国家自然科学基金(30860203)
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
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- 附红细胞体病研究进展
- 附红细胞体病（Eperythroz0Onosis）是由附红细胞体（Eperythrozoon）寄生于红细胞表面、血浆及骨髓内的一种以红细胞压积降低、血红蛋白浓度下降、白细胞增多、贫血、黄疸、发热等为主要临床特征的人兽共患...
- 贾立军张守发
- 关键词：附红细胞体病病原学
- 文献传递
- 吉林延边地区猪附红细胞体A1基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2012年
- 采用PCR方法扩增吉林延边地区猪附红细胞体A1基因片段,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序;分别构建A1重组pGEX-4T-1和PET-28-a表达质粒,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示:克隆的A1基因片段长1 044 bp,含有1个999 bp的开放阅读框,编码333个氨基酸,与GenBank中A1基因序列(AM265536)的同源性为97%;表达的融合蛋白分子量分别为64 ku和40 ku,能被猪附红细胞体阳性血清识别。表明该融合蛋白具有较好的免疫反应活性。
- 于龙政薛书江张守发
- 关键词：猪附红细胞体A1基因克隆
- 猪附红细胞体环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 为了建立猪附红细胞体的快速实用分子生物学检测方法,试验采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法,用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体进行检测以验证LAMP技术的特异性。结果表明:利用LAMP技术成功检测到猪附红细胞体基因区,此方法的灵敏度可达到5×105倍稀释的DNA分子水平,并且特异性强,对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体检测均为阴性。
- 李月梅薛书江邢莹郑秀红吕舟张守发
- 关键词：猪附红细胞体环介导等温扩增技术
- 牛附红细胞体单管套式PCR检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 为快速、准确地检测出牛附红细胞体,根据GenBank上发表的牛温氏附红细胞体(Mycoplasma wenyonii)l6S rRNA基因序列(登录号AF016546)设计合成内外2对引物,建立了牛附红细胞体单管套式PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性及应用试验。结果:建立的牛附红细胞体单管套式PCR检测方法扩增的片段大小为361 bp,与GenBank中相应序列同源性为98%,该方法扩增不出牛瑟氏泰勒虫、新孢子虫、布氏杆菌及牛无乳链球菌等基因片段,检测出标准模板DNA的最小量为1.22 fgμ/L。通过对吉林省延边地区66份血液样本的临床检测显示,单管套式PCR检出率28.8%,高于常规PCR的21.2%和鲜血压片镜检的12.1%,具有准确、特异、敏感等优点,是检测牛附红细胞体的一种新型、可靠的诊断技术。
- 邢莹郑秀红贾立军薛书江张守发
- 关键词：RRNA
- 东北三省猪附红细胞体16S rRNA核苷酸序列比对
- 为了解东北三省猪附红细胞体基因变异情况,采用CTAB法分别提取黑龙江株、辽宁株、吉林株猪附红细胞体基因组DNA。通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出了一条约541bp的基因片段,与预期结果相一致,并分别将黑龙江株、辽宁株、...
- 李月梅陈莹贾立军张守发
- 关键词：东北三省猪附红细胞体
- 文献传递
- 猪附红细胞体巢式PCR诊断方法的建立及初步应用被引量：2
- 2011年
- 为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法,本试验根据猪附红细胞体特异的DNA序列(AJ504999)设计2对巢式PCR引物,建立了巢式PCR检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR对猪附红细胞体基因组DNA能扩增出特异性片段,而对弓形虫、链球菌、牛瑟氏泰勒虫、牛附红细胞体基因组DNA扩增反应结果均为阴性;DNA最低检测量为0.124 fg/μL;通过对55份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR的阳性检出率高23.7%。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。
- 郑秀红邢莹贾立军薛书江甄立家张守发
- 关键词：猪附红细胞体巢式PCR
- 猪附红细胞体膜蛋白OxaA的克隆及生物信息学分析
- 为研究猪附红细胞体膜蛋白OxaA的结构及其在免疫保护中的功能。本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体(猪支原体NC 015153.1)全基因组序列中膜蛋白OxaA基因,对猪附红细胞体膜蛋白OxaA基因进行PCR扩增...
- 张影贾立军薛书江钱年超张守发
- 文献传递
- 猪附红细胞体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2013年
- 为建立一种能定性与定量检测猪附红细胞体的方法,根据GenBank中猪附红细胞体的16SrRNA基因高度保守区设计了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了一种快速检测猪附红细胞体核酸载量的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法在107～101 copies/μL具有良好的线性关系(RSq=0.999)。能检测到模板的下限为30copies,灵敏度是普通PCR检测方法的100倍。该检测方法与其他猪常见病病原体无交叉反应,具有良好的重复性。对临诊疑似猪附红细胞体感染猪血液进行了检测,其检出率比常规PCR方法高10%。表明该方法可用于临床上猪附红细胞体的检测及定量分析。
- 高旭张守发许应天贾立军于龙政薛书江
- 关键词：猪附红细胞体实时荧光定量PCR
- 猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法的建立及应用被引量：9
- 2011年
- 根据GenBank上发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号U88565)设计合成2对引物,建立了猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法,经酶切分析、单管巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定,并与血涂片染色镜检、常规PCR进行了比较。结果:扩增的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为96%;特异性试验表明,设计的引物不能扩增弓形虫、链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌及羊附红细胞体等病原体;敏感性试验表明,单管巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.116 fg的标准模板DNA。通过对75份血液样本的检测表明,建立的单管巢式PCR方法明显优于血涂片染色镜检法及常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性。本试验建立的单管巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等优点,为猪附红细胞体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。
- 郑秀红贾立军邢莹张守发
- 关键词：猪附红细胞体
- 吉林延边地区猪支原体A1基因的克隆与生物信息学分析被引量：3
- 2011年
- 对延边地区猪支原体A1基因进行分子克隆,并利用生物信息学软件对A1基因进行了同源性、系统进化树、编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析。结果显示,克隆的A1基因由1 044个核苷酸组成,编码333个氨基酸。与GenBank中的猪支原体A1基因序列(AM265536)的同源性为97.0%。该基因与嗜血支原体的同源性最高(68.4%)。A1基因编码蛋白的等电点为4.69,存在跨膜区。表明克隆的A1基因具有潜在的抗原性。同时,进一步证实了猪支原体的分子分类。
- 薛书江张守发钱年超
- 关键词：A1基因生物信息学分析
