广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0836029)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：甘西梁万文黄婷余晓丽陈明更多>>
- 相关机构：广西水产研究所广西大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划广西壮族自治区科学研究与技术开发计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 尼罗罗非鱼免疫后外周血白细胞全长cDNA文库的构建及鉴定被引量：1
- 2011年
- 为大规模快速克隆罗非鱼细胞免疫功能基因,采用SMART技术,构建了尼罗罗非鱼链球菌疫苗免疫后外周血白细胞全长cDNA文库。提取免疫后第3、5和7天外周血白细胞总RNA,用PowerscripTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经SfiI酶切和CHROMASPIN-400TM柱分级分离,收集500 bp以上的片段重组于改造的pBluescript II SK载体并转化大肠杆菌DH5α,测定文库滴度、重组率及库容量。结果表明,构建的cDNA文库原始库容量1.021×106克隆,文库滴度1.078×106pfu/mL,重组率94.71%,插入片段大小0.75~3.0 kb,平均长度约为1.5 kb。随机对24个克隆测序所获得的18条Contigs进行BLASTx分析,发现有15条Contigs有相关同源信息,其中10条为全长cDNA,全长率为66.7%。说明所构建文库的各项指标均达到要求,可为筛选罗非鱼免疫功能相关基因和进一步研究基因的结构和功能奠定基础。
- 陈明李超王瑞李莉萍甘西余晓丽雷爱莹黄婷陈福艳梁万文
- 关键词：尼罗罗非鱼外周血白细胞全长CDNA文库SMART技术
- 罗非鱼颗粒蛋白前体cDNA序列与表达分析被引量：2
- 2010年
- 颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)在先天免疫反应调控及个体生长发育过程中均有重要作用。通过对罗非鱼外周血白细胞全长cDNA文库筛选得到的序列进行生物信息学分析,获得罗非鱼Pgrn全长cDNA序列(GenBank登录号为GQ241348)。该cDNA克隆总长843bp,包含一个完整的开放阅读框,编码206个氨基酸,其中推定信号肽20个氨基酸,两个GRN重复单位均56个氨基酸。研究采用实时定量PCR(Real-time RT-PCR)方法对感染海豚链球菌后奥尼罗非鱼、尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼和吉富罗非鱼4种组织(脑、肝脏、脾脏和头肾)Pgrn mRNA表达情况进行分析。结果显示,Pgrn mRNA在攻毒后4种罗非鱼4种组织中表达均有上调趋势,并且在脾中的表达量最高,提示PGRN在鱼类先天免疫反应调控中起重要作用。另外,奥尼罗非鱼在感染海豚链球菌后6h的脑和肝脏、6h和12h的脾脏和头肾中Pgrn mRNA表达均下调,然后表达升高,这种表达变化在其他三种鱼中不明显,这也许是奥尼罗非鱼抗病力较强的一个原因。研究为从分子水平探讨PGRN在罗非鱼先天免疫反应中的作用机制提供了数据,也为罗非鱼的抗病选育提供了参考分子标记。
- 王瑞陈明黄钧李超甘西余晓丽黄婷梁万文
- 关键词：罗非鱼实时定量PCR抗病育种基因表达分析
