安徽高校省级自然科学研究基金(KJ2012A152)
- 作品数：8 被引量：46H指数：3
- 相关作者：黄升海吴璇于莉胡涛王云更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽中医学院更多>>
- 发文基金：安徽高校省级自然科学研究基金安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RSV感染小胶质细胞活化Toll样受体3、7介导炎性反应的初步研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠小胶质细胞(BV2)后,Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体7(TLR7)的活化及其介导的炎性反应。方法①RSV体外感染BV2,利用免疫荧光技术分别在12、24和36 h检测细胞内RSV-F蛋白。②分别于感染4、8、12、16、24和36 h收集细胞,以未感染细胞作为正常组。用TRIzol提取细胞总RNA,通过半定量RT-PCR法检测TLR3、TLR7的mRNA转录水平的变化。③Western blot法分别检测感染4、8、12、16、24和36 h后的细胞内核转录因子(NF-κB)蛋白水平的变化。④ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化。结果①荧光显微镜下可以见到FITC标记RSV-F蛋白的绿色荧光随感染时间的延长而增强。②TLR3、TLR7在感染RSV后mRNA水平在观察的时间内表达均升高并呈时间依赖性关系。③各感染时间点NF-κB蛋白水平表达均升高并呈时间依赖性关系。④感染RSV后,细胞上清液中TNF-α含量均升高并呈时间依赖性关系。结论 RSV感染BV2后可以上调TLR3、TLR7,从而使下游细胞炎性因子TNF-α分泌升高,过度的炎性作用可能与神经系统症状的发生相关。
- 李振兴云云邱欢朱童娜吴璇黄升海
- 关键词：呼吸道合胞病毒TOLL样受体3TOLL样受体7小鼠小胶质细胞
- 蒲地蓝消炎口服液对呼吸道合胞病毒和腺病毒的体外抗病毒作用被引量：22
- 2015年
- 目的:研究蒲地蓝消炎口服液在体外对呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)的抗病毒作用。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和细胞病变(CPE)抑制法检测蒲地蓝消炎口服液对Hep-2细胞的毒性作用以及对RSV、ADV3感染细胞的保护作用,判断其抗病毒效果。结果:蒲地蓝消炎口服液对Hep-2细胞的半数中毒浓度(TC50)为776.97 mg/L;抑制RSV和ADV3的半数有效浓度(EC50)分别为28.08、28.10 mg/L;其治疗指数(TI)分别为27.67、27.65,安全系数均高于利巴韦林。与病毒对照组比较,蒲地蓝消炎口服液能明显降低RSV和ADV3感染细胞所致CPE的抑制率,且存在剂量依赖关系。结论:在体外,小剂量的蒲地蓝消炎口服液对RSV和ADV3感染的Hep-2细胞均有明显保护作用,且病毒CPE抑制率随着药物浓度的升高而增加,发挥更高的抗病毒作用。
- 吴璇于莉胡涛黄升海
- 关键词：蒲地蓝消炎口服液呼吸道合胞病毒腺病毒3型抗病毒作用
- 999感冒灵颗粒抗呼吸道合胞病毒的初步研究被引量：2
- 2018年
- 目的探究999感冒灵颗粒在体外抗呼吸道病毒的作用。方法采用细胞病变抑制法(CPE)及CCK-8法,观察在999感冒灵颗粒作用下,感染呼吸道合胞病毒(RSV)的HEp-2细胞的CPE变化情况以及吸光值,从而比较不同给药方式(直接灭活、抑制吸附、抑制增殖和阻断作用)及不同给药浓度下对RSV的抑制作用。测定细胞的半数中毒浓度(TC_(50))、药物半数抑制浓度(IC50)以及治疗指数(TI)。结果细胞的TC_(50)为25 mg/ml;直接灭活和抑制增殖均对RSV有明显作用(P<0.01);采用直接灭活方式时,其IC50为7.43 mg/ml,TI为3.36;采用抑制病毒增殖时,其IC50为4.42mg/ml,TI为5.66。CCK-8法结果显示,在阻断以及抑制吸附两种给药方式下,病毒抑制率与病毒对照组之间差异无统计学意义。结论 999感冒灵颗粒在直接灭活以及抑制病毒增殖两种给药方式下对RSV有一定的抑制作用。
- 孙涛程茂胜袁晓玲张晓燕黄升海
- 关键词：呼吸道合胞病毒感冒灵颗粒抗病毒作用
- TLR7在呼吸道合胞病毒感染A549细胞诱导Ⅰ型干扰素中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨Toll样受体7(TLR7)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染A549细胞诱导产生I型干扰素(IFN)抗病毒免疫反应中的作用。方法实验分正常对照组、RSV感染组、TLR7 siRNA沉默组,分别于感染的4、8、12、24 h后收集各组细胞以及培养上清液。TLR7 siRNA通过瞬时转染A549细胞,半定量RT-PCR法检测TLR7基因沉默效果;TRIzol试剂提取细胞总RNA,检测TLR7、干扰素调节因子7(IRF7)、IFN-α、IFN-β的mRNA表达量变化;通过Western blot法检测TLR7蛋白表达量;ELISA法检测感染不同时间点A549细胞培养上清液中IFNα/β含量的变化。结果 1转染24h后TLR7 siRNA-2有效抑制TLR7 mRNA表达;2 RSV感染A549细胞后,TLR7、IRF7、IFN-α/β的mRNA以及TLR7蛋白的表达量均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;沉默TLR7后,TLR7、IRF7、IFN-α/β的mRNA以及TLR7蛋白的表达量较感染组均有明显下降;3 RSV感染A549细胞后,明显上调细胞培养上清液中IFN-α/β的水平,TLR7siRNA沉默组IFN-α/β的表达水平较RSV感染组均下降,差异有统计学意义,且IFN-α的表达量下调更为显著。结论RSV感染A549细胞后,TLR7被活化能够诱导产生I型IFN,发挥抗病毒作用,且TLR7诱导产生的I型IFN以IFN-α为主。
