公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

人类nm23-H1基因重组腺病毒的构建及鉴定: 2006年; 目的构建人肿瘤转移抑制基因nm23-H1的重组腺病毒载体。方法通过PCR方法以pcDNA3．1-nm23-H1为模板扩增出编码152个氨基酸的nm23-H1基因,并连接入穿梭质粒 pShuttle-CMV。将含有目的基因的重组穿梭质粒pShuttleCMV-nm23-H1经Pme I线性化后转化入 AdEasier-1感受态细胞,用含硫酸卡那霉素的LB培养基筛选重组子,并用PCR及酶切方法鉴定。鉴定正确的pAd-nm23-H1质粒经Pac I线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-nm23- H1,并进行PCR鉴定及病毒滴度测定。结果 PCR、酶切鉴定及测序结果证实pShuttleCMV-nm23- H1及pAd-nm23-H1质粒正确构建,收获病毒后的PCR鉴定及DNA测序结果证明Adeno-nm23- H1包被成功且无野生型腺病毒产生。重组腺病毒Adeno-nm23-H1滴度为4．3×109／ml。结论成功构建了重组腺病毒载体Adeno-nm23-H1,为进一步研究nm23-H1抑制肿瘤转移分子机制及基因治疗奠定了基础。; 孟薇王一飞胡红梅熊盛钱垂文张美英

超声波法提取裙带菜中褐藻多糖硫酸酯的工艺研究被引量：22: 2006年; 利用超声波法从裙带菜(Undaria pinnatifida)中提取褐藻多糖硫酸酯(FSP),以多糖提取率为指标,通过单因素和正交优化实验确立了提取FSP的最佳工艺条件,并与传统热水提取法进行了比较。结果表明,100倍加水量、在1 000 W功率下超声处理20 min能得到最大的多糖提取率。采用优化工艺,FSP得率(16.87%)、纯度(74.19%)和硫酸基含量(10.22%)比传统水提法分别提高了23.59%、30.92%和13.94%,色素和蛋白等杂质的析出减少,是一种良好的提取多糖方法。; 谭洁怡王一飞钱垂文; 关键词：超声提取褐藻多糖硫酸酯裙带菜正交实验

TAT-NDPK-A蛋白的构建表达及穿膜初步研究被引量：2: 2007年; 目的构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞。方法人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上,经IPTG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鉴定分析重组蛋白的抗原性,将TAT-NDPK-A蛋白加入到A549细胞中,荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内。结果TAT序列与NDPK-A正确融合并插入pET28(a)载体上,经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培养的A549细胞中加入重组蛋白4 h后在细胞内检测到穿膜的蛋白。结论构建表达TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内,为进一步研究基因的功能奠定了基础。; 刘秋英王一飞熊盛张美英钱垂文何旭君; 关键词：TAT 融合蛋白

nm23基因抑制肿瘤转移机制研究进展被引量：6: 2006年; 肿瘤转移抑制基因nm23是一个多功能基因,参与了包括细胞运动与黏附、生长与分化以及细胞周期调控在内的多个生理过程。nm23基因表达情况的变化与多种肿瘤的转移及预后相关。现综述nm23与肿瘤的临床病理和转移抑制功能的分子机制研究进展。; 孟薇王一飞; 关键词：肿瘤转移

nm23-H1基因实时荧光定量PCR标准质粒的构建: 2007年; 目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品。方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coliDH5α,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析。结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性。梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(C t)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系。结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品。; 张传海刘秋英金琳刘格郭朝万张美英王一飞; 关键词：实时荧光定量PCR 重组质粒标准品

全选清除导出

共1页<1>

广东省科技计划工业攻关项目(2005B50301017)