国家高技术研究发展计划(2013AA102704)
- 作品数：25 被引量：79H指数：5
- 相关作者：张含国张素芳姜静李成浩张磊更多>>
- 相关机构：东北林业大学中国科学院上海生命科学研究院中国林业科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 用于植物基因研究的mCherry表达载体构建及定位表达被引量：1
- 2017年
- 荧光蛋白在生物学研究中具有广泛的应用和重要的作用,其中红色荧光蛋白mCherry因其颜色和良好的特性,对于植物基因研究具有重要的使用价值,本研究将mCherry基因构建到pBI121植物表达载体系统中,构建了pBI121MCS-mCherry载体。利用基因枪转化法转入洋葱表皮进行表达验证,显微镜观察结果显示整个洋葱细胞具有红色荧光,证明该载体能够在植物细胞中表达红色荧光蛋白。利用双酶切连接法将转录因子BpMYB4基因构建到该载体上,得到融合表达载体pBI121MCS-mCherry-BpMYB4,在洋葱表皮中表达,结果显示细胞核具有红色荧光,证明该载体能够准确表达融合蛋白,进行亚细胞定位。同时融合基因时不再需要中间载体,构建简便,引入的KpnⅠ酶切位点,增加了可选择性。因此该载体可用于植物基因表达定位及转基因植株筛选研究中,为今后的白桦基因组学研究提供了材料。
- 于颖刘佳欣周美琪赵磊飞王超
- 关键词：MCHERRY红色荧光蛋白植物表达载体构建细胞定位
- 紫雨桦花色素苷含量的时空变化及相关基因的表达特性分析被引量：9
- 2017年
- 以3年生紫雨桦无性系为试材,分别测定枝顶、中、下部叶片及不同发育阶段的花色素苷、叶绿素含量,同时采用qRT-PCR技术分析BpCHS与BpDFR的时空表达特性。结果表明:紫雨桦枝顶、中部及下部叶片的花色素苷及叶绿素含量差异显著,不同生长阶段2种色素的含量也达到显著水平;紫雨桦5—8月枝顶1~2叶片均为暗紫色或紫色,枝顶花色素苷含量在各生长阶段均显著高于中、下部叶片,枝顶、中部及下部叶片中的花色素苷与叶绿素含量时序变化呈现相反趋势。线性回归分析显示,2种色素的含量呈极显著线性负相关;对紫雨桦的3条BpCHS与4条BpDFR基因时空表达特性分析显示,在叶色呈现暗紫色或紫色的叶片中BpCHS2与BpCHS3基因表达量最高,在紫雨桦枝顶、中部及下部叶片颜色变化明显阶段,参试的4条BpDFR基因呈现显著的上调或下调,因此紫雨桦的叶色与BpCHS2、BpCHS3及BpDFR密切相关。
- 姜晶王芳路芳姜静
- 关键词：花色素苷叶绿素基因
- 杂种落叶松(兴10×日13)再生体系的建立及优化被引量：1
- 2016年
- 以杂种落叶松(兴10×日13)成熟合子胚为外植体,通过不同培养基与激素的组合进行实验,最终形成完整落叶松植株,根据试验结果建立并优化了杂种落叶松成熟合子胚诱导植株再生的体系。结果表明:BM培养基有利于杂种落叶松不定芽的诱导,诱导率达60.7%,且在BM+1.5 mg·L^(-1)TDZ条件下诱导率最高且为67.73%;BM培养基能促进不定芽增殖,增殖系数达4.48,且在BM+1.0 mg·L^(-1)TDZ条件下增殖系数最高且为5.23;不定芽在1/2BM+0.5 mg·L^(-1)TDZ伸长比率最高且为205.72%,同时,在1/2BM培养基中添加2 g·L^(-1)的活性炭也能促进伸长;当不定芽在BM+0.05 mg·L^(-1)6-BA+0.2 mg·L^(-1)NAA的条件下培养时,抽茎率最高,为73.96%;不定芽在1/2BM+0.5 mg·L^(-1)IBA+1.0 mg·L^(-1)NAA条件下诱导生根的生根率最高,为29.85%。
- 张莉张磊侯丹张素芳张含国
- 关键词：杂种落叶松成熟合子胚不定芽
