国家自然科学基金(30860039)
- 作品数：25 被引量：52H指数：4
- 相关作者：卢晟盛卢克焕杨小淦许惠艳陆阳清更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室西藏农牧学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西巴马小型猪Oct4基因克隆及其在成纤维细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 根据GenBank中公布的猪Oct4核苷酸序列设计合成1对引物,采用RT-PCR方法从巴马小型猪睾丸组织扩增Oct4基因编码全序列。然后将该基因重组于含有绿色荧光报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建成pEGFP-Oct4重组质粒,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明重组质粒构建成功。使用脂质体2000将pEGFP-Oct4转染巴马小型猪肾脏成纤维细胞,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,转染细胞株中可检测到Oct4的转录。结果表明,成功构建了真核表达载体pEGFP-Oct4,并可在巴马小型猪肾脏成纤维细胞中表达,为进一步研究Oct4基因生物学功能奠定了基础。
- 宁淑芳李青洋梁明明许惠艳杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪真核表达绿色荧光蛋白
- 人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择
- 2012年
- 本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的(1.1%∶12.1%,P<0.05),而融合率(83.7%∶79.4%,P>0.05)和卵裂率(55.8%∶58.2%,P>0.05)无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎(43.7%∶89.8%,P<0.05),但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著(85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P>0.05)。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。
- 刘红波吕培茹王献伟杨小淦秦小娥宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：水牛人神经母细胞瘤细胞异种核移植
- 食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究被引量：1
- 2011年
- 采用食蟹猴耳部成纤维细胞作为核供体利用电融合法构建猴-猪异种核移植胚胎,研究其核重编机制并寻找适宜的培养基,初步建立食蟹猴-猪异种核移植体系。结果显示:(1)重构胚胎激活后3 h,供体核的大小基本不发生变化,但在激活后6 h大部分形成膨大的类原核。(2)食蟹猴-猪异种核移植胚胎融合率为74.2%,有70.5%的重构胚胎发生卵裂,29%的卵裂胚胎发育到桑椹胚阶段。(3)在NCSU-23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中,重构胚突破4-细胞阻滞发育到8-细胞以上的比例分别为23.5%和17.0%,在NCSU-23培养基中的为19.9%,但是只有在NCSU23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中重构胚胎发育到囊胚阶段(1.4%vs1.1%),尽管差异不显著。本研究首次建立了食蟹猴-猪异种体细胞克隆体系。
- 吕培茹刘红波左二伟杨小淦宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：食蟹猴异种核移植培养基
- FSH+LH添加方式、半胱氨酸、EGF对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：4
- 2010年
- 为探讨IVM液中FSH+LH添加方式、半胱氨酸和表皮生长因子(EGF)不同浓度对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响,将在不同成熟体系中IVM44 h后的卵母细胞经化学激活后放入NCSU-23中培养,分别于第2、7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:①IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,其分裂率(83.76±9.95)%和囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于添加FSH+LH连续培养44 h、中间不换液的处理(P<0.05);②IVM液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸的囊胚发育率(28.13±10.9)%显著高于添加0、0.3、0.6 mmol/L半胱氨酸的处理,差异显著(P<0.05);③IVM液中添加10 ng/mL EGF的囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于其他浓度处理(P<0.05)。可见:在该研究条件下,IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,并添加1.2 mmol/L半胱氨酸、10 ng/mL EGF,有利于促进猪IVM卵母细胞早期孤雌发育。
- 许惠艳苏克同何若钢梁世忠卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞体外成熟半胱氨酸
- 5-Aza-dc和TSA对陆川猪体细胞核移植的影响
- 陆川猪是全国八大地方良种猪之一。肉质优味道好、母性好且繁殖力高、遗传性稳定,杂交优势明显。本研究选择陆川猪为研究对象,对地方优良品种的育种和保种研究和实际应用均具有特殊的意义。体细胞克隆效率低,普遍认为是由于移入受体的体...
