山东省卫生厅基金(2007HW035)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- EB病毒融合基因重组BCG穿梭质粒的构建与鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建分泌性表达EB病毒融合基因Z2A的卡介苗(BCG)重组质粒。方法分别以BCG和EB病毒融合基因cDNA为模板,通过PCR扩增得到139 bp的BCG-Ag85B信号肽序列和2291 bp的Z2A基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠埃希菌-BCG穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS。再将EB病毒融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMVZ2A。结果构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261。结论重组质粒pMVZ2A可望在BCG中分泌性表达,该质粒的构建成功为改造BCG、发展新型抗EB病毒疫苗奠定了基础。
- 薛庆节陈廷朱伟
- 关键词：卡介苗基因重组
- EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的构建能分泌性表达EB病毒（Epstein—Barrvirus，EBV）融合基因Z2A的BCG重组质粒并导入BCG。方法分别以BCG和EBV融合基因eDNA为模板，通过PCR扩增得到139bp的BCG—Ag85B信号肽序列和2291bp的Z2A基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌一BCG穿梭表达载体pMV261重组，得到重组质粒pMVSo再将EBV融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中，得到重组质粒pMVZ2A，电转化导入BCG，采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析。结果构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及序列测定证实，克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261。重组质粒pMVZ2A电转化导入BCG后能在BCG中有效表达相应蛋白。结论构建的重组质粒pMVZ2A能在BCG中表达相应蛋白。这一结果为改造BCG及发展新型抗EBV和结核杆菌的双价疫苗奠定了基础。
- 薛庆节陈延
- 关键词：疱疹病毒4型卡介苗基因融合
- EB病毒融合基因重组BCG穿梭质粒的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 分别以卡介苗(BCG)和EB病毒融合基因cDNA为模板,通过PCR扩增得到139bp的BCG-Ag85B信号肽序列和2291bp的Z2A基因序列。将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMVS。再将EB病毒融合基因序列Z2A亚克隆至pMVS中,得到重组质粒pMVZ2A,电转化导入BCG。SDS-PAGE分析结果表明,构建的重组质粒pMVZ2A经双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和Z2A正确插入载体pMV261,电转化导入BCG,能够在BCG中分泌表达。
- 薛庆节陈廷朱伟
- 关键词：卡介苗基因重组
- EB病毒基因Z2A原核表达载体的构建与表达被引量：5
- 2011年
- 目的构建EB病毒基因LMP2A、BZLF1重组分泌性表达质粒Ag85B,然后将它成功转化成卡介苗。方法分别用PCR扩增Ag85B信号序列和LMP2A和BZLF1融合基因,将Ag85B信号序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261重组构建获得质粒pMVS。然后将LMP2A和BZLF1融合基因Z2A与质粒pMVS重组获得质粒pMVZ2A,将其电转化卡介苗,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对其结果进行分析。结果信号序列与LMP2A和BZLF1融合基因被正确插入分泌表达载体pMV261。重组质粒经限制性内切酶双酶切、PCR扩增、基因测序等鉴定。蛋白纯化后可得到一条带。结论 pMVZ2A在BCG中能够分泌表达,本研究为获得抗结核杆菌和EB病毒的双价疫苗奠定了基础。
- 薛庆节王晖李秀真吕厚东陈廷朱伟李士根
- 关键词：卡介苗基因融合基因载体