- 转基因白桦杂种T_1代的生长发育及AP1基因的遗传分析被引量：4
- 2016年
- 本文以3株野生型白桦为母本、3株35S∷Bp AP1转基因白桦及1株野生型白桦为父本进行杂交,调查杂种子代的生长发育、开花结实特性,分析外源AP1基因在T1代白桦中的遗传稳定性及分离规律。结果表明：Bp AP1基因的插入对转基因植株的花粉活力略有影响,Bp AP1基因可遗传给T1代的部分个体,遗传比例在36%~58%之间,经χ2检验,Bp AP1基因的分离比符合孟德尔分离定律;遗传了Bp AP1基因的白桦子代与父本一样仍然呈现出提前开花结实、明显矮化的特点,其1年生和2年生的高生长仅为野生型白桦杂种子代的44.19%和18.92%;T1代白桦存在2种完全不同的表型,据此能够简便快捷地判断出杂种子代是否携带有Bp AP1基因。该研究证明了外源AP1基因可以通过有性生殖的方式稳定地遗传给子代,获得的转基因白桦杂种子代能够提早开花结实,因此35S∷Bp AP1转基因白桦可作为研究白桦性状遗传规律的亲本材料。
- 王朔黄海娇杨光姜静刘桂丰
- 关键词：生长发育白桦
- 不同抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响被引量：9
- 2014年
- 以紫雨桦无菌叶片为试材，研究头孢霉素、头孢曲松钠、羧苄青霉素和特美汀4种不同浓度的抑菌抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响，分析4种抑菌抗生素对农杆菌 EHA105（pCHS）的抑菌效果。结果表明，抗生素是头孢霉素、头孢曲松钠、特美汀比羧苄青霉素抑菌效果好，其中头孢霉素和头孢曲松钠的适宜浓度范围为200～400 mg／L、特美汀为400～800 mg／L。30～40 mg／L的卡那霉素、15～20 mg／L的G418或潮霉素还可用于紫雨桦为受体的遗传转化中筛选转化体。
- 王芳姜静
- 关键词：抗生素离体叶片愈伤组织
- miR396在落叶松体细胞胚胎中的功能研究被引量：1
- 2016年
- [目的]探讨miR396在落叶松体细胞胚胎发生中的功能。以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生根率低的问题提供新的视角,同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫。[方法]构建pre-miR396超表达载体,通过农杆菌介导侵染,将pre-miR396转入落叶松胚性细胞中,筛选稳定抗性细胞系。在DNA与RNA水平上,对抗性细胞系进行的鉴定、检测,同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异。[结果]在抗性细胞系基因组中,扩增出HTP与miR396的特异性片段,且无农杆菌Virg基因片段。RNA表达水平上,抗性系pre-miR396与miR396表达皆增加,而靶基因La GRFs的表达量下调。统计表明抗性系胚的发芽率、生根率、叶片数目畸形率分别为70.60%、0.60%、37%,而野生型分别为92.50%、10.55%、4%,抗性系胚的发芽率、生根率显著降低(Sig.=0.000),叶片数目畸形率显著增加(Sig.=0.000)。[结论]miR396在落叶松体细胞胚胎发生过程中,可能通过负调节靶基因La GRFs的表达或者通过La GRFs影响与它相互作用的基因,参与体胚子叶原基细胞代谢,从而影响了子叶与叶片的发育;通过负调节La GRFs或者其它与根部发育相关的靶基因,影响了根端分生区细胞的活动,参与调控根的发育。
- 肖霞张立峰齐力旺韩素英
- 关键词：落叶松体细胞胚胎转基因发芽率生根率
