国家自然科学基金(81000261)
- 作品数：5 被引量：44H指数：4
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- 相关机构：华中科技大学甘孜藏族自治州人民医院四川大学更多>>
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- 人表面活性物质蛋白B基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建及活性检测
- 2013年
- 目的构建人表面活性物质蛋白-B（SP-B）基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒，并分析其在H441细胞中的转录活性。方法（1）以人基因组DNA为模板，PCR扩增SP-B启动子（-218／＋435bp）序列片段，并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上，筛选阳性克隆将目的片段进行测序。测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体pGL3-Basic上构建pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒，酶切及测序鉴定重组质粒；（2）将构建的pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒酶切改造，sP-B启动子克隆进pGL4．17载体构建pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒；经酶切及基因测序确认无误后，采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，检测双荧光素酶活性。结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定完全正确，转染H441细胞后，检测细胞裂解液萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性，两者比值间接反映启动子活性，pGL3-basic／pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒的firefly／reniUa比值（2．8±1．1、66．5±3．8）较空载体质粒pGL3-basic、pGIA．17（0．2±0．1，4．3±0．4）均明显升高（t=4．182，27．419，P=0．000）。pGL4．17重组质粒firefly／renilla比值明显高于pGL3-basic重组质粒，其差异有统计学意义（t=27．712，P=0．000）。结论成功构建具有sP-B基因转录活性的pGL3-basie／pGIA．17-SP-B-promoter重组质粒，oGL4．17萤组质粒荧光素酶活性高，为后续研究SP-B基因转录调控奠定了理论基础。
- 王席娟蔡保欢李文斌刘伟王靓常立文
- 关键词：肺表面活性剂遗传学遗传学质粒遗传学
- 胰岛素样生长因子-1对新生大鼠神经细胞氧化损伤保护作用的研究被引量：8
- 2014年
- 目的探讨氧化应激状态下，胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生大鼠神经细胞氧化损伤的保护作用。方法原代培养新生大鼠大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞，不同浓度H2O2（0-60μM）诱导氧化应激细胞模型，LDH法检测各种神经细胞损伤程度，MTT法检测各种神经细胞活力；不同浓度H2O2（0～80μM）诱导氧化应激神经元细胞模型，Western blot检测IGF-1（25ng／mL）施加前后神经元细胞内Akt的磷酸化水平。结果与未经H2O2处理组相比，不同浓度H2O2处理细胞24h后，大脑皮层神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞损伤程度均有升高、细胞活力均有降低；但神经元变化更为显著，与少突胶质细胞和星形胶质细胞相比，差异有统计学意义（均P〈0.01）；不同浓度的H2O2处理大脑皮层神经元5min后，相比于未经H2O2处理组，可见Akt磷酸化水平呈H2O2浓度依赖性降低（均P〈0.01），而在上述处理基础上加入25ng／mL IGF-1后，IGF-1能够逆转低浓度H2O2导致的神经元细胞Akt磷酸化，与未经H2O2处理组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但是对高浓度H2O2导致的Akt磷酸化作用无明显效果，其磷酸化水平均低于未经H2O2处理组（均P〈0.01）；经不同浓度的H2O2处理1h后，再加入25ng／mL的IGF-1，IGF-1处理前后Akt磷酸化水平均已恢复至未经H2O2处理时的水平（均P〉0.05）。结论大脑皮层神经元对H2O2诱导的氧化应激损伤较其他神经细胞敏感；IGF-1对皮层神经元氧化应激损伤具有保护作用。
- 刘伟李文斌陈治军容志惠常立文
- 关键词：氧化应激胰岛素样生长因子-1神经细胞新生大鼠
- 氧化应激抑制胰岛素样生长因子1对新生大鼠皮层神经元细胞的保护作用被引量：4
- 2012年
