国家高技术研究发展计划(2007AA021601)
- 作品数：10 被引量：39H指数：4
- 相关作者：饶春明王军志陶磊王兰高凯更多>>
- 相关机构：中国药品生物制品检定所中国食品药品检定研究院中国药科大学更多>>
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- 重组嵌合抗CD20 IgG1型单克隆抗体的结构验证被引量：13
- 2010年
- 本文选择一种重组嵌合抗CD20 IgG1型单抗,应用液质联用仪及N-末端测序仪对其进行结构验证。对该单抗进行还原、烷基化、酶解等处理后,对其氨基酸序列、二硫键配对方式、糖链类型及糖基化位点进行分析测定。结果显示,该单抗轻、重链氨基酸序列与理论一致。通过液质肽图的解析,对单抗10条二硫键的配对方式进行了验证;通过比较单抗重链切糖前、后的相对分子质量,预测单抗所含糖链类型为岩藻糖化的双触角复杂型N-糖,糖基化位点位于重链的Asn301上。本方法可为该类重组单抗制品的质量控制及其参考品的结构确证提供参考。
- 陶磊饶春明高凯史新昌赵阳王军志
- 关键词：高效液相色谱-质谱联用
- 错位双链聚核苷酸注射液的质控方法研究
- 2011年
- 目的:研究建立错位双链聚核苷酸(polyI:C12U)注射液的质控方法。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定碱基比例;采用紫外吸收光谱法测定样品的增色效应、最大吸收波长、OD250/OD260和OD280/OD260;采用琼脂糖电泳法测定相对分子质量范围;其余项目按中国药典三部进行测定。结果:建立了该产品的质量检测方法,测得样品的碱基比例C/U为15.8,I/C为1.11;增色效应为63.5%,最大吸收波长为263 nm,OD250/OD260为0.98,OD280/OD260为0.60;相对分子质量分布在100～1000bp范围内。其余各项指标均符合规定。结论:建立的检验方法和质量标准为有效地控制错位双链聚核苷酸注射液的质量奠定良好基础。
- 李永红饶春明王兰范文红毕华王军志
- 关键词：紫外吸收光谱
- 人源化抗表皮生长因子受体抗体质控方法和质量标准研究
- 目的建立人源化抗表皮生长因子受体抗体的质控方法。方法应用体外细胞生长抑制实验测定该抗体的生物学活性;电喷雾（ESI）质谱法与还原SDS-PAGE法测定其准确分子量;去封闭后用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列;SD...
- 陶磊饶春明王兰韩春梅李响高凯王军志
- 关键词：表皮生长因子受体人源化抗体
- 文献传递
- LC-MS／MS法对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定被引量：2
- 2012年
- 运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子阱两种串联质谱测定各个肽段的b,y碎片离子,分析测定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。通过LC-ESI-Q-TOF完成了融合蛋白FP3的76%氨基酸序列测定,通过LC-ESI-Trap完成余下24%氨基酸序列测定。液质联用、串联质谱法测定蛋白质氨基酸序列快速、灵敏、准确,是对重组蛋白结构分析和确证的重要手段。
- 李响高向东陶磊裴德宁郭莹饶春明王军志
- 关键词：液质联用融合蛋白氨基酸序列
- 糖链切除对IgG1型单抗结构及功能的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:分析IgG1型单抗中糖链切除对其结构与功能的影响。方法:分别测定糖链切除前后该抗体的圆二色谱、抗原结合能力以及体外补体依赖的细胞毒(CDC)活性,分析糖链切除对该单抗结构与功能的影响。结果:糖链切除后抗体的圆二色谱发生改变,抗原结合能力下降,体外CDC活性基本消失。结论:糖链是维持该IgG1型单抗正常的结构和功能的重要组成部分。
- 陶磊饶春明高凯史新昌赵阳王军志
- 关键词：生物技术药物糖链圆二色谱细胞毒性
- 重组人粒细胞集落刺激因子的氨基酸组成分析被引量：3
- 2008年
- 目的分析重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的氨基酸组成。方法应用氨基酸分析仪,采用离子交换色谱茚三酮柱后衍生法对rhG-CSF进行氨基酸组成分析。样品采用常规酸水解处理后,以氨基酸标准溶液外标法进行测定。结果系统对标准溶液各个氨基酸组分均有良好的分离。3支rhG-CSF样品的9次测定结果除Met外,均较接近,变异系数较小,与理论值基本一致。结论采用氨基酸自动分析仪柱后衍生法分析氨基酸组成重复性好,误差较小,可用于rhG-CSF的质量控制。
- 毕华饶春明刘兰袁力勇丁有学史新昌王军志
- 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子氨基酸组成离子交换色谱
- 人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体质控方法的建立被引量：7
- 2013年
