浙江省自然科学基金(Y307597)
- 作品数：8 被引量：58H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 番茄红素与牛血清白蛋白的相互作用被引量：3
- 2012年
- 采用荧光光谱法研究了番茄红素(Lycopene)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用关系。研究表明,番茄红素能使BSA在340nm(λem)处产生荧光猝灭,猝灭机理为静态猝灭。pH=7.4,温度为293K时,猝灭时表观结合常数KA为5.33×104L.mol-1,结合位点数n为0.6461,同时荧光猝灭最大速率常数Kq=2.76×1012L.mol-1.s-1。二者呈自发结合且主要作用力为氢键和范德华力,结合距离r与能量转移效率E分别为5.6nm和0.098,偏酸性或碱性的条件使番茄红素与BSA的结合常数增加。
- 白梅竹李红亮张林雅
- 关键词：番茄红素牛血清白蛋白荧光光谱法
- 中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析
- 【目的】研究中华蜜蜂Apis cerana cerana体外重组普通气味结合蛋白AcerASP2与不同气味信息的结合功能和模式。【方法】通过诱导条件的优化和纯化,在获得的重组AcerASP2蛋白基础上,研究竞争性荧光探针...
- 李红亮韩宝瑜商晗武
- 关键词：中华蜜蜂普通气味结合蛋白分子对接
- 文献传递
- 中华蜜蜂信息素结合蛋白ASP1 cDNA的克隆及时空表达被引量：11
- 2008年
- 信息素结合蛋白（pheromone binding proteins，PBPs）在昆虫信息素的识别、传递和处理过程中具有重要作用。本研究首次克隆r中华蜜蜂Apis cerana cerana的一个PBP基因Ac-ASP1（GenBank序列号为DQ449670），其预测蛋白具有典型的气味结合蛋白（OBPs）标志（即成熟肽含有6个保守的半胱氨酸）。利用real-timePCR技术对Ac-ASP1在中蜂不同组织和发育历期的时空表达谱进行了鉴定。绝对定量结果显示Ac-ASP1高丰度地表达于工蜂触角（2.07×10^6拷贝数/μg），而在其他组织（如头、胸、腹、翅及足）中呈低丰度表达（10^2拷贝数／μg）；相对定量结果显示Ac-ASP1在各发育历期如幼虫、蛹以及成虫发育早期（1-6日龄）均有大量表达，而在21日龄前后具有另外一个高丰度表达时期。这些结果可为明确Ac-ASP1在中蜂蜂王信息素信号识别传递过程中的作用提供参考。
- 李红亮高其康程家安
- 关键词：中华蜜蜂工蜂信息素结合蛋白克隆实时定量PCR
- 中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3的配基结合功能分析被引量：19
- 2011年
- 为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29μmol/L,结合位点数约等于1。在候选配基竞争1-NPN与AcerCSP3结合的实验中,5种配基均能在200μmol/L浓度下使1-NPN的相对荧光强度下降至50%以下,其中β-紫罗兰酮甚至能使1-NPN的相对荧光强度下降至10%左右,表明候选配基均与AcerCSP3有较强的结合能力,而3,4-二甲基苯甲醛与中蜂AcerCSP3的结合能力最强,KD达到18.77μmol/L。本研究所用化学配基均为植物花与叶片的挥发性的次生代谢产物,表明AcerCSP3可能作为中蜂化学感受系统的一部分,在其搜寻某些植物花粉蜜源时作为气味分子运载体发挥一定的作用。
- 李红亮张林雅倪翠侠商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白原核表达纯化
- 中华蜜蜂化学感受蛋白基因Acer-CSP1克隆与表达特征分析被引量：13
- 2010年
- 化学感受蛋白（chemosensory proteins,CSPs）是昆虫化学感受系统中重要的组成部分之一。本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白基因Acer-CSP1,其核苷酸全长351bp（GenBank登录号为FJ157352）,编码116个氨基酸残基,预测蛋白分子量为13.85kD,等电点为4.89,且含有4个保守的半胱氨酸残基,均符合昆虫CSPs的一般特征,且与意蜂CSP1基因具有99.1%的相似性,与其他昆虫也有45.3%~68.0%的相似性。利用2-ΔΔCt法及绝对定量法的real-time PCR技术对Acer-CSP1在中蜂不同器官表达特征进行了研究,得出的一致结论为Acer-CSP1显著水平地高丰度表达于中华蜜蜂触角,其次大量表达于头部。由于触角为中华蜜蜂最主要的嗅觉器官,而头部则具有发达的感觉神经系统和味觉系统,这也提示Acer-CSP1极有可能参与中华蜜蜂的嗅觉以及其他化学感受功能。
