境和猪场基础设施的建设在防制支原体肺炎方面尤为重要。
- 林青景志忠韩红星
- 关键词：支原体肺炎自繁自养支原净二氟沙星