- 目的建立人源化抗表皮生长因子受体(Epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体的质控方法。方法采用体外细胞生长抑制试验测定人源化抗EGFR单抗的生物学活性;质谱法和还原型SDS-PAGE法测定其准确相对分子质量;去封闭后用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列;SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)法测定其纯度;反向液相色谱(RP-HPLC)法测定其肽图;定量PCR法和狭缝杂交法测定其外源性DNA残留量;其余项目按《中国药典》三部(2010版)要求进行。结果人源化抗EGFR单抗原液和成品的相对生物学活性分别为(100±20)%和(94±14)%;质谱法测得该单抗参考品轻、重链的相对分子质量分别为23 370.75和50 341.00,相对误差分别为0.005%和0.006%;还原型SDS-PAGE测得该单抗轻、重链的相对分子质量为27 000和53 400;轻、重链N-末端氨基酸序列均与理论一致;单抗原液的还原型SDS-PAGE纯度为98.5%;SEC-HPLC原液纯度为(98.39±0.05)%和成品SEC-HPLC纯度为(98.17±0.04)%;肽图图谱与理化参考品一致;定量PCR测得其外源DNA残留量小于100 pg/剂量;其他各项指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求及其他相关要求。结论初步建立了人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制。
- 陶磊饶春明王兰韩春梅李响高凯王军志
- 关键词：表皮生长因子受体人源化抗体
- 运用优化的毛细管等电聚焦电泳方法评价叶酸受体α单抗电荷不均一性被引量：1
- 2011年
- 目的:用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗(McAb)及其参照品的异构体分布,根据等电点差异,将样品带电荷的异构体分离开来,更好地评价叶酸受体α单抗电荷不均一性。方法:毛细管等电聚焦电泳条件:中性涂层的毛细管50μm×30cm(有效长度为20cm);阳极电泳缓冲液200mmo·lL-1磷酸,阴极电泳缓冲液300 mmo·lL-1氢氧化钠;聚焦电压25 kV,迁移电压30 kV,温度20℃检测波长280 nm。结果:用优化后的方法使样品的电荷异构体能够有效分离,电泳图谱与参照品电泳图谱一致。样品主峰峰面积百分比为60.59%,等电点为7.78,次主峰面积百分比为24.38%,等电点为7.59,主峰与次主峰分离度为1.185(USP)。连续5针进样,主峰面积百分比的RSD为7.05%,等电点的RSD为0.31%;次主峰面积的百分比RSD为5.99%,等电点的RSD为0.69%;待测样品在12 h内稳定。结论:采用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗的电荷不均一性,具有更高的分离度,更好的重现性,为质量控制提供了更准确的手段。
- 李响王兰陶磊裴德宁郭莹饶春明
- 关键词：毛细管电泳等电聚焦叶酸受体
- 聚乙二醇重组人血管内皮抑制素质控方法的建立
- 2011年
- 目的建立聚乙二醇重组人血管内皮抑制素的质控方法。方法采用内皮细胞迁移荧光分析法测定样品的生物学活性;反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定样品的纯度和含量;胰酶消化法测定肽图;其余项目按《中国药典》三部(2005版)和二部进行检测。结果用建立的生物学活性测定方法测定的3批原液的比活性分别为88.4、56.5和89.6 U/mg,3批成品的活性分别为标示量的81%、92%和151%;RP-HPLC法测定的3批成品蛋白含量分别为标示量的101.0%、97.0%和98.1%;RP-HPLC法和SDS-PAGE法测定的3批原液的纯度均大于99.9%;肽图分析结果均与对照品一致;其余各项指标均符合规定。结论所建立的质控方法为有效地控制聚乙二醇重组人血管内皮抑制素的质量奠定了基础。
- 李永红饶春明王兰韩春梅陶磊王军志
- 关键词：血管抑制素类生物学活性高效液相色谱法
- 血管内皮生长因子抑制剂生物学活性检测方法的建立被引量：11
- 2009年
- 目的建立血管内皮生长因子抑制剂（VEGF Trap）生物学活性检测方法。方法利用HEK293/D9/Flt-18R（al-pha）/Flt-IL18R（beta）,clone V3H9细胞系,通过荧光素酶检测系统（Steady-Glo Luciferase Assaysystem）进行VEGF Trap的生物学活性检测,用VEGF Trap参考品计算供试品的相对百分效价,并对该方法进行精密性和准确性验证。结果VEGF Trap供试品及参考品在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式：y=（A-D）/[1＋（X/C）^B]＋D。3批VEGF Trap原液和6批成品经3次测定,相对百分效价的平均值在（90.00±2.40）%～（116.77±16.50）%之间,变异系数均小于15%。1批VEGF Trap原液及成品经3次测定,回收率分别为（90.40±2.67）%和（117.20±18.12）%。结论已成功建立VEGF Trap生物学活性检测方法,该方法重复性好,准确性高,可作为VEGFTrap生物学活性的常规检测方法。
- 王兰饶春明李永红高凯王军志
- 关键词：血管内皮生长因子抑制剂生物学活性