- 基于转录组学测序的长白落叶松材性表达基因被引量：4
- 2016年
- 基于边合成边测序(Sequencing By Synthesis,SBS)技术,使用Illumina Hi Seq2500高通量测序平台对长白落叶松c DNA文库进行测序。共获得非重复序列基因58 683条,总长度为55 283 938 bp。将得到的转录本使用BLAST软件将非重复序列基因序列与NR、Swiss-Prot、GO、COG、KEGG数据库比对,通过选择BLAST参数Evalue不大于10-5,最终获得29 350个有注释信息的基因序列,其中19 292个转录本注释GO编号,有9 112个转录本在COG数据库中被注释并分为25个功能分类,同时注释到120条KEGG代谢途径。在得到注释的转录本中搜索到木质素相关基因共68条,其中与木质素合成相关基因29条,与木质素分解代谢相关基因27条;找到了147条纤维素相关基因,其中与纤维素合成相关基因103条,与纤维素分解代谢相关基因44条。
- 赵佳丽张磊张素芳王艳红张含国
- 关键词：长白落叶松转录组高通量测序
- 毛果杨PtAREB1基因启动子的克隆及功能被引量：4
- 2016年
- 为了研究杨树ABF2同源基因的表达规律,从毛果杨基因组DNA中克隆出Pt AREB1基因上游一段1 800 bp序列。序列分析结果表明,该序列含有逆境胁迫响应元件TC-rich repeats、ABA应答元件ABRE和茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate,Me JA)应答元件TGACG-motif等胁迫相关元件。在序列分析的基础上,构建了Pt AREB1基因启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体,利用农杆菌介导的花粉管通道法获得转基因拟南芥。结果表明Pt AREB1启动子可以在干旱、ABA、盐、Me JA和SA胁迫下,驱动GUS基因在转基因拟南芥的根、茎和叶中表达。说明Pt AREB1基因可能与干旱、高盐等胁迫应答紧密相关。
- 王含魏明李成浩
- 关键词：启动子拟南芥
- 长白落叶松愈伤组织及不定芽的诱导
- 2019年
- 以长白落叶松成熟合子胚为研究对象,从外植体消毒方式及愈伤组织与不定芽诱导的适宜培养基、激素组合和配比的选取等方面着手,进行长白落叶松愈伤组织及不定芽诱导的研究。结果表明:先用4%NaClO消毒去皮种子15 min后,再用0.5%NaClO消毒胚2 min为长白落叶松成熟合子胚的最佳消毒方法;BM为愈伤组织诱导的最适培养基;当BM+2.0 mg·L^(-1) TDZ时,愈伤组织诱导率最高,为89%;BM+1.5 mg·L^(-1) TDZ时,不定芽诱导率最高,为80.0%。
- 张莉
- 关键词：长白落叶松成熟合子胚愈伤组织不定芽
- PtrDREB28转录因子的克隆及抗逆性被引量：1
- 2018年
- DREB/CBF转录因子响应植物干旱、高盐和低温等非生物胁迫应答是通过特异结合DRE/CRT顺式作用元件。利用RT-PCR技术从毛果杨克隆PtrDREB28转录因子基因,用基因枪法对其进行亚细胞定位分析,结果表明其定位在细胞核中;利用农杆菌介导法对野生型大青杨进行遗传转化,并对转基因株系进行抗逆性分析,结果显示经高盐胁迫处理的转基因株系的耐受性明显高于野生型植株;通过测定和比较经盐胁迫处理后转基因株系和野生型植株的丙二醛质量摩尔浓度和相对电导率,发现转基因株系的丙二醛质量摩尔浓度和相对电导率均显著低于野生型植株,表明PtrDREB28基因的过表达可以显著提高杨树耐盐性,由此推测PtrDREB28转录因子可能参与杨树逆境胁迫应答过程。
- 刘海妹陈韵琳李成浩
- 关键词：转录因子转基因非生物胁迫