- 何汉文王葱杜博易吴璇于莉汪旻旻黄升海
- 关键词：呼吸道合胞病毒A549细胞TOLL样受体7
- 呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化Toll样受体7介导的抗病毒作用研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化及其介导所产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用。方法 48只BALB/c鼠,随机分为正常对照组、RSV感染组、咪喹莫特干预组。以RSV活病毒滴鼻感染BALB/c鼠,诱导急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特处理,分别于感染后4、8、12和24 h不同时间点,用半定量RT-PCR法检测鼠肺TLR7、IFN-α/β、RSV融合蛋白(RSV F蛋白)的mRNA表达,HE染色观察肺的病理学改变。结果①RSV感染早期,TLR7、IFN-α/β、RSV F蛋白的mRNA表达均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;肺的炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度与RSV感染时间相关;②咪喹莫特干预组预先给予TLR7激动剂咪喹莫特处理后,再行相同RSV感染,TLR7、IFN-α/β的mRNA表达量进一步升高,但RSV F蛋白的mR-NA表达下降;肺的炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻。结论 RSV感染可活化上调BALB/c鼠肺组织中TLR7表达,其表达量与感染之间存在时间依赖关系;其介导产生的Ⅰ型IFN起着抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平,使肺部炎症减轻。
- 杨晓梅吕伟伟胡涛黄升海
- 关键词：呼吸道合胞病毒TOLLI型干扰素咪喹莫特
- 呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究被引量：14
- 2015年
- 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)合并肺炎克雷伯菌(Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数(LI)的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量的变化。结果与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重,LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧。结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等。
- 王云黄升海吴璇李振兴于莉汪旻旻
- 关键词：呼吸道合胞病毒肺炎克雷伯菌肺炎NF-ΚB
- 呼吸道合胞病毒空斑形成实验的条件优化被引量：3
- 2016年
- 采用空斑形成实验方法测定呼吸道合胞病毒（RSV）的滴度,加入覆盖层倒置培养27、30、34、40h后经固定染色、剔除覆盖层后,可见清晰透明空斑,边缘清晰、形态均为圆形或类圆形,空斑直径分别为1、1.5、3、5mm左右。加入覆盖层后培养病毒的时间可以影响RSV最终所形成的空斑大小,并且随着时间的延长空斑逐渐增大,在30～34h所形成的空斑大小最佳,易于计数。病毒的稀释度也会影响空斑最终形成的数量,且随着稀释度的增加,空斑数量逐渐减少。
- 于莉吴璇汪旻旻黄升海
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- NS2激活TLR7抑制RSV感染肺泡上皮细胞中IFN的表达被引量：2
- 2017年
- 目的探讨非结构蛋白NS2在呼吸道合胞病毒(RSV)感染人Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549)活化TLR7信号转导过程中的可能作用。方法以RSV感染体外培养的A549细胞,设立正常对照组、RSV感染组、RSV NS2小干扰RNA沉默组(NS2 siRNA+RSV组)及TLR7激动剂组(R848+RSV组)。各组分别于病毒感染后的4、12、24、48 h收集细胞和培养上清液。Western blot法检测各组不同时间点TRIF、TRAF6及p-IκB-α蛋白表达;ELISA法检测各组细胞培养上清液中I型干扰素α(IFN-α)、IFN-β含量的变化。结果正常对照组中TRIF、TRAF6、p-IκB-α蛋白的表达量较低,经RSV感染之后,随感染时间增加,表达量升高;在NS2siRNA+RSV组三者表达量较正常对照组上调,但相对于RSV感染组,表达下降,表明RSV NS2可以活化TRIF、TRAF6及p-IκB-α蛋白的表达。RSV感染组及NS2 siRNA+RSV组、IFN-α、IFN-β含量随感染时间增加逐渐升高,4 h开始升高,差异有统计学意义(P<0.01);R848+RSV组IFN-α和IFN-β呈时间依赖性增加,感染4 h升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NS2在病毒感染A549细胞过程中激活TLR7,抑制了IFN-α和IFN-β的表达。
- 汪旻旻孙涛袁晓玲黄升海
- 关键词：A549细胞NS2