- 目的探讨氧化应激状态下，IGF-1对新生大鼠皮层神经元细胞生存和凋亡保护作用的影响及其意义。方法建立原代培养的新生大鼠皮层神经元细胞氧化应激模型，随机分为IGF-1干预组和对照组，检测细胞上清液LDH浓度，MTF法检测细胞的存活状态，Westernblot检测细胞内活性Caspase-3的表达。结果（1）可见皮层神经元细胞随着加入IGF-1浓度的增加，LDH值逐渐降低[（0．5065±0．0064）-（0．4350±0．0065），（P〈0．01）]，但当IGF-1浓度达到-定水平以后（〉25ng／m1），增加其浓度对LDH影响不明显[（0．420±0．012）-（0．418±0．0098），（P〉0．05）]；Westernblot结果显示，IGF-1处理神经元细胞后，激活的Caspase-3显著降低[（0．662±0．033）-（0．199±0．01），（P〈0．01）]。（2）在无或低浓度的H2O2剂量（0-40μmol／L）下，相对于对照组，IGF-1组LDH明显减低[（1．518±0．137）-（1．068±0．067），（P〈0．05）]、MTF明显升高[（0．773±0．062）-（1．196±0．057），（P〈0．05）]，激活的Caspase-3表达明显降低[（0．850±0．042）-（0．597±0．03），（P〈0．01）]；但当H202浓度上升至60μmol／L及以上，IGF-1组与对照组相比LDH、MTT和激活的Caspase-3表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。（3）当H2O2浓度达到60wM及以上时，无论加入何种浓度的IGF-1均不能使LDH较对照组降低[（2．376±0．04）-（2．442±0．046），（P〉0．05）]。结论氧化应激诱导新生大鼠皮层神经元细胞产生IGF-1抵抗，即使增加IGF．1的浓度无法恢复细胞对IGF-1的敏感性。
- 刘伟常立文李文斌陈志军Wei-huaLee
- 关键词：胰岛素样生长因子-1神经元氧化应激
- 高呼气末正压通气治疗高原肺水肿重症患儿的临床疗效观察被引量：5
- 2019年
- 目的探讨高呼气末正压(PEEP)通气治疗高原肺水肿(HAPE)重症患儿的临床疗效。方法选择2010年1月至2017年6月,于四川省甘孜藏族自治州人民医院儿童重症监护病房收治的42例接受同步间歇指令性通气(SIMV)联合PEEP通气治疗的HAPE重症患儿为研究对象。按照其入院顺序,将其随机分为低PEEP通气组(n=21)与高PEEP通气组(n=21),2组患儿接受有创机械通气治疗时,呼吸机初始PEEP分别设置为<5cmH2O(1cmH2O=0.0981kPa)、5~7cmH2O。2组患儿治疗前、后的心率,呼吸频率(RR),血氧饱和度(SpO2),动脉血气分析指标,机械通气治疗时间,患儿住院时间及急性病生理与长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分比较,采用成组t检验,上述指标组内比较,采用配对t检验。本研究遵循的程序符合四川省甘孜藏族自治州人民医院人体试验委员会制定的标准,经过该伦理委员会批准(批准文号:2010-K-12),并且与所有患儿监护人签署临床研究知情同意书。结果①2组患儿年龄、治疗前APACHEⅡ评分、HAPE发病时间等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②42例患儿接受SIMV联合PEEP通气治疗后,40例患儿存活,2例放弃治疗。③机械通气治疗2h后,高PEEP通气组患儿的心率、RR,均显著低于低PEEP通气组,而SpO2显著高于低PEEP通气组,差异均有统计学意义(t=4.062、P<0.001,t=4.392、P<0.001,t=-3.219、P=0.006)。低PEEP通气组患儿治疗2h后,心率、RR均显著低于治疗前,并且差异均有统计学意义(t=24.646、20.125,P<0.001)。高PEEP通气组患儿治疗2h后,心率、RR均显著低于治疗前,SpO2则显著高于治疗前,并且差异亦均有统计学意义(t=31.159、19.913、-8.022,P<0.001)。④机械通气治疗24h后,低PEEP通气组、高PEEP通气组患儿的氧合指数[动脉血氧分压(PaO2)/吸入氧气分数(FiO2)]、血清pH值及动脉血二氧化碳分压(PaCO2),均较组内治疗前明显改善,并且差异均有统计学意义(低PEEP通气组:t=
- 夏成刘勤王顺琴李德渊
- 关键词：肺水肿高原病正压呼吸
- 枸橼酸咖啡因和氨茶碱对极低出生体重早产儿临床预后及脑神经发育的影响被引量：27
- 2015年
- 目的:探讨枸橼酸咖啡因和氨茶碱对极低出生体重早产儿临床预后及脑神经发育的影响。方法:选择62例极低出生体重早产儿(包括在华中科技大附属同济医院新生儿科进修期间病例)为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各31例,两组均给予常规护理与治疗,观察组加用枸橼酸咖啡因治疗,对照组加用氨茶碱,比较治疗效果及预后、血浆β-内啡肽(β-EP)水平、神经发育情况。结果:观察组患儿平均用药时间、呼吸暂停消失时间、血浆β-EP水平明显低于对照组;智力发育指数(MDI)、运动发育指数(PDI)、Gesell评分明显高于对照组(P<0.05)。结论:枸橼酸咖啡因和氨茶碱均可改善极低出生体重早产儿临床预后,枸橼酸咖啡因对于早产儿脑神经发育有明显的促进作用。
- 查琳刘伟
- 关键词：氨茶碱极低出生体重早产儿神经发育
