广东省医学科学技术研究基金(B2011088)
- 作品数:6 被引量:10H指数:2
- 相关作者:林仲秋姚婷婷易娟娟刘龙阳陈勍更多>>
- 相关机构:中山大学孙逸仙纪念医院佛山市妇幼保健院中山大学更多>>
- 发文基金:广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 干扰ALDH1A1表达的shRNA载体成功转染宫颈癌HeLa细胞及意义被引量:3
- 2013年
- 目的:采用shRNA转染构建干扰乙醛脱氢酶-1(ALDH1A1)表达的宫颈癌HeLa细胞,以进一步探讨ALDH1A1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,加入梯度浓度G418溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取对数生长期细胞,采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒(ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照质粒(shNC)转染宫颈癌HeLa细胞。5种重组质粒与Lipofectamine 2000脂质体的比例均为0.2μg:1μL,空白对照组中仅加入Lipofectamine2000脂质体。6 h后换液,24 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。结果:确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L;5种重组质粒均成功转染入HeLa细胞中。其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67%;ALDH1A1-574的转染效率为1.16%;ALDH1A1-740的转染效率为12.45%;ALDH1A1-921的转染效率为3.42%;shNC组的转染效率为1.02%。结论:干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好。
- 刘龙阳姚婷婷易娟娟陈勍张丙忠周晖彭永排林仲秋
- 关键词:RNA小分子干扰转染HELA细胞
- 基因芯片筛选上调miRNA-205表达后HeLa细胞相关基因被引量:6
- 2012年
- 目的:应用基因表达谱芯片技术筛查上调微小RNA-205(miR-205)表达后人宫颈腺癌细胞株HeLa细胞中差异表达基因,并探讨其功能及上调miR-205致癌机制。方法:应用含有23 232条人类全长基因的cDNA表达谱芯片,对上调miR-205表达的HeLa细胞及HeLa细胞原株的基因表达谱进行分析。结果:与HeLa细胞原株相比,上调miR-205表达的HeLa细胞中有差异表达的基因共172条,其中34条上调,138条下调。结论:基因芯片技术能够有效筛查出上调miR-205表达后HeLa细胞中差异表达基因,miR-205引发宫颈癌是多因素多基因共同作用的结果。
- 韦丽娅姚婷婷陈庆瑜沈青丽林仲秋
- 关键词:宫颈肿瘤HELA细胞芯片分析技术微RNAS
- OCT4在妇产科中的研究进展
- 2013年
- 八聚体结合因子4(OCT4)是秀丽隐杆线虫神经(POU)转录因子家族的一员,主要表达于胚胎干细胞、生殖细胞、胚胎性癌细胞和肿瘤干细胞中,被公认为是干细胞的标记物,在维持干细胞的多能性、自我更新能力及在肿瘤的恶性行为学中起着举足轻重的作用。同时OCT4也参与胚胎发育过程中多向性分化调节。近年来随着干细胞理论及其相关研究的发展,OCT4作为干细胞的标记物也被用于不同领域的研究中,综述其在妇产科领域的研究进展。
- 张微微陈勍
- 关键词:肿瘤干细胞胚胎干细胞间质干细胞
- 实时荧光定量PCR法测定has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p在不同HPV感染的宫颈癌细胞中的表达
- 2013年
- 目的探讨has-miR-429、has-miR-127-3 p及has-miR127-5 p在不同宫颈癌细胞中的表达水平。方法用SiHa、Hela和C33A三种宫颈癌细胞株,提取和纯化mRNA,逆转录成cDNA,在测定最佳反应条件后,采用实时荧光定量PCR技术测定has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p的表达情况,结合内参U6进行相对定量分析。结果 miR-429、miR-127-3p及miR127-5p在SiHa细胞相对于Hela细胞表达为(0.0031±0.0002),(59.3786±3.7024)和(0.0524±0.0148),相对于C33A细胞表达为(0.0059±0.0005),(15.5625±1.2780)和(0.0334±0.0103)。结论 has-miR-429、has-miR-127-3p及has-miR127-5p可能与宫颈癌的HPV感染相关。
- 姚婷婷刘秀婷张定梅禹夜林仲秋
- 关键词:SIHA细胞HELA细胞
- 采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义
- 2013年
- 目的:采用干扰乙醛脱氢酶1(ALDH-1)表达的慢病毒载体转染宫颈癌Hela细胞,构建干扰ALDH-1表达的稳转株,以利进一步探讨干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株的生物学特性。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取24孔板中对数生长的宫颈癌Hela细胞,吸弃旧培养液,加入400μL新培养基,分别加入4种干扰慢病毒液(ALDH-1、ALDH1-1719、ALDH1-740、ALDH1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照慢病毒液(LV3-NC),同时均加入Polybrene液。其中5种慢病毒液的加入量均为50μL(滴度均为1×108TU/mL),Polybrene的加入量为0.5μL(浓度为5 mg/L);24 h后换新鲜培养液,72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。然后采用最佳筛选浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,以获得稳定转染的干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株。结果:确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为0.9 mg/L;5种慢病毒载体均成功转染入宫颈癌Hela细胞中,经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定转染细胞株。结论:干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株成功构建。
- 刘龙阳张帝开易娟娟陈勍张丙忠陈志辽梁金晓林仲秋
- 关键词:氧化还原酶类乙醛慢病毒属HELA细胞
- 特异性干扰ALDH-1表达的子宫颈癌细胞系HeLa细胞的构建及鉴定被引量:1
- 2014年
- 乙醛脱氢酶1(ALDH-1)是细胞内乙醛氧化的解毒酶。短发夹状RNA(shRNA)以慢病毒为载体转染人宿主细胞后,可以整合到宿主DNA上发挥稳定持久的干扰效果。
- 刘龙阳易娟娟张帝开陈惠祯陈勃林仲秋
- 关键词:HELA细胞宫颈癌细胞系特异性乙醛脱氢酶宿主细胞解毒酶