- 胡林林秦小娥卢晟盛陆阳清卢克焕
- 文献传递
- 猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究被引量：5
- 2011年
- 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。
- 任子利赵彦玲杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 5-Aza-dc和TSA处理巴马小型猪体细胞对其表观遗传修饰和核移植效果的影响
- 【目的】探讨5-Aza-dc(5-氮-2-脱氧胞苷,DNA甲基化转移酶抑制剂)和TSA(Trichostatin A,去乙酰化酶抑制剂)对广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞表观遗传修饰及核移植胚胎早期发育的影响。【方法】分别用...
- 宁淑芳李青洋梁明明杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪5-AZA-DCTSA
- 文献传递
- 转红色荧光蛋白基因细胞非侵入式人工智能检测与预测体系的建立
- 本研究利用激光光镊拉曼光谱结合基于主成分分析的BP人工神经网络(feed-forward backpropagation network)对新生巴马小型猪肾脏转红色荧光蛋白成纤维细胞进行了光谱分析、模式识别和预测。本实验...
- 刘红波杨小淦吕培茹左二伟王献伟胡林林宁淑芳陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：转基因红色荧光蛋白主成分分析BP人工神经网络
- 文献传递
- 广西巴马小型猪供核细胞的传代培养和冷冻保存及肌肉成纤维细胞HDAC1基因的mRNA的表达被引量：1
- 2011年
- 本试验旨在建立猪颗粒细胞、胎儿成纤维细胞和新生巴马小型猪不同组织来源成纤维细胞的分离及传代培养技术体系和冷冻保存方法,并比较猪卵丘/颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDAC1基因的mRNA表达的差异,从分子水平上鉴定新生巴马小型猪肌肉成纤维作为供体细胞的可行性。运用组织块贴壁培养方法分离不同来源的组织细胞进行培养,并比较了常规冷冻保存和微量冷冻保存对细胞复苏率的影响,同时,运用实时定量PCR的方法检测猪卵丘/颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDAC1基因mRNA表达的动态变化。研究结果表明:(1)猪颗粒细胞单层细胞的生长需要5～6d;用组织块法获得猪胎儿成纤维细胞单层的生长时间为10～11d;用组织块法可以成功地对新生巴马小型猪的肌肉、肺、肾脏、心、睾丸组织的成纤维细胞进行分离和传代培养,肾和睾丸组织的成纤维细胞贴壁生长后,长满形成单层细胞需要12～13d,而肺、肌肉和心脏组织的则需要15～16d。(2)细胞的微量冷冻保存效果优于常规冷冻保存(P<0.05)。(3)猪卵丘/颗粒细胞与新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDACl mRNA的相对表达量为1.000比0.985,两者差异不显著(P>0.05)。新生广西巴马小型猪不同组织来源的成纤维细胞的分离及传代培养和微量冷冻法,丰富了这种猪体细胞的分离培养种类,为其体细胞核移植研究提供了丰富的供体细胞,并从表观遗传的角度分析,鉴定了新生巴马小型猪胎儿成纤维细胞与猪卵丘/颗粒细胞一样适合作供体,为核移植前的供体细胞鉴定提供了新的方法。
- 任子利赵彦玲杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪传代培养组蛋白乙酰化
- 成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：6
- 2010年
- 为探讨不同来源的促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响,将猪卵母细胞置于添加有不同来源促性腺激素(分别来自美国Sigma公司和中国科学院动物研究所)的成熟液中体外成熟40～44 h,成熟卵母细胞经化学孤雌激活后放入胚胎培养液中继续培养,分别于第48小时和第168小时统计卵裂率和囊胚发育率。结果发现,成熟液中同时添加0.5μg/mL中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)的卵裂率和囊胚发育率均略高于其他处理组,分别达到(65.68±24.13)%和(28.41±18.74)%;在囊胚细胞数方面,无论是添加中国科学院动物研究所还是Sigma公司生产的促性腺激素,均以添加浓度为0.5μg/mL时的囊胚细胞数最高。结果表明,两种来源促性腺激素对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育的影响无显著差异,说明中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)能有效促进猪卵母细胞体外成熟和进一步孤雌发育效果,且以在成熟液中同时添加0.5μg/mL FSH和0.5μg/mL LH为宜。
- 兰宗宝韩晓慧梁世忠何若钢卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞促性腺激素
