中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBB120503)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：张爱联陈丽萍杨穗珊张泽华崔艳艳更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学中山大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶被引量：2
- 2011年
- 目的:用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶。方法:用PCR从枯草芽孢杆菌基因组中扩增漆酶基因lac2。用NotⅠ和EcoRⅠ双酶切将lac2基因重组于表达载体PGAP9K。通过电转法将其转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达Lac2酶的重组子作为工程菌Gs115(pGAP9k-lac2)。用甘油作为碳源在50L生物反应器中表达重组漆酶Lac2。用ABTS法测定发酵液中的漆酶活力。结果:在发酵30h时,其Lac2酶的表达达峰值,其活性为136.67U/L。其峰值的Lac2酶的表达量为50mg/L。表达产物具有分解ABTs的活性。结论:成功克隆了漆酶基因lac2,并首次实现用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶,为用P.Pastoris规模化生产漆酶奠定了基础。
- 张泽华杨穗珊张爱联
- 关键词：漆酶毕赤酵母酶活力
- 用P.pastoris表达L-阿拉伯糖异构酶及其酶活性分析
- 2013年
- 目的:用毕赤酵母表达L-阿拉伯糖异构酶。方法:用PCR法扩增大肠杆菌的L-阿拉伯糖异构酶基因,构建含L-阿拉伯糖异构酶基因的毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K-ai。通过电转法将pPIC9K-ai转化毕赤酵母GS115基因组。先筛选出高G418抗性的克隆,然后再从高拷贝的克隆中筛选出高表达重组L-阿拉伯糖异构酶的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-ai)。结果:在甲醇诱导下,摇瓶发酵GS115(pPIC9K-ai)3d,分泌表达L-阿拉伯糖异构酶32 mg/L。结论:毕赤酵母表达的L-阿拉伯糖异构酶具有转化D-半乳糖为D-塔格糖的生物活性。每升GS115(pPIC9K-ai)发酵液能转化D-半乳糖生成30 mgD-塔格糖。
- 陈丽萍崔艳艳张爱联
- 关键词：L-阿拉伯糖异构酶毕赤酵母酶活性D-塔格糖
- 用毕赤酵母的GAP启动子调控表达L-阿拉伯糖异构酶被引量：2
- 2014年
- 应用PCR从大肠杆菌基因组中扩增L-阿拉伯糖异构酶基因,用EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体,获得重组表达载体pGAP9K-L-ai。通过电转法将pGAP9K—L-ai转化毕赤酵母GS115,筛选高G418抗性和高表达L-阿拉伯糖异构酶的重组工程菌。用葡萄糖作为碳源在摇瓶中发酵48 h,表达重组L-ai 53 mg/L。用毕赤酵母的GAP启动子调控表达的重组L-ai具有异构D-半乳糖生成D-塔格糖的生物学活性。
- 符仙陈丽萍张爱联崔艳艳
- 关键词：L-阿拉伯糖异构酶毕赤酵母基因表达生物活性
- 工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究
- 2013年
- 用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%～30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。
- 沈锦城张泽华杨穗珊张添元罗进贤张爱联
- 关键词：漆酶PASTORIS高密度发酵