- 李红亮倪翠侠姚瑞高其康商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白克隆DNA序列分析表达谱
- 中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA的克隆及原核表达被引量：26
- 2008年
- 【目的】克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA。【方法】以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料,通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列,并在pET-30a(+)/BL21(DE3)系统中进行原核表达。【结果】克隆了命名为Acer-ASP2(GenBank登录号:DQ449667)的中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2基因,该序列全长429bp,编码142个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为15.7kD和4.36。预测蛋白具有昆虫气味结合蛋白典型的6个保守的半胱氨酸残基的特征,进一步分析表明Acer-ASP2极有可能属于GOBP家族。构建的原核表达载体pET/Acer-ASP2,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出一个分子量约为21kD的融合蛋白,融合蛋白大部分以包涵体的形式存在于菌体沉淀中(约59.7%),经洗涤和尿素梯度溶解对包涵体进行了纯化,经凝胶光密度扫描分析,约占最终产物的81.2%左右。【结论】克隆、分析和表达了一个新的编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2cDNA序列,为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础。
- 李红亮聂文敏高其康程家安
- 关键词：中华蜜蜂气味结合蛋白原核表达
- 荧光光谱法研究中华蜜蜂化学感受蛋白与特异配基的相互作用被引量：1
- 2011年
- 采用荧光光谱法研究了中华蜜蜂化学感受蛋白3(CSP3)与其特异性配基N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)的相互作用.结果表明,1-NPN能使CSP3在λem=328 nm处发生荧光猝灭,且猝灭机理为静态猝灭.另外,猝灭过程的ΔH0>0,ΔS0>0,表明二者间的主要作用力为疏水相互作用.依据F rster非辐射能量转移机制得到二者的结合距离为9.3 nm,能量转移效率E=0.054.采用同步荧光光谱和圆二色光谱考察了1-NPN对CSP3构象的影响,CSP3的荧光主要来源于色氨酸残基,且最大发射波长略有红移,表明结合位点微环境的极性增加,且CSP3的α-螺旋比例相应减少,从而使CSP3构象发生变化.
- 李红亮张林雅朱丽云倪翠侠商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白相互作用荧光光谱
- 中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析被引量：23
- 2013年
- 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)体外重组普通气味结合蛋白AcerASP2与不同气味信息的结合功能和模式。【方法】通过诱导条件的优化和纯化,在获得的重组AcerASP2蛋白基础上,研究竞争性荧光探针1-NPN及不同结构气味信息与蛋白的相互作用关系,并通过同源建模和分子对接解析蛋白与气味信息的结合模式和机理。【结果】通过条件摸索获得了可溶性表达的重组中蜂ASP2蛋白,荧光光谱分析1-NPN与AcerASP2的解离常数K1-NPN为7.38μmol.L-1,结合位点数n为1.0321。在7种气味信息中,4-烯丙基藜芦醚亲和力最强,其IC50和解离常数KD分别达到7.09和3.46μmol.L-1。分子对接显示AcerASP2具有1个呈狭长的口袋状的疏水性结合内腔,4-烯丙基藜芦醚绝大部分位于该预测疏水性内腔中,且与Lys74产生2个氢键。【结论】中华蜜蜂AcerASP2由于特殊的空间结构而具有较强的气味信息结合能力,且易通过与疏水内腔中的赖氨酸残基产生氢键而促进结合。
- 李红亮张林雅庄树林倪翠侠韩宝瑜商晗武
- 关键词：中华蜜蜂普通气味结合蛋白分子对接
