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广东省科技计划工业攻关项目(2005B50301016): 作品数：21 被引量：40H指数：4; 相关作者：李扬秋杨力建陈少华周羽竝胡刚更多>>; 相关机构：暨南大学更多>>; 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国务院侨办重点学科基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响被引量：1: 2009年; 目的：通过显微形态观察和功能检测分析超抗原（SEA）对JurkatT淋巴细胞的影响。方法：应用CCK-8法，原子力显微镜（AFM）体外检测JurkatT淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变。结果：与对照组比较，不同浓度的SEA随着作用时间的增加，细胞膜超微结构与R且值明显发生改变。JurkatT淋巴细胞经过质量浓度为0．1—100mg／LSEA，作用48h期间，JurkatT细胞的表面超微结构（平均粗糙度，Ra）和增殖活性（A值）变化非常明显。其中，质量浓度10mg／LSEA作用24h，JurkatT淋巴细胞表面结构变化最明显，而细胞增殖活性在48h达最强。结论：SEA作为超抗原作用于JurkatT淋巴细胞后，JurkatT淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变，较后者更灵敏。; 郜世隽林晨龚超群杨力建李扬秋蔡继业田红霞高永鹏; 关键词：JURKAT 超抗原原子力显微镜 CCK-8 增殖活性

PML-RARα系列重组质粒在BALB／c小鼠体内表达分析被引量：1: 2008年; 目的检测PML-RARα融合基因疫苗在小鼠体内的转录和表达。方法用成功构建的重组质粒(PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠,于第0周、2周、4周在双侧股四头肌各注射1次,分离注射部位肌肉,用RT-PCR检测目的基因在小鼠骨骼肌中的转录;应用免疫组织化学染色法检测重组质粒蛋白表达。结果小鼠注射部位肌肉中检测到PML-RARα及hIL-2基因的转录,并可检测到hIL-2蛋白的表达。结论所构建的PML-RARα系列重组质粒可以在小鼠体内有效地表达基因产物,具有DNA疫苗的基本特性。; 岑东芝周羽竝胡刚杨力建陈少华李扬秋; 关键词：PML-RARΑ HIL-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗诱导BALB／c小鼠的细胞和体液免疫应答被引量：1: 2008年; 目的分析PML-RARα融合基因疫苗诱导小鼠特异体液和细胞免疫应答情况。方法用成功构建的重组质粒(pIRES-PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠后,分别利用ELISA法检测小鼠血清中INF-γ生成情况;LDH释放法检测小鼠脾细胞特异性CTL细胞针对APL细胞株NB4的杀伤率;用间接免疫荧光法检测血清中抗PML-RARα抗体。结果免疫后第7周时,小鼠血清中INF-γ含量、抗PML-RARα抗体及脾脏CTL细胞针对NB4的杀伤率均高于对照组。结论所构建的pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒可诱导小鼠产生了特异性体液和细胞免疫应答。; 杨力建岑东芝周羽竝胡刚陈少华李扬秋; 关键词：PML-RARΑ HIL-2 DNA疫苗细胞毒活性

PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫BALB／c小鼠后胸腺初始T细胞水平变化被引量：1: 2008年; 目的了解PML-RARα-hIL-2基因疫苗免疫小鼠后胸腺初始(na(?)ve)T细胞变化情况。方法利用实时定量PCR检测小鼠胸腺组织DNA中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的水平,从而评价小鼠胸腺中na(?)ve T细胞含量。结果利用PML- RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫小鼠后胸腺中所含的TRECs拷贝数明显高于单个基因疫苗PML-RARα或hIL-2组及对照组。结论所构建的PML-RARα-hIL-2双表达质粒可诱导小鼠胸腺产生na(?)ve T细胞数量增加,可能与产生更强的细胞免疫应答有关。; 周羽竝岑东芝杨力建陈少华胡刚李扬秋; 关键词：PML-RARΑ HIL-2 TRECS

PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组载体的构建和鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据。方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465bp的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag后,经酶切和序列分析鉴定重组质粒的构建情况。结果经酶切鉴定和序列测定表明,PML-RARα目的基因已正确插入真核表达载体中,构成了目的重组载体。结论成功构建了PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组真核表达质粒,可进一步用于PML-RARα基因疫苗的实验研究。; 汤冀李扬秋周羽竝杨力建陈少华胡刚罗更新; 关键词：克隆急性早幼粒细胞白血病

PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导CTL细胞杀伤活性分析被引量：5: 2005年; 目的了解PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导体外诱导增殖的T细胞的特异性细胞毒作用.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,经丝裂霉素C处理的NB4细胞或PML-RARα多肽(LSSCITQGKAI-ETQSSSSEE)作为刺激原体外诱导脐血单个核细胞增殖.利用LDH方法检测诱导后T细胞的细胞毒性.结果PML-RARα多肽诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:49.65±6.7%(p<0.01)和73.13±8.42%(p<0.01),NB4细胞诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:53.33±8.82%(p<0.01)和74.46±9.57%(p<0.01),而无诱导组的第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:15.93±9.25%和38.19±10.54%,前两组T细胞对NB4细胞的杀伤作用均明显高于对照组.结论PML-RARα多肽和NB4细胞体外可诱导出特异性T细胞,他们对表达PML-RARα的NB4细胞具有选择性杀伤作用.; 杨力建李扬秋陈少华汤冀; 关键词：NB4细胞细胞毒活性

PML-RARα融合基因及其诱导特异性免疫应答被引量：2: 2005年; PML-RARα融合基因通过其转录抑制作用而诱发APL已基本得到认可,但其引发APL的机制是错综复杂的,在PML-RARα融合基因的致病过程中,必须有其他因素的共同参与才能导致APL.同时PML-RARα融合蛋白上存在着抗原性,PML-RARα多肽可诱导特异性免疫应答,为免疫治疗的研究提供了可能性.; 汤冀李扬秋; 关键词：PML-RARΑ 急性早幼粒细胞白血病基因疫苗克隆性

SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用被引量：1: 2008年; 目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。; 高珂林晨白雪陈少华杨力建陈思B.N.Selvakumar李扬秋; 关键词：实时定量PCR 金黄色葡萄球菌肠毒素A T细胞受体

APL患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和增殖特点被引量：7: 2007年; 目的：了解急性早幼粒细胞白血病（APL）患者外周血TCRVα亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR扩增9例APL患者和10例正常人外周血单个核细胞中29个TCRVα亚家族基因的互补决定区3（CDR3），了解TCRV理亚家族T细胞的分布；阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度，从而了解其克隆性。结果：9例患者外周血T细胞所能检测到的Vα亚家族T细胞分别为1～9个亚家族，以Vet3和Vα19出现频率较高；克隆性增殖T细胞可在8例患者中检测到，以Vα3、Vα26和Vα27出现克隆性T细胞频率较高（3／8）。正常人外周血T细胞中表达绝大多数Vα亚家族，呈多克隆性增殖特点。结论：APL患者外周血Vα亚家族T细胞存在明显的倾斜性分布和克隆性增殖特点，后者可能是对APL细胞抗原的反应性增殖，是否具有特异性杀伤作用，有待进一步检测。; 岑东芝李扬秋陈少华杨力建郁志; 关键词：急性早幼粒细胞白血病 T细胞受体基因克隆性

超抗原SEA增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CTL杀伤活性的机制被引量：6: 2008年; 目的探讨超抗原SEA体外增强PML-RARα多肽诱导特异性CTL杀伤活性的机制。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养,利用CCK-8比色法检测诱导后T细胞对NB4和K562细胞株杀伤活性,同时利用流式细胞术测定诱导T细胞表面CD4与CD8表达情况。结果诱导后第20天,SEA能明显增强PML-RARα多肽特异性杀伤NB4细胞株的作用。诱导后第5、10、20天动态检测表明,多肽及SEA联合多肽组CD4+/CD8+比值逐渐降低,其中SEA联合PML-RARα多肽诱导组降低最显著。结论超抗原SEA能明显增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CD8+T细胞的增殖与特异性的杀伤作用。; 林晨白雪高珂杨力建陈少华李扬秋; 关键词：超抗原 NB4细胞 T细胞

广东省科技计划工业攻关项目(2005B50301016)

